飼料中霉菌總數(shù)測(cè)定方法

1、精品文檔霉菌總數(shù)檢測(cè)操作規(guī)程1 原理根據(jù)霉菌生理特性，選擇適宜霉菌生長(zhǎng)而不適宜細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，采用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定霉菌總數(shù)。2 試劑與儀器2.1 所用器具三角燒瓶、玻璃珠、具塞試管、培養(yǎng)皿、1000山槍頭、5ml槍頭、稱量勺、接種環(huán)、接種針、移液器2.2 儀器：分析天平、恒溫培養(yǎng)箱、微型振蕩器、超凈工作臺(tái)、高壓滅菌鍋2.3 所用試劑和培養(yǎng)基高鹽察氏培養(yǎng)基取高鹽察氏培養(yǎng)基109g ， 加入蒸餾水1l， 攪拌加熱 至完全溶解， 分裝三角瓶， 115 高壓滅菌 30 min ，備用。3、操作步驟3.1 配制 0.85% 生理鹽水稱取氯化鈉 8.5g 溶于 1000ml 蒸餾水中。3.2 錐形瓶加入生

2、理鹽水90ml ，試管中加入生理鹽水9ml ， 121 滅菌 30min 。 （三角燒瓶個(gè)數(shù)與樣品數(shù)量一致，試管數(shù)量與稀釋次數(shù)相關(guān)） 。3.3 將1000人槍頭、培養(yǎng)皿、5ml槍頭、稱量勺、帶6顆玻璃珠具塞試管，121c滅菌 30min 。 （注意計(jì)算數(shù)量）3.4 槍頭、培養(yǎng)皿置于烘箱 103 烘干。 （1-3 步需提前一天完成）3.5 對(duì)稱量房間進(jìn)行紫外滅菌 30 分鐘，關(guān)燈靜置60 min 。以無(wú)菌操作取樣品 10g 于含90ml 生理鹽水三角燒瓶中，于振蕩器上振蕩 30min ，制成 1:10 的均勻稀釋液。3.6 吸取 1:10 稀釋液 10ml 注入帶玻璃珠的試管，置微型混合器上混合

3、3min 。3.7 用1000人槍頭吸取1:10稀釋液1ml,沿管壁慢慢注入含有滅菌生理鹽水 9ml的試管中，于振蕩器上混合均勻，制成1:100 的均勻稀釋液。3.8 另取一只 1ml 滅菌吸管，按照上述操作方法，作10 倍遞增稀釋，如此每遞增稀釋一次，更換一支滅菌吸頭。3.9 選擇 3 個(gè)適宜稀釋度，分別在作10 倍遞增稀釋的同時(shí)，吸取該稀釋的吸管移 1ml 稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度作兩個(gè)培養(yǎng)皿。3.10 稀釋液移入培養(yǎng)皿后，及時(shí)將涼至 46 c rc的高鹽察氏培養(yǎng)基（可放置 46 c 1 c 水浴鍋內(nèi)保溫）注入培養(yǎng)皿約15ml ,小心轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿使試樣與培養(yǎng)基充分混勻。3.11 待瓊脂

4、凝固后，倒置平皿于28 c 1。叵溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3天后開始觀察，培養(yǎng)觀察 一周。計(jì)算平板內(nèi)菌落總數(shù)目，菌落總數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即得每克試樣所含霉菌總數(shù)。4霉菌總數(shù)計(jì)算方法做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀察，如菌落形態(tài)較小可借助放大鏡觀察。在計(jì)算出各 平板菌落總數(shù)后，求出同稀釋度的兩個(gè)平板菌落的平均值。4.1 霉菌總數(shù)的報(bào)告形式菌落總數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按其實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采用兩位有效數(shù)字，在兩 位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法修約。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可以用10的指數(shù)表示。（見表1）4.2 霉菌總數(shù)計(jì)數(shù)的報(bào)告4.2.1 平板霉菌總數(shù)的選擇選擇菌落總數(shù)在10100之間的平板進(jìn)行霉菌總

5、數(shù)測(cè)定，每一稀釋度使用兩個(gè)平板菌 落的平均數(shù)。兩個(gè)平板其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)不宜采用；若片狀菌落不到平 板的一半，而另一半菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘2以代表全平皿霉菌總數(shù)。 4.2.2稀釋度的選擇應(yīng)選擇平均菌落總數(shù)在10100之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見表1中例 次1）若有兩個(gè)稀釋度，其生長(zhǎng)的菌落總數(shù)均在10100之間，則視兩者之比如何來(lái)決定。 若其比值（高稀釋度數(shù)值：低稀釋度數(shù)值） 2,應(yīng)報(bào)告其平均值；若2則報(bào)告其中較小 的數(shù)字（見表1中例次2及例次3）。若所有稀釋度的平均菌落總數(shù)均大于 100 ,則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落總數(shù)乘以 稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見表1中例次

6、4）。若所有稀釋度的平均菌落總數(shù)均小于 10 ,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落總數(shù)乘以稀 釋倍數(shù)報(bào)告之（見表1中例次5）。若所有稀釋度均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1乘以最低稀釋度報(bào)告之（見表1中例次6）。若所有稀釋度的平均菌落總數(shù)均不在 10100之間，其中一部分100,或者小于 10時(shí)，則以最接近10或100的平均菌落總數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見表 1中例次7）。表1稀釋度選擇及菌落總數(shù)報(bào)告方式例稀釋液及菌落總數(shù)稀釋液稀釋度選擇霉菌總數(shù)報(bào)告方式次10-110-210 3之比/cfu/g(ml)/cfu/g (ml)1多不可計(jì)808一取平均菌落總數(shù)在10100 之間的稀釋度80008.0 x1032多不可計(jì)87121.410100 之間，比值(12000 :8700 ) w2,報(bào)告平均值103501.0 x1043多不可計(jì)95202.110100 之間，比值(20000 :9500 ) 2,報(bào)告較小的數(shù)值95009.5 x1034多不可計(jì)多不可計(jì)110一所有稀釋度的平均菌落總數(shù)均大于100 ,報(bào)告稀釋度最高的數(shù)1100001.1 x1055920一所有稀釋度的平均菌落總數(shù)均小于10,報(bào)告稀釋度最低的數(shù)90906000一所有稀釋度均無(wú)由落生長(zhǎng)，則以