【2019年整理】蛙心灌流實驗

1、深圳大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院創(chuàng)新實驗論文基礎(chǔ)生物學(xué)創(chuàng)新實驗10學(xué)分課程名稱：細(xì)胞與遺傳學(xué)創(chuàng)新實驗10學(xué)分生化與分子生物學(xué)創(chuàng)新實驗生物科學(xué)10學(xué)分生物技術(shù)15學(xué)分 實驗項目來源：創(chuàng)新實驗課程指定實驗項目課外科技創(chuàng)新實驗項目：資助單位 項目編號實驗項目名稱： 不同因素對離體蛙心灌流的現(xiàn)象觀察 實驗項目學(xué)分：指導(dǎo)教師：黃瑛姓名：學(xué)號：專業(yè)：實驗時間：_論文提交時間:深圳大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院創(chuàng)新實驗論文評分表評價方面權(quán)重評分平時表現(xiàn)：（包括實驗態(tài)度、實驗室常識、實驗習(xí)慣、 實驗技能、原始記錄等方面）20分實驗方案設(shè)計：（包括開展本項實驗研究的理論基礎(chǔ)、研 究目的、技術(shù)路線、研究方法、實驗進(jìn)度 安排、可行性分析等。

2、）20分論文：（嚴(yán)格按照正規(guī)期刊要求的格式撰寫論 文。主要評價指標(biāo)：是否按照科學(xué)的研究 方法完成實驗，實驗結(jié)果是否翔實、充足， 論文撰寫是否規(guī)范，分析討論是否合理到 位。）60分合計100分指導(dǎo)老師簽字：生物科學(xué)教學(xué)實驗中心制不同因素對離體蛙心灌流的現(xiàn)象觀察【摘要】本次試驗通過用不同的試劑及條件對離體蛙心進(jìn)行灌流，利用生物信息采集系統(tǒng)對蛙心的搏動進(jìn) 行分析。結(jié)果表明不同和的條件及物質(zhì)對蛙心的搏動有不同的影響?！娟P(guān)鍵詞】蛙心灌流 不同物質(zhì) 收縮搏動1 材料與方法1.1 實驗動物 蟾蜍1.2 實驗試劑 有鈣任氏液、無鈣任氏液、50C有鈣任氏液、4 C有鈣任氏液、1:10000mg/L 乙酰膽堿溶液

3、、 1:10000mg/L 腎上腺素溶液、 1%乳酸溶液、 2.5%NaHCO 3溶液、 1%KCl 溶 液、2%CaCI2 溶液、5%CaCI2 溶液、5%NaCI 溶液1.3 實驗儀器 BL-420 生物信號采集系統(tǒng)、蛙心夾、蛙心插管、鐵支架、剪刀、張力傳感 器、燒杯、滴管、釘子、線1.4 方法與步驟1.4.1 在體蛙心實驗 取一只蛙， 雙毀髓，腹部朝上固定于蛙板上。 用鑷子提起劍突處皮膚，用粗剪刀剪一小口，由切口處向上呈“V形剪開胸骨表面皮膚，提起劍突，將粗剪刀伸入胸腔內(nèi)，緊貼胸壁（避免損傷心臟和血管）沿中線剪開胸骨，打開胸腔。用鑷子提起心包膜， 并用眼科剪刀仔細(xì)剪開心包， 暴露出心臟。

4、 用蛙心夾夾住心尖部， 將蛙心夾上的系線繞過滑 輪與張力傳感器相連，連接 1 通道。調(diào)節(jié)滑輪位置，使心臟不離開體腔且能記錄心搏曲線。依次使用4C有鈣任氏液、50C有鈣任氏液灌流蛙心，記錄心電圖。1.4.2 離體蛙心實驗 取一只蛙， 雙毀髓， 腹部朝上固定于蛙板上。 用鑷子提起劍突處皮膚，用粗剪刀剪一小口，由切口處向上呈“V形剪開胸骨表面皮膚，提起劍突，將粗剪刀伸入胸腔內(nèi)，緊貼胸壁（避免損傷心臟和血管）沿中線剪開胸骨，打開胸腔。用鑷子提起心包膜， 并用眼科剪刀仔細(xì)剪開心包， 暴露出心臟。 在主動脈干下方引 2 根線。 一條在左主動脈上端 結(jié)扎作插管時牽引用， 另一根則在動脈圓錐上方， 系一松結(jié)用

5、于結(jié)扎固定蛙心插管。 左手持 左主動脈上方的結(jié)扎線， 用眼科剪在松結(jié)上方左主動脈根部剪一小斜口， 右手將盛有少許任 氏液的大小適宜的蛙心插管由此剪口處插入動脈圓錐。 當(dāng)插管頭到達(dá)動脈圓錐時， 有將插管 稍稍后退， 并轉(zhuǎn)向心室中央方向， 在心室收縮期插入心室。 判斷蛙心插管是否進(jìn)入心室可根 據(jù)插管內(nèi)的任氏液的液面是否能隨心室的舒縮而上下波動。如蛙心插管已進(jìn)火心室， 則將預(yù)先準(zhǔn)備好的松結(jié)扎緊， 并固定在蛙心插管的側(cè)鉤上以免蛙心插管滑出心室。 剪斷主動脈左右 分支。 輕輕提起蛙心插管以抬高心臟， 用一線在靜脈竇與腔靜脈交界處作一結(jié)扎， 結(jié)扎線應(yīng) 盡量下壓， 以免傷及靜脈竇，在結(jié)扎線外側(cè)剪斷所有組織，

6、將蛙心游離出來。用新鮮任氏液 反復(fù)換洗蛙心插管內(nèi)含血的任氏液，直至蛙心插管內(nèi)無血液殘留為止。依次使用4C有鈣任氏液、50 C有鈣任氏液、1%KCI溶液、2%CaCI2溶液、5%CaCI2溶液、5%NaCI溶液、1:10000 乙酰膽堿溶液、 1:10000 腎上腺素溶液、 1%乳酸溶液、 2.5%NaHCO3 溶液灌流蛙心，待效果 明顯后，記錄心電圖，用有鈣任氏液灌流幾次，待搏動恢復(fù)正常后進(jìn)行下一項物質(zhì)的灌流。2 結(jié)果2.1 在體蛙心實驗nV3.0-3.0-9.0 -12.0-15.0 1*|1|1*11I03.5r.512 51? 522 53J.357.5 s圖1-1在體蛙心滴加常溫任氏液

7、的心電圖圖1-2在體蛙心滴加50C有鈣任氏液的心電圖在體蛙心滴加50 C有鈣任氏液后，心跳頻率變大。mV-3 0-9 0 -)3 0 -T I 11 I 1I3.311313.316.31 E圖1-3在體蛙心滴加4 C有鈣任氏液的心電圖 在體蛙心滴加4C有鈣任氏液后，心跳頻率變緩變小。2.2離體蛙心灌流實驗2.2.1離體蛙心正常心電圖-1. 1*1 S-2.2 -2-5 -2.9 -3.Z-3.67 0 -4310 014 0 ie 022.030.0 Sd.O 33.0J2.0 =值值II頻呈星平率：屹決/分:-1 59&:-2 03S:-1 7Tg圖2-1離體蛙心正常心電圖 離體蛙心正常心

8、電圖，心跳頻率為42次/分0 2.0 10.0頻 率:29次扮皋大值：1 Wg攝小值:-2.49g平均値:-1 09(2.2.2 離子的影響圖2-2離體蛙心滴加1%KCI溶液的心電圖離體蛙心滴加1%KCI溶液后，搏動曲線的幅度變小，心跳頻率變大。T I-2.2 J-2 52,9瀕 率:沁汾屋犬值：T.5gIfcbffl : -2.03c平均值:-1.76圖2-3離體蛙心滴加 2%CaC2溶液的心電圖 離體蛙心滴加2%CaCl2溶液后，心跳頻率漸漸變大。:&大:值：-2 ffft 昂小值:-3. 71 ( 平均值：-3. 27吉圖2-4離體蛙心滴加5% CaCb溶液的心電圖 離體蛙心滴加5% C

9、aCb溶液后，心跳頻率迅速變大。-4 702 06.010 0 血 013.02Z.02$. 0頻 率：騎次妙ft*值:-1.61璟小值:-2 05e平溝值：-1,34莒圖2-5離體蛙心滴加5%NaCI溶液的心電圖離體蛙心滴加5%NaCI溶液后，心跳頻率變化不大。223遞質(zhì)的影響O 值值值2小均 頻最最平1I*.035O 現(xiàn)O 呱O2O?O8.圖2-6離體蛙心滴加1:10000腎上腺素心電圖離體蛙心滴加1:10000腎上腺素后，心跳頻率變大。-舊堿J.t) Z.4b.t)10 014.C kS.O 22 2ft 0 Sfl.O Sd.O 5P.0 碇 0 網(wǎng)0 Sfl.O Sfl.C頻 率：霸

10、劃分壘尢IS : -1.T4frbffi: -2.5Te平均疽：-Z.OGj圖2-7離體蛙心滴加1:10000乙酰膽堿心電圖離體蛙心滴加1:10000乙酰膽堿后，心跳頻率變小。224 溫度的影響量大值:-1.6U撮小值:-2. 13t平均值:-1.84r圖2-8離體蛙心滴加50C任氏液心電圖離體蛙心滴加50 C任氏液后，心跳頻率變大。0 Z.O 6.0 W.O U.0 IS 0 ZZ.O 26.030.031,0=頻 率：4引知甘最大值t -1.63最小值:-2,4&S平均值:-1.95(圖2-9離體蛙心滴加4C任氏液心電圖離體蛙心滴加4C任氏液后，心跳頻率變小。2.2.4酸堿的影響理 事=a

11、eK/Jd繪戈何：T.65工-E.53f平均 tir-i.ilt：圖2-10離體蛙心滴加1%乳酸后加入2.5%NaHCO3溶液中和的心電圖離體蛙心滴加1%乳酸溶液后，心跳頻率逐漸變小，加入2.5%NaHCO 3溶液中和后，心臟搏動逐漸恢復(fù)正常，說明H+會抑制心跳，使心臟舒張能力減小，從而使搏動曲線幅度變小。3討論與結(jié)論離體心臟灌流是研究心臟功能的重要手段之一，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥學(xué)等教學(xué)和科研工作中。采用離體心臟灌流系統(tǒng)可以直觀地觀察心臟的活動，研究心臟舒縮功能，心率和節(jié)律變化，前后負(fù)荷及各種體液因素等對心臟功能的影響1。進(jìn)行離體心臟灌流實驗，首先需要保證心臟在體外較長時間存活，然后根據(jù)

12、實驗?zāi)康倪M(jìn)行灌流和施加實驗因素 2。蛙心灌流實驗的關(guān)鍵就在“蛙心插管”，這是一個相對較難的實驗操作，往往因為插管不順利或失敗導(dǎo)致整個實驗的失敗。插管失敗的常見原因主要有：插管進(jìn)入左主動脈后，難以將管尖插入心室，導(dǎo)致反復(fù)插管，或久插不進(jìn),易發(fā)生心臟瓣膜及心肌損傷 ,使心律失常發(fā)生率增高或蛙心搏動減弱，導(dǎo)致實驗失敗；插管前，阻斷心臟的血流，使心臟短時間內(nèi)停止收縮射血，血液聚集于心腔使心臟過分膨大 ,妨礙蛙心插管并可能影響心肌的活性； 在腔靜脈結(jié)扎時， 誤將靜脈竇與腔靜脈血管一起結(jié)扎， 致使心臟停止跳動； 由于插管不順 利，耽誤時間較長， 未能及時將蛙心管和蛙心內(nèi)的血液沖洗干凈， 致血液凝固堵塞管口，使 插管失敗 3 。本實驗中采用了不同條件對蛙心的影響，如不同溫度、不同遞質(zhì)、不同離子以 及酸堿作用。在一定溫度范圍內(nèi)，高溫使心跳加快，而低溫使心跳減慢。腎上腺素使心臟的 興奮性增強(qiáng)了，促進(jìn)的心臟的搏動；乙酰膽堿使信號傳遞變慢了，從而抑制了心臟的搏動。Ca離子對心跳有一定的促進(jìn)作用，增強(qiáng)心臟的收縮能力；K離子對心跳有一定的抑制作用，會減弱心臟的收縮能力；Na離子和CI離子對心跳影響不大。乳酸會使心跳頻率迅速下降， 若不及時加入 NaHCO 3中和，會導(dǎo)致蛙心停止搏動。實驗表明