病毒感染檢查方法與防治原則

1、病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 第第2525章章 病毒感染的檢查病毒感染的檢查 方法與防治原則方法與防治原則 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 內(nèi)內(nèi) 容容 第一節(jié)第一節(jié) 病毒感染的診斷病毒感染的診斷( (檢查方法）檢查方法） 第二節(jié)第二節(jié) 病毒感染的特異性預(yù)防病毒感染的特異性預(yù)防( (自學(xué)）自學(xué)） 第三節(jié)第三節(jié) 病毒感染的治療（自學(xué)）病毒感染的治療（自學(xué)） 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 第一節(jié)第一節(jié) 病毒感染的診斷病毒感染的診斷 （Diagnosis of viral infection） 標(biāo)本采集與送檢原則標(biāo)本采集與送檢原則

2、病毒感染的檢查方法病毒感染的檢查方法 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 一、標(biāo)本采集與送檢原則一、標(biāo)本采集與送檢原則 按疾病種類與病程采取不同標(biāo)本按疾病種類與病程采取不同標(biāo)本 在發(fā)病早期與用藥之前采取標(biāo)本在發(fā)病早期與用藥之前采取標(biāo)本 無(wú)菌操作，有菌標(biāo)本用無(wú)菌操作，有菌標(biāo)本用“雙抗雙抗”（青、鏈霉素）（青、鏈霉素） 或或 “三抗三抗”（青、鏈霉素（青、鏈霉素+ +兩性霉素兩性霉素B B）處理）處理 冷藏速送，病變組織用冷藏速送，病變組織用5050甘油保存甘油保存 血清學(xué)檢測(cè)：血清學(xué)檢測(cè)：IgM IgM 單份血清單份血清, , IgG IgG 雙份血清雙份血清 病毒感染檢查方法

3、與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 二、檢查方法二、檢查方法 病毒的形態(tài)學(xué)檢查病毒的形態(tài)學(xué)檢查 病毒的血清學(xué)檢查病毒的血清學(xué)檢查 病毒的分子生物學(xué)檢查病毒的分子生物學(xué)檢查 病毒的分離培養(yǎng)與鑒定病毒的分離培養(yǎng)與鑒定 快速診斷快速診斷 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 1. 1. 病毒形態(tài)學(xué)病毒形態(tài)學(xué)檢查檢查 電子顯微鏡：電子顯微鏡：可觀察各種病毒的形態(tài)可觀察各種病毒的形態(tài) 但設(shè)備貴、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限但設(shè)備貴、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限 光學(xué)顯微鏡：光學(xué)顯微鏡：可觀察大病毒（痘病毒）和包涵體可觀察大病毒（痘病毒）和包涵體 對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大 病毒感染檢查方

4、法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 Electronmicrographs 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 Inclusion body Cytomegalic cell that contains a dense, owls eye, acidophilic intranuclear inclusion body Negry body 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 2. 2. 病毒血清學(xué)病毒血清學(xué)檢查檢查 已知抗原已知抗原測(cè)抗體（診斷）測(cè)抗體（診斷） 已知抗體已知抗體測(cè)抗原（鑒定病毒屬、種、測(cè)抗原（鑒定病毒屬、種、 型、亞型）型、亞型） 病毒

5、感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 ( (1 1) ) 中和試驗(yàn)中和試驗(yàn)(Neutralization test)(Neutralization test) (2)(2) 血凝抑制試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)(H(Hemagglutinatiemagglutination ion inhibition testnhibition test) ) ( (3 3) ) 免疫標(biāo)記法免疫標(biāo)記法( (FIAFIA、EIAEIA、RIARIA) ) (4) (4) 蛋白印跡蛋白印跡(Western blot)(Western blot) 2. 2. 病毒血清學(xué)病毒血清學(xué)檢查檢查 方法：方法： 病毒感染檢

6、查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 Immunofluorescense test 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 Immunofluorescense test Positive immunofluorescence test for rabies virus antigen. (Source: CDC) 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 HEL細(xì)胞中細(xì)胞中CMV IE1蛋白的表達(dá)蛋白的表達(dá) Enzyme immunoassay (EIA) 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 ELISA Coloured wells ind

7、icate reactivity 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 AIDS的確診試驗(yàn)的確診試驗(yàn) Western blot 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 3. 3. 病毒分子生物學(xué)病毒分子生物學(xué)檢查檢查 可用于檢測(cè)常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng)不能培養(yǎng)的病毒可用于檢測(cè)常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng)不能培養(yǎng)的病毒 可用于檢測(cè)少量標(biāo)本或含少量病毒的標(biāo)本可用于檢測(cè)少量標(biāo)本或含少量病毒的標(biāo)本 可用于抗體產(chǎn)生前或不能產(chǎn)生抗體的免疫缺陷患者檢測(cè)可用于抗體產(chǎn)生前或不能產(chǎn)生抗體的免疫缺陷患者檢測(cè) 可對(duì)病毒進(jìn)行定量檢測(cè)，有助于療效監(jiān)測(cè)可對(duì)病毒進(jìn)行定量檢測(cè)，有助于療效監(jiān)測(cè) 可對(duì)病毒進(jìn)行可對(duì)病毒進(jìn)行基因分型

8、基因分型 靈敏度高、特異性好、快速、簡(jiǎn)捷靈敏度高、特異性好、快速、簡(jiǎn)捷 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 3. 3. 病毒分子生物學(xué)病毒分子生物學(xué)檢查檢查 核酸電泳核酸電泳(nucleic acid electrophoresis)(nucleic acid electrophoresis) 核酸雜交核酸雜交(nucleic acid hybridization)(nucleic acid hybridization) 核酸擴(kuò)增核酸擴(kuò)增(PCR(PCR） 基因芯片基因芯片(gene chip)(gene chip) 基因測(cè)序基因測(cè)序(gene sequence

9、)(gene sequence) 方法：方法： 4. 4. 病毒的分離培養(yǎng)與鑒定病毒的分離培養(yǎng)與鑒定 : 病毒的分離培養(yǎng)病毒的分離培養(yǎng) 病毒的鑒定病毒的鑒定 病毒數(shù)量及感染性測(cè)定病毒數(shù)量及感染性測(cè)定 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 病毒的分離培養(yǎng)方法：病毒的分離培養(yǎng)方法： 動(dòng)物接種動(dòng)物接種 雞胚培養(yǎng)雞胚培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng) : 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 動(dòng)物接種動(dòng)物接種(animal inoculation)(animal inoculation) 動(dòng)物：鼠、兔、猴、黑猩猩等動(dòng)物：鼠、兔、猴、黑猩猩等 優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀察，可建立動(dòng)物模型優(yōu)點(diǎn)：結(jié)

10、果易觀察，可建立動(dòng)物模型 缺點(diǎn)：有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高、動(dòng)物缺點(diǎn)：有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高、動(dòng)物 體內(nèi)常帶有潛伏病毒。體內(nèi)常帶有潛伏病毒。 目前已很少應(yīng)用。目前已很少應(yīng)用。 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 雞胚培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)(embryonated egg culture)(embryonated egg culture) 受精卵受精卵 孵育孵育9-149-14天天 雞胚雞胚 接種病毒接種病毒 孵育孵育2-72-7天天 收獲相應(yīng)的材料進(jìn)行鑒定收獲相應(yīng)的材料進(jìn)行鑒定 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 雞胚接種部位：雞胚接種部位： 尿囊腔接種尿囊腔接種 絨毛尿

11、囊膜絨毛尿囊膜接種接種 卵黃囊卵黃囊接種接種 羊膜腔羊膜腔接種接種 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 易管理易管理 不帶微生物不帶微生物 成本較低成本較低 缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 操作程序復(fù)雜操作程序復(fù)雜 目前用雞胚培養(yǎng)的病毒主要是流感病毒目前用雞胚培養(yǎng)的病毒主要是流感病毒 雞胚培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)(embryonated egg culture)(embryonated egg culture) 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 (3) (3) 細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)(cell culture)(cell culture) 根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的方式分根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的方式

12、分: : 單層細(xì)胞培養(yǎng)單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayer cell culture） 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 根據(jù)細(xì)胞來(lái)源、染色體特征及傳代次數(shù)分根據(jù)細(xì)胞來(lái)源、染色體特征及傳代次數(shù)分: : 原代培養(yǎng)細(xì)胞原代培養(yǎng)細(xì)胞 二倍體細(xì)胞株二倍體細(xì)胞株 傳代細(xì)胞系或株傳代細(xì)胞系或株 (3) (3) 細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng) (cell culture) 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 原代培養(yǎng)細(xì)胞原代培養(yǎng)細(xì)胞（primary cultural cells) 組織組織 組織塊組織塊 分散的單個(gè)細(xì)胞分散的單個(gè)細(xì)胞 單層細(xì)胞單層細(xì)胞 剪碎剪碎 蛋白酶蛋白酶 ( (原代細(xì)

13、胞原代細(xì)胞) ) 單層細(xì)胞單層細(xì)胞 ( (次代細(xì)胞次代細(xì)胞) ) 傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng) 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 原代培養(yǎng)細(xì)胞原代培養(yǎng)細(xì)胞（primary cultural cells) epithelial cells 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 原代培養(yǎng)細(xì)胞原代培養(yǎng)細(xì)胞（primary cultural cells) 特點(diǎn)特點(diǎn): : 對(duì)多種病毒敏感對(duì)多種病毒敏感 生長(zhǎng)能力有限生長(zhǎng)能力有限, , 獲取成本高獲取成本高 可攜帶潛伏病毒可攜帶潛伏病毒 應(yīng)用應(yīng)用: : 病毒分離與鑒定病毒分離與鑒定 病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)研究病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)研究 不能用

14、于制備疫苗不能用于制備疫苗 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 體外分裂體外分裂5050100100代仍保持二倍染色體數(shù)目的單層細(xì)胞代仍保持二倍染色體數(shù)目的單層細(xì)胞 特點(diǎn)特點(diǎn): : 對(duì)多種病毒敏感對(duì)多種病毒敏感 不帶異種蛋白不帶異種蛋白( (人源性人源性) ) 不帶病毒不帶病毒, ,無(wú)致瘤潛能無(wú)致瘤潛能 應(yīng)用應(yīng)用: : 病毒分離與鑒定病毒分離與鑒定 病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)研究病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)研究 制備疫苗制備疫苗 二倍體細(xì)胞株二倍體細(xì)胞株 (diploid cell strain) fibroblastic cells 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 傳代細(xì)胞系傳代細(xì)胞系

15、 (continuous cell line ) 特點(diǎn)特點(diǎn): : 對(duì)多種病毒敏感性高對(duì)多種病毒敏感性高 繁殖能力強(qiáng)繁殖能力強(qiáng), ,傳代時(shí)間長(zhǎng)傳代時(shí)間長(zhǎng) 有致癌危險(xiǎn)有致癌危險(xiǎn)( (來(lái)源于癌細(xì)胞來(lái)源于癌細(xì)胞 或突變的二倍體細(xì)胞株或突變的二倍體細(xì)胞株) ) 應(yīng)用應(yīng)用: : 病毒分離與鑒定病毒分離與鑒定 病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)研究病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)研究 不能用于制備疫苗不能用于制備疫苗 能在體外無(wú)限傳代的細(xì)胞系。如能在體外無(wú)限傳代的細(xì)胞系。如 HeLa, Hep-2 epithelioid cells 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 4. 病毒的分離培養(yǎng)與鑒定病毒的分離培養(yǎng)與鑒定 : 病毒的分離培養(yǎng)

16、病毒的分離培養(yǎng) 病毒的鑒定病毒的鑒定 病毒數(shù)量及感染性測(cè)定病毒數(shù)量及感染性測(cè)定 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 病毒鑒定：病毒鑒定： 病毒在細(xì)胞中增殖的指標(biāo)病毒在細(xì)胞中增殖的指標(biāo) 病毒形態(tài)學(xué)鑒定病毒形態(tài)學(xué)鑒定 病毒抗原鑒定病毒抗原鑒定 病毒基因鑒定病毒基因鑒定 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 細(xì)胞病變效應(yīng)細(xì)胞病變效應(yīng) ( cytopathic effect, CPE) 病毒在敏感細(xì)胞內(nèi)增殖引起的光鏡下病毒在敏感細(xì)胞內(nèi)增殖引起的光鏡下 可見(jiàn)的細(xì)胞病理改變?？梢?jiàn)的細(xì)胞病理改變。 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 CPECPE：病毒感染

17、細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變：病毒感染細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 Syncytium formation in cell culture caused by RSV (top), and measles virus (bottom). CPECPE：病毒感染細(xì)：病毒感染細(xì) 胞與鄰近細(xì)胞融合胞與鄰近細(xì)胞融合 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 CPECPE：形成包涵體（：形成包涵體（inclusion bodyinclusion body） 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 Syncytial formation caused

18、 by mumps virus and haemadsorption of erythrocytes onto the surface of the cell sheet. 紅細(xì)胞吸附紅細(xì)胞吸附（hemadsorption, HAd） 受染細(xì)胞膜表面血凝素（受染細(xì)胞膜表面血凝素（HAHA） RBCRBC表面表面HAHA受體受體 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 干擾現(xiàn)象干擾現(xiàn)象（interference） 風(fēng)疹病毒人胚腎細(xì)胞風(fēng)疹病毒人胚腎細(xì)胞 病毒增殖，病毒增殖，CPECPE（）（） ?？刹《救伺吣I細(xì)胞?？刹《救伺吣I細(xì)胞 病毒增殖，病毒增殖，CPECPE（）（） 人胚腎細(xì)胞

19、人胚腎細(xì)胞 風(fēng)疹病毒？風(fēng)疹病毒？ ?？刹《景？刹《?CPE(-)CPE(-)?？刹《景？刹《?-) (-) 風(fēng)疹病毒風(fēng)疹病毒(+) (+) CPE(+)CPE(+)?？刹《景？刹《?+)(+) 風(fēng)疹病毒風(fēng)疹病毒(-)(-) 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 4. 病毒的分離培養(yǎng)與鑒定病毒的分離培養(yǎng)與鑒定 : 病毒的分離培養(yǎng)病毒的分離培養(yǎng) 病毒的鑒定病毒的鑒定 病毒數(shù)量及感染性測(cè)定病毒數(shù)量及感染性測(cè)定 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 病毒數(shù)量及感染性測(cè)定：病毒數(shù)量及感染性測(cè)定： 蝕蝕( (空空) )斑形成試驗(yàn)斑形成試驗(yàn) 50%50%組織細(xì)胞感染量組織細(xì)胞

20、感染量 病毒總量病毒總量( (活病毒活病毒+ +死病毒死病毒) )： 感染性病毒量感染性病毒量: : 血凝試驗(yàn)血凝試驗(yàn) 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 蝕蝕( (空空) )斑形成試驗(yàn)斑形成試驗(yàn)（plaque assay） 原理：將適當(dāng)稀釋濃度的病毒液定量接種于敏感原理：將適當(dāng)稀釋濃度的病毒液定量接種于敏感 的單層細(xì)胞，經(jīng)一段時(shí)間培育后，在細(xì)胞上覆蓋的單層細(xì)胞，經(jīng)一段時(shí)間培育后，在細(xì)胞上覆蓋 一層未凝固瓊脂，待其凝固后繼續(xù)培養(yǎng)，由于病一層未凝固瓊脂，待其凝固后繼續(xù)培養(yǎng)，由于病 毒的增值使感染的單層細(xì)胞病變脫落，形成肉眼毒的增值使感染的單層細(xì)胞病變脫落，形成肉眼 可見(jiàn)的空斑，

21、一個(gè)可見(jiàn)的空斑，一個(gè)蝕蝕斑是由一個(gè)感染性病毒顆粒斑是由一個(gè)感染性病毒顆粒 增殖而形成的，計(jì)數(shù)平板中空斑數(shù)可計(jì)算出樣品增殖而形成的，計(jì)數(shù)平板中空斑數(shù)可計(jì)算出樣品 中活病毒的數(shù)量。中活病毒的數(shù)量。 通常以每毫升病毒液的空斑形成單位（通常以每毫升病毒液的空斑形成單位（plaque plaque forming unit, PFU),forming unit, PFU),既既 PFU/mlPFU/ml表示。表示。 PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY 蝕蝕( (空空) )斑形成試驗(yàn)斑形成試驗(yàn)

22、（plaque assay） Vero cells, which grew confluently on the bottom of the plastic plate (1.5 cm diameter), were infected with herpes simplex virus 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 用途：用途： 測(cè)定感染性病毒量測(cè)定感染性病毒量 單位單位: PFU (plaque forming unit)/ml: PFU (plaque forming unit)/ml 由一個(gè)感染性病毒顆粒增殖而形成的一由一個(gè)感染性病毒顆粒增殖而形成的一 個(gè)空斑稱為空斑形成單位。個(gè)空斑稱為空斑形成單位。 分純病毒分純病毒 蝕蝕( (空空) )斑形成試驗(yàn)斑形成試驗(yàn)（plaque assay） 病毒感染檢查方法與防治原則病毒感染檢查方法與防治原則 50%50%組織細(xì)胞感染量組織細(xì)胞感染量 (50% tissue culture