AB液質(zhì)操作規(guī)程

1、第一部分開關機A A、開機1打開UPS電源，打開氮氣發(fā)生器（氣瓶），確認Curtain gas的輸入壓力為0.4MPa,gas1/2為 0.7MPa，exhuast為 0.4MPa。2.打開機械泵電源開關（5500系列直接打開質(zhì)譜主機電源，儀器自動啟動機械泵）3.等機械泵工作至少30min5.打開質(zhì)譜主機電源開關6.過夜抽真空B B、關機1.停止輸液：關停針泵或液相泵，或斷開輸液管線（一般質(zhì)譜主機 Sta ndby后液 相系統(tǒng)也自動待機，輸液泵自動關停，但建議操作人員再次確認，必須保證沒有任何液體再泵入質(zhì)譜）2.使儀器待機，并滅活配置2.關閉質(zhì)譜儀主機電源開關（5500系列只需按下電源開關旁的

2、 VENT按鍵排放真空）3.機械泵繼續(xù)工作至少30min4.關閉機械泵上的電源開關（5500系列會自動關停機械泵, 關閉待機械泵停止后即可5500系列主機上的電源開關）5.關閉氣體發(fā)生器或氣瓶第二部分調(diào)諧1、PPG就是正離子校正液，PPG3000負離子調(diào)諧液，正液，正離子一瓶，負離子一瓶。洗液一瓶 50%的甲醇水。兩次。吸校正液的時候慢慢吸，避免吸入氣泡，吸好以后將針泵卡住。再將高度本臺儀器只用兩瓶校調(diào)諧前先用洗液洗針調(diào)到5,將管路重新連接。不再連接六通閥，由質(zhì)譜直接進樣，且將針泵的速度調(diào)到10卩L/m。2、調(diào)諧液弄好后在儀器面板工具欄上：TOO項目創(chuàng)建項目。此項目為一個文件夾，文件夾里面包括

3、所有此次采集的信息，方法、序列等，且所有采集 的項目都固定在一個文件夾下面：D:/A nalyst Data/Project。新建項目的時候，彈出窗口中有個Add All，可以創(chuàng)建孫文件夾。3、聯(lián)機：軟件打開后在左上方硬件配置（單機選中，雙擊打開）-只需選中儀器MSactive profile。圖標變?yōu)榫G色，表示聯(lián)機成功。調(diào)諧只需要選中質(zhì)譜。 儀器的實時狀態(tài)可以點擊右下方的圖標，質(zhì)譜和液相都是單獨觀察，質(zhì)譜要注意 真空度，為0.5.4、調(diào)諧-手動調(diào)諧-項目（文件夾）選中下拉菜單中的Installation 20161102（為系統(tǒng)默認的調(diào)諧文件夾），先Q仔start syring pump （

4、打開針泵）start （M譜），開始采集以后觀察基線是否平衡，若等兩分鐘還未平衡好，則手動將針泵 往上抬。5、平衡好后（基線平穩(wěn)則為平衡好），重新進樣，重新點擊start syring pumpoResolution （分辨率）advaneed （高級選項）（看到結(jié)果后調(diào)節(jié)質(zhì)量軸和分辨 率做準備，只能先打開這個，再打開譜圖）-實時質(zhì)譜圖右鍵open file隨便點一個框-軟件上方的從譜圖校正PPG.POS正離子）start 刪三行：（1、質(zhì)量軸。2、分辨率。3、兩次調(diào)諧的差異）若質(zhì)量軸有差異右上角 yes 若分辨率飛離出虛線offset （偏大調(diào)大，偏小調(diào)?。┹斎胄Ｕ臄?shù)值，再重新進樣，如此反

5、復，直到點落在虛線以內(nèi)，實線代表最合適。&校正好后儀器會自動保存，直接關掉窗口即可。負離子調(diào)諧和正離子調(diào) 諧步驟一樣，只是在選擇方法的時候要注意選擇負離子模式。還有看結(jié)果時要選 擇PPG3000此為負離子調(diào)諧液。調(diào)諧因針泵流速很小，10卩L/ml,所以不需要設定離子源溫度及輔助氣，直接設定噴霧器流速為50,就可以將樣品霧化，氣簾氣也不需要設置，因為沒有多余的溶劑需要吹走。第三部分：方法優(yōu)化1. 在 Analyst 軟件 Tools 菜單中選擇 Project Create Project 在 Project name項下輸入新建的Project名稱。注意，不要點選窗口中的其他按鈕！點擊0K，確

6、認新 建 Project。2.在Analyst軟件界面下，雙擊導航欄內(nèi) Hardware Configuration。在彈出窗口中 選擇MassO nl y,點擊Activate P rofile，激活Mass On ly （只聯(lián)接質(zhì)譜主機）。3. 在導航欄內(nèi)單擊Tune and Calibrate，進入調(diào)諧模式。點擊上方工具條中的T鈕。 此時，應注意到主機有 扌卜”聲音，表明進入調(diào)諧狀態(tài)。此時右下角質(zhì)譜狀態(tài)顯示 綠色。雙擊Manual Tuning,進入質(zhì)譜參數(shù)設置及運行窗口。4使用1mL玻璃進樣針吸取適當標準溶液，置于進樣針座上。點擊MS Method下拉菜單，選擇 Syringe Pum

7、p Method,設定針泵流速Flow Rate為10卩L/mirt 5.點擊Start Syringe Pump按鈕開針泵進樣。6. 返回MS Method,選擇掃描模式 Scan Type為Q1 MS,設定掃描速度Scan Rate為10Da/s,設定掃描范圍Start Stop設定為50化合物分子量。DP預輸入 60。7. 點擊start開始采集數(shù)據(jù)。運行穩(wěn)定后，注意觀察是否有預期的母離子出現(xiàn)，并控制其響應值在約E4以下。點擊stoP,選擇第一個峰（后面是同位素峰）的平穩(wěn)段，雙擊，選中母離子。點擊右鍵，選擇Delete Pane8. 設定Scan type為產(chǎn)物離子掃描 Product

8、Ion （Ms2）,掃描速度200Da/s,選擇掃描正/負離子，輸入母 離子（Product of）,設定掃描范 圍startstop為50MW+20，覆蓋可能的子離子質(zhì)量范圍，點擊compoud標簽，設定（DP） 60,（ CE） 5。9.點擊start,開始采集數(shù)據(jù)，注意觀察是否有預期的母離子出現(xiàn)。手動調(diào)節(jié)CE， 以5eV為步長，逐漸增加。每次增加后稍作等待，直至目標化合物的子離子清 晰看見。選擇平穩(wěn)的一段，雙擊，選擇子離子。10.選擇Scan Type為MRM。設定參數(shù)表格中的Q1對應的母離子，Q3對應的子 離子，time （ms）為50, ID值設為 名稱1 （定量），名稱2 （定性）

9、。11點擊 Edit Ramp,在 Parameter下選擇 Collision Energy,點擊 OK。點擊 start 開始采集數(shù)據(jù)，記錄每個 MRM通道的最佳CE電壓。在MRM參數(shù)設定表中， 右鍵點擊。選擇 Collision Energy CE,調(diào)出表格中的CE列，輸入每個MRM通 道的最佳CE電壓值，精確到個位數(shù)。重復以上步驟，在Parameter項下選擇Declustering Potential,優(yōu)化并保存DP。完成后選擇菜單File/Save保存采樣方法,文件名.dam。第四部分：方法建立、LCMS方法的建立:1、連接儀器：打開HPLC質(zhì)譜電源，將HPLC系統(tǒng)接上柱子，將6號

10、出 口管線與離子源連好。調(diào)離子源噴霧針位置到2mm處，雙擊Hardware Configure， 在硬件配置菜單下單擊LCMS （液相與質(zhì)譜聯(lián)用），單擊Activate profile激活 儀器，會聽到笛的一聲，說明儀器已經(jīng)連接上。2、確認液質(zhì)同步：選擇項目（之前優(yōu)化方法的時候已經(jīng)建立的項目）；雙擊Build acquisition method新建方法，彈出新建方法模板。在模板左側(cè)點擊 acquisition method，模板右邊顯示對應的參數(shù)，確認 synchronization mode選擇 LC Sync,表示液質(zhì)同步。3、設置MRM 參數(shù)：點擊方法模板左側(cè)的 MRM ,在模板右側(cè)S

11、can Type 下選擇 MRM ；在polarity下選擇化合物極性：Positive（正離子）、Negative （負 離子）；Duration為15min（與液相分離相同的時間）；表格中Q1 ：母離子分子量， Q3（Da）：子離子分子量，Time （msec）： 50，ID欄：化合物名稱（離子對名稱 后空格加1為定量，空格加2為定性），在表格中右鍵分別單擊 DP、CE，點擊 工具欄的OPEN打開之前優(yōu)化的方法參數(shù)，調(diào)出DP,CE值，選中整行，Ctrl+c （復制）參數(shù)，關閉窗口，再Ctrl+v（粘貼）參數(shù)）；最后點擊Edit parameter設置離子 源參數(shù)：Source/Gas項用以

12、下推薦值：CUR 35 , IS:5500（正離子）或-4500 （負離子)，TEM 600 , GS1 60, GS2 70,點擊 0K。4、設置液相參數(shù)：點擊模板左邊的shimadzu LC system在右邊的pumps 欄下，設置stop time （運行時間）為15min， flow流速為1mL/min，A為水 相設為95%, B為有機相設為5% （設置時改B，A自動），泵最大壓力為50； 點擊time Program設置液相梯度：例咪唑類梯度設置：Time(mi n)AB95%5%55%95%105%95%10.195%5%1595%5%接著在右邊的Auto sampier欄下，設

13、置清洗時間，在Rinse mode下選擇Beforeand after（前后都洗），并設置清洗時間為5s，清洗液用50%甲醇水。最后點擊保 存按鈕，在保存窗口輸入該方法的名稱。二、建立批處理:1、雙擊Build acquisition batch，在右邊窗口 set欄為批處理保存的文件夾命名以便識別，再點擊add set最后點擊add sample再選擇之前建立的LC-MS方法，在彈出的窗口內(nèi)的number （進樣樣品數(shù)）處填入需要進樣的 樣品個數(shù)， 點擊OK。2、在加入的樣品列表內(nèi)依次填寫 sample nam（樣品名稱）、via position（樣品瓶的位置）、inj.volunme （

14、進樣體積：一般5微升或10微升）。3、在submit項下點擊submit按鈕以提交樣品序列。4、點擊工具條上左上角的view queue按鈕，可查看已提交的樣品。此時將儀器從校正狀態(tài)退出，進入分析模式。確認泵已打開，首次進樣液相 先排氣，再平衡儀器：先點擊工具條上的equilibrate平衡按鈕，在彈出的平衡 窗口中輸入平衡時間10min，點擊ok。右下角圖標會變黃，待平衡結(jié)束后此處圖標會變成綠色，此時即可點擊 start sam pie按鈕采集樣品信息，儀器會自動對 已提交的全部樣品進行采集。第五部分數(shù)據(jù)處理1.雙擊打開Multiquilt，選擇項目，點擊File下的熒光棒型圖標，點擊 sa

15、mpie, 選擇需要的標準品和樣品數(shù)據(jù)，點擊next，create new method為方法命名，點擊next，選擇一個有代表性的樣品（一般選擇濃度較大的標品數(shù)據(jù)），設置分組（同一物質(zhì)定量離子和定性離子設置為一組），并指定內(nèi)標，n ext，對每個物質(zhì)進行積分。2.設置積分參數(shù):a、Causian Smoth（平滑）：一般是0，如有毛刺可改成1或2；b、Expeceted Time （保留時間）：一般不動C、Expected time范圍：一般30s，表示在保留時間 5s范圍d、最小峰寬e、最小峰高背景噪音扣除：可調(diào)整目標峰基線以下被積分的面積， 比例越高積分越往下，必要時調(diào)整。g、分峰因子：

16、峰有分叉時設置，如有兩個分叉，設置為 2,峰分叉不能大單位：設置單位，勾選 Apply units to all可將此單位用于所有化合物 點擊next，點擊finish。在新跳出窗口內(nèi)將標準品選定，輸入濃度。物積分是否正常，點擊第三個圖標查看標準曲線。h、查看各化合報告打印:點擊 File，create rep ort，Report temp late （選擇報告模板，一般用samp Ie1 和標線，內(nèi)標報告只能用sampIe1,2,3），命名，選擇存儲報告位置，點ok。信噪比:選擇項目，雙擊open date file，點擊sample,選擇低濃度樣品，點擊 ok，點擊XIC，選擇定量離子，

17、點擊 ok，選中峰，按住shift，選峰附近的一段時間，點Script，點擊S-To NScript，即可得到結(jié)果。第六部分：LC-MS離子阱原理及其應用原理：在進行多級質(zhì)譜分析（MS-MS）時，首先限定目標質(zhì)量的離子。通過調(diào)整交變電壓，將大于以及小于目標質(zhì)量的離子射出，從而使得僅有一個質(zhì)量的離子存 在于離子阱中并將其富集。目標質(zhì)量的范圍被稱為Isolation Width。之后通過向離子阱內(nèi)注入氣體（通常為氦氣或氮氣），與離子發(fā)生碰撞使其被打成碎片。操作方法:首先在Analyst中打開一個成熟的MRM采樣方法，然后右鍵單擊Acquisition Method 中的 MRM，在彈出菜單中選擇

18、Add IDA Criteria Level。在新增的IDA-First Level Criteria頁面中設置相關邏輯選項（其中四項尤為重要）1） Select“X” to “ Y” most intens，表eO在多個組分色譜共流出時,2)指定觸發(fā)最強的若干個母離子，“ 1 to 2表示最強和次強的兩個母離子,“ 1 to 3表示最強和次強和第三位三個母離子，以此類推。請注意，如果選擇了 “ 1 to 2或“ 1 to 3,則后續(xù)的EPI個數(shù)應調(diào)整為對應的兩個或三個。（一般選擇兩個以下）After Dyn amic Backgro und Subtract ion of Survey Sc

19、an,表示執(zhí)行動態(tài)背景扣除，使得感興趣的母離子都盡可能的獲得觸發(fā)EPI的機會。該選項尤為重要，為必選項。3)Exclude former target ions在某些情況下，一次數(shù)據(jù)采集中，如果同一 個MRM通道內(nèi)可能有幾個不同保留時間的色譜法出現(xiàn)，那么 應選擇Never，表示所有色譜法都依次觸發(fā)執(zhí)行 EPI。EPI。4)通常為500或1000.Which exceeds設定MRM信號強度閾值超過此閾值才會觸發(fā)然后點選In elude List激活強制觸發(fā)的母離子。Mass （Da）列輸入需要的母離子質(zhì)量數(shù)，RT（ min）列輸入該母離子的保留時間，Width（sec）列輸入開放的保留時間窗口

20、。完成以上IDA Criteria邏輯選項設定后，添加EPI方法。首先，在IDA Criteria上點擊右鍵，在彈出菜單中選擇 Add exp erime nt。軟件會添加一個新的exp erime nt,并自動與上一個 MRM保持一致。然后在Scan Type處選擇Enhanede Product lon（EPI）。設定離子阱掃描速度Scan Rate為10000Da/s （根據(jù)自動調(diào)諧的參數(shù)設定）。在右側(cè)表內(nèi)設定二級質(zhì) 譜的掃描范圍（應包含母離子及子離子）點擊Edit Parameters按鈕，進入此EPI對應的離子源和化合物電參數(shù)的設定窗口（將CAD模式改為High，其余參數(shù)應與MRM保

21、持一致）。舉例：設定CE為35，CES為15,此處表示子離子掃描的碰撞能量為 20、35、50三個值, 即二級質(zhì)譜為低中高三個碰撞能量所得的碎片離子混合圖。最后選擇菜單File/Save保存現(xiàn)有采樣方法。有人說工作忙、應酬多，哪有那么多的閑情逸致?。坑浀敏斞赣芯湓?時間就像海綿里的水，只要擠總是有的。奔波在俗世里，不知從何時起，飄來一股清流，逼著每個人優(yōu)秀。人過四十，已然不惑。我們聽過別人的歌，也唱過自己的曲，但誰也逃不過歲月的審視，逃不過現(xiàn)實的殘酷。如若，把心中的雜念拋開，茍且的日子里，其實也能無比詩意。借一些時光，尋一處寧靜，聽聽花開，看看花落，翻一本愛讀的書，悟一段哲人的贈言，原來，日升月落，一切還是那么美。不明花語，卻逢花季。一路行走，在漸行漸遠的時光中，命運會給你一次次洗牌，但玩牌的始終是你自己。坦白的說，我們遇到困擾，經(jīng)常會放大自己的苦，虐待自己，然后落個遍體鱗傷，可憐兮兮地向世界宣告：自己沒救了！可是，那又怎樣？因為，大多數(shù)人關心的都是自己。一個人在成年后，最暢快的事，莫過于經(jīng)過一番努力后，重新認識自己，改變自己。學會了獨自、沉默，不輕易訴說。因為，更多的時候，訴說毫無意義。傷心也好，開心也好，過去了，都是曾經(jīng)。每個人都要追尋活下去的理由，心懷美好，期待美好，這個世界，就沒有那么糟糕