病毒學(xué)復(fù)習(xí)資料：肝炎病毒

1、一、甲型肝炎病毒（hepatitis A virus，HAV）小RNA病毒科嗜肝病毒屬（heparnavirus）衣殼：20面體立體對稱，分實心顆粒和空心顆粒兩種。實心為完整成熟的病毒體，有感染性；空心為缺核心的空心衣殼，無感染性但有抗原性。由VP1-VP4等4種多肽組成，其中VP1是主要的衣殼蛋白，其抗原決定簇的NT抗體，能中和所有的HAV株。1個血清型，7個基因型培養(yǎng)與檢測：HAV可用Vero細(xì)胞、人胚腎細(xì)胞、傳代猴腎細(xì)胞 (FRhK-4、FRhK-6)、人胚肺2倍體成纖維細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞株 (PLC/PRF/S) 等分離培養(yǎng)。抵抗力：較強(qiáng)，耐酸堿（pH2-10）、耐熱、耐有機(jī)溶劑。傳染源

2、：多為患者和隱性感染者?；颊邼摲诤笃诩凹毙云诘难汉图S便均有傳染性。傳播途徑：主要通過糞-口途徑傳播，或經(jīng)糞便污染的。致病機(jī)制：HAV主要侵犯兒童和青年，且多為隱性感染。機(jī)體的免疫應(yīng)答也參與了肝臟的損傷，即抗HAV(IgM和IgG)在肝臟與HAV結(jié)合形成免疫復(fù)合物，或Tc(CTL)對感染病毒肝細(xì)胞的攻擊所致。檢測：1血清學(xué)檢查：檢測抗HAV常用RIA放射免疫和EIA法。檢測抗HAV IgM有助于早期診斷；測抗HAV IgG有助于流行病學(xué)調(diào)查；測糞便中抗HAV IgA也有助于診斷。2病毒檢測：潛伏期末期和急性期早期，取糞便用免疫電鏡檢測HAV顆粒；用放射免疫 (RIA) 或酶免疫 (EIA)

3、法檢測HAV 的抗原。3病毒核酸檢測：應(yīng)用 cDNA-RNA分子雜交技術(shù)及PCR技術(shù)檢測HAV的RNA，方法特異、敏感。用斑點(diǎn)雜交法可檢出10-9 mg核酸。預(yù)防：HAV感染后以隱性感染和無黃疽型病例占多數(shù)，因此傳染源較難控制。一般性預(yù)防：搞好衛(wèi)生，切斷傳播途徑。特異性預(yù)防：接種疫苗， 減毒甲型肝炎活疫苗(H2 株和L1株)；國外滅活疫苗（HM175株、CR326-F株），HAV基因工程疫苗正在研制中。人工被動免疫：注射丙種球蛋白。治療：甲型肝炎為自限性疾病，經(jīng)治療可痊愈，不轉(zhuǎn)慢性亦不留后遺癥。 二、戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV）肝炎病毒科HEV呈球形，無包膜，表面

4、呈現(xiàn)鋸齒狀，類似杯狀病毒。到目前為止，世界各地分離到的病毒只有一個血清型?；颊叨嘁娪?0-40歲成年人，潛伏期為2-9 w，多數(shù)患者于病后6 w即好轉(zhuǎn)或痊愈。少數(shù)患者可表現(xiàn)為重癥肝炎，甚至可導(dǎo)致死亡。孕婦感染時，發(fā)病率高，病情嚴(yán)重，常發(fā)生流產(chǎn)或死產(chǎn)。HEV致病機(jī)制可能是病毒本身作用及機(jī)體免疫應(yīng)答造成肝細(xì)胞損傷。檢測：1病毒檢測（免疫電鏡）：可取病人糞便標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)免疫電鏡檢查HEV顆粒。2血清學(xué)方法：ELISA或Western印跡試驗檢測抗HEV，包括抗HEV IgM和抗HEV IgG。3HEV核酸檢測：多采用PCR法?？扇』颊呒S便標(biāo)本或血清標(biāo)本檢測HEV RNA。預(yù)防：原則上與甲型肝炎相同。

5、主要措施是保護(hù)水源，防止被糞便污染，保證安全用水。在流行地區(qū)廣泛宣傳不喝生水，改善環(huán)境衛(wèi)生和個人衛(wèi)生，降低新患發(fā)病率。免疫球蛋白預(yù)防無效。無有效疫苗。治療：本病治療原則是早期發(fā)現(xiàn)，早期治療。合并重癥肝炎時按搶救暴發(fā)性肝功能衰竭的原則處理。三、新近發(fā)現(xiàn)的肝炎相關(guān)病毒GBV-C/庚型肝炎病毒黃病毒科（Flavivurus）丙型肝炎病毒屬傳染源：主要是庚型肝炎病毒感染者或病毒攜帶者。傳播途徑：經(jīng)血或腸道外傳播。受血者、靜脈內(nèi)毒癮者、接觸血液的醫(yī)務(wù)人員等感染率高。此外，也可經(jīng)母嬰傳播性傳播。HGV多為持續(xù)感染。由于傳播途徑相同，HGV常與HBV、HCV等重疊感染，但該病毒并不加重乙型和丙型肝炎的臨床癥

6、狀和肝臟酶學(xué)的變化。治療：HGV對干擾素敏感，故對HGV的治療，特別對HCV和HGV合并感染的病例可使用干擾素(IFN)治療。臨床證明用病毒唑治療庚型肝炎效果不佳。輸血傳染性病毒（TTV）傳播途徑：TTV主要通過輸血或血制品傳播，但也可通過糞-口途徑、唾液飛沫、精液和乳汁等多途徑傳播。TTV在人群中感染率高 TTV常與HCV重疊感染。TTV感染一般表現(xiàn)為無癥狀攜帶者，至今尚未發(fā)現(xiàn)TTV有引起肝炎或其他疾病的能力。因此，TTV是否有嗜肝性和致病性尚不明確，正在研究之中。 四、乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）嗜肝DNA病毒科正嗜肝DNA病毒屬1形態(tài)：管型、小球型顆粒、大球

7、型顆粒的外殼為HbsAg（表面抗原），大球型顆粒的內(nèi)殼為HbcAg（核心抗原）、HbeAg（編碼抗原）、DNA多聚酶，外面是完整環(huán)狀的負(fù)鏈，里面為不完整的正鏈。小球形顆粒(small spherical particle)，直徑22 nm，HBsAg，不含DNA和DNA多聚酶，無感染性；管形顆粒(tubular particle)，直徑22 nm，長度在50-700 nm之間，由小球形顆粒串聯(lián)而成，無感染性；大球形顆粒(large spherical particle)，即Dane顆粒，直徑42 nm，有感染性。Dane顆粒是具有感染性的完整成熟的HBV顆粒，直徑為42 nm，具有雙層核殼結(jié)構(gòu)

8、：核心顆粒：直徑為27 nm。 顆粒內(nèi)部：雙股不完全環(huán)狀DNA和DNA多聚酶。 顆粒表面（內(nèi)衣殼）：含有HBcAg 和HBeAg 。外殼（包膜）：厚7 nm。 脂質(zhì)雙層：來源于宿主細(xì)胞 包膜蛋白：病毒編碼。含有HBsAg 和PreSAgHBsAg具有抗原性，能刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體。HBcAg抗原性強(qiáng)，可誘導(dǎo)宿主CTL細(xì)胞效應(yīng)，病刺激機(jī)體產(chǎn)生非保護(hù)性抗HBc抗體。2基因結(jié)構(gòu)：內(nèi)正外負(fù)HBVDNA是由長鏈L (負(fù)鏈) 和短鏈S (正鏈) 組成的不完全雙鏈環(huán)狀DNA ，短鏈的長度相當(dāng)于長鏈的50-85%。HBVDNA長鏈有轉(zhuǎn)錄和翻譯蛋白的功能，載有病毒蛋白質(zhì)的全部密碼，有4個開放讀碼框架(ORF)

9、，分別為S、C、P和X區(qū) 。S區(qū)：S基因、PreS1與PreS2基因編碼HBsAg、PreS1和PreS2 Ag。 主蛋白 (main protein) ：HBsAg 中蛋白 (middle protein) ：HBsAg+PreS2Ag 大蛋白 (large protein) ：HBsAg+PreS2Ag+ PreS1Ag C區(qū)：C基因和preC基因分別編碼HBcAg和 PreC蛋白（是HBeAg的前體蛋白，經(jīng)切割加工后形成HBeAg并分泌到血循環(huán)中）。P區(qū)：最長，P基因編碼HBV DNA多聚酶。 末端蛋白區(qū)(terminal protein, TP) 間隔區(qū)(spacer) 聚合酶/逆轉(zhuǎn)錄

10、酶區(qū)(DNA pol/RT) Rnase H區(qū)。X區(qū)：編碼X 蛋白，可反式激活一些細(xì)胞的癌基因及病毒的基因等，可能與肝癌的發(fā)生有關(guān)。復(fù)制過程吸附，傳入，脫殼雙鏈DNA合成共價閉環(huán)超螺旋DNA（cccDNA）負(fù)鏈DNA合成多種mRNA其中前基因組pgRNA可以編碼蛋白也可以作為合成子代DNA模板pgRNA在DNA多聚酶作用下反轉(zhuǎn)錄合成負(fù)鏈DNA在DNA多聚酶作用下以負(fù)鏈為模板合成正鏈雙鏈DNA核心顆粒進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，獲得包膜蛋白（表面抗原）裝配，成熟，釋放（出芽）具有特殊的DNA聚合酶，能以RNA為模板反轉(zhuǎn)錄合成DNA，又能互補(bǔ)合成DNA抗原組成：外殼：HBsAg三種顆粒所共有，是機(jī)體受HBV感染的

11、主要標(biāo)志之一。具有抗原性，能刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體，即抗HBs 。根據(jù)HBsAg抗原性差異，HBV可分為adr/adw、ayr/ayw 等4種血清型。血清型分布有明顯的地區(qū)差異，并與種族有關(guān)。如歐美主要是adr型，為A基因型；我國以adr、ayw為多見。A抗原決定簇由HBsAg的124-147位氨基酸組成，親水性強(qiáng)，124/137、139/147的半胱氨酸形成二硫鍵，構(gòu)成兩個環(huán)狀結(jié)構(gòu)。連續(xù)性抗原決定基，細(xì)胞免疫和體液免疫。制備疫苗。PreS1和PreS2存在吸附肝細(xì)胞受體的表位；部分PreS1與內(nèi)殼的HSP70結(jié)合，使內(nèi)外層衣殼緊密聯(lián)系；其抗原性比HBsAg 更強(qiáng)，抗PreS1和抗PreS2通

12、過阻斷HBV與肝細(xì)胞的結(jié)合而起抗病毒作用。衣殼：HBcAg主要定位于感染細(xì)胞核內(nèi)，不易從患者血清中檢出。也可在肝細(xì)胞膜表面表達(dá)，宿主CTL作用的主要靶抗原?？乖軓?qiáng)，能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗HBc，但無中和作用。檢出高效價抗HBc，抗HBc IgM則表示HBV在肝內(nèi)處于復(fù)制狀態(tài)；抗HBc IgG則表示感染過HBV。HBeAg可作為HBV復(fù)制及血清具有傳染性的標(biāo)志。急性乙型肝炎進(jìn)入恢復(fù)期時HBeAg消失，抗HBe陽性；但抗HBe亦見于攜帶者及慢性乙型肝炎血清中。易感動物和細(xì)胞培養(yǎng)：只有黑猩猩對HBV易感，接種后可發(fā)生與人類相似的急慢性感染。體外細(xì)胞培養(yǎng)尚未成功。抵抗力：HBV 對理化因素的抵抗力相當(dāng)強(qiáng)：

13、對低溫、干燥、紫外線、醚、氯仿、酚等均有抵抗性。高壓滅菌 (121 15 min)、0.5%過氧乙酸、5%次氯酸鈉、3%漂白粉液、0.2%新潔爾滅等均可使HBV失去感染性，但仍保持HBsAg的抗原活性。HBV的感染性與HBsAg的抗原活性并非一致。傳染源：急性、慢性乙肝患者及HBsAg無癥狀攜帶者均為傳染源，特別是無癥狀的HBsAg攜帶者做為傳染源危害性更大。傳播途徑：乙型肝炎主要是經(jīng)血液或注射途徑傳播即非胃腸道的感染 (parenteral infection)：1. 血液、血制品傳播：有少數(shù)HBsAg陰性、而HBV DNA陽性的血液仍可引起感染。2. 醫(yī)源性傳播：通過注射、手術(shù)、采血、拔牙

14、、內(nèi)窺鏡檢查、預(yù)防接種、針刺、紋身、各種醫(yī)療器具、甚至工作人員的手，均可傳播乙型肝炎。3. 母嬰傳播：主要是在圍產(chǎn)期，分娩時新生兒經(jīng)產(chǎn)道接觸或吸吞入含HBV的母血、羊水、或分泌物所致，少數(shù)可由于宮內(nèi)感染(10%)，也可通過母乳、體液或密切接觸而傳播。4. 接觸傳播：日常生活中如共用牙刷、洗澡刷子、剃須刀等可引起HBV感染。通過唾液傳播的可能性也應(yīng)受到重視。性交，尤其男性同性戀亦可傳播HBV。因此，在西方國家將乙肝列為性傳播疾病(STD)之一。尿液、鼻液、汗液和糞-口傳播的可能性很小。致病機(jī)制：乙型肝炎的臨床表現(xiàn)呈多樣性，可表現(xiàn)為無癥狀病毒攜帶者、急性肝炎、慢性肝炎及重癥肝炎等。HBV的致病機(jī)制

15、，除了HBV對肝細(xì)胞直接損害外，主要是通過宿主的免疫應(yīng)答引起肝細(xì)胞的病理改變的臨床表現(xiàn)。1細(xì)胞介導(dǎo)的免疫病理損傷：免疫力過強(qiáng)可出現(xiàn)重癥肝炎，過低則是慢性肝炎2體液免疫所致的免疫損傷：造成了肝外癥狀表現(xiàn)3自身免疫所致的損傷：肝細(xì)胞自身表面抗原肝特異性脂蛋白抗原（Liver specific protein, LSP）暴露HBV感染與原發(fā)性肝癌的發(fā)生有密切關(guān)系經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查表明，乙型肝炎患者及HBsAg攜帶者的原發(fā)性肝癌發(fā)生率明顯高于未感染人群（217倍）。用與HBV分子生物學(xué)相似的土撥鼠肝炎病毒 (WHV) 可誘發(fā)土撥鼠原發(fā)性肝癌；而未感染鼠則無一只發(fā)生肝癌。用HBVDNA探針與肝癌組織進(jìn)行So

16、uthern 印跡核酸雜交時，獲得陽性結(jié)果，說明肝癌細(xì)胞染色體上整合有HBV DNA。檢測：采用血清學(xué)方法檢測患者血清中HBV抗原、抗體，并根據(jù)這些標(biāo)志進(jìn)行分析判斷。常用的方法有RIA、ELISA法，間接血凝、反向間接血凝，對流免疫電泳、雙向瓊脂擴(kuò)散法等。檢測的項目主要是HBsAg和抗HBs、HBeAg和抗HBe、以及抗HBc（兩對半），必要時也可檢測PHSA、PreS1和PreS2的抗原和抗體。上述各項檢查組成一套乙型肝炎病毒抗原抗體檢測系統(tǒng) (HBV血清標(biāo)志) 。HBsAg：機(jī)體感染HBV的重要標(biāo)志HBeAg：HBV復(fù)制及血液有傳染性的標(biāo)志近年來，臨床上也常采用PCR技術(shù)對乙型肝炎進(jìn)行輔助

17、診斷。 預(yù)防：采取切斷傳播途徑為主的綜合性措施：對乙肝患者及攜帶者的血液、分泌物和用具等要嚴(yán)格消毒滅菌；嚴(yán)格篩選獻(xiàn)血員，防止血液傳播；提倡使用一次性注射器及輸液器； 凡手術(shù)操作，使用接觸過血液的醫(yī)療器械等也必須嚴(yán)格消毒，要防止病人與醫(yī)務(wù)人員間的相互傳播；對高危人群要進(jìn)行特異性預(yù)防。主動免疫 接種乙型肝炎疫苗是最有效的預(yù)防措施。乙型肝炎疫苗是純化的HBsAg，不含HBV DNA，具有良好免疫原性，而無感染性。應(yīng)用的疫苗有兩種，即HBsAg血源疫苗和HBV基因重組疫苗。另有HBsAg多肽疫苗或HBV DNA疫苗均在研究之中。被動免疫 乙肝免疫球蛋白（HBIg）是由含有高效價抗HBs人血清提純而成，

18、可用于緊急預(yù)防。主要用于以下情況： 醫(yī)務(wù)人員或皮膚損傷被乙型肝炎患者血液污染傷口者； 母親為HBsAg、HBeAg陽性的新生兒； 發(fā)現(xiàn)誤用HBsAg陽性的血液或血制品者； HBsAg、HBeAg陽性者的性伴侶。治療：核苷酸類似物和IFN-五、丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）目前占輸血后肝炎的80-90%其臨床和流行病學(xué)特點(diǎn)類似乙型肝炎，但癥狀較輕，演變?yōu)槁哉叨嘁姡糠只颊呖砂l(fā)展為肝硬化或肝癌。 黃病毒科（Flavivurus）丙型肝炎病毒屬HCV呈球形，其直徑約為30-60 nm，外有脂蛋白包膜。 基因結(jié)構(gòu)：5 端UTR核酸序列（5末端非編碼區(qū)）保守性強(qiáng)，病毒株間差

19、異小，可用于診斷包膜蛋白區(qū)和非結(jié)構(gòu)蛋白1區(qū)基因易變異，包膜蛋白抗原性變異，不被抗體識別，病毒持續(xù)存在，易發(fā)展成慢性編碼區(qū)僅含有單一的開放讀碼框ORF，編碼區(qū)位于5端，非編碼區(qū)位于3端蛋白前體被切割為至少10個蛋白：3個結(jié)構(gòu)蛋白（核心衣殼蛋白、包膜蛋白1和2），6個非結(jié)構(gòu)蛋白（NS2-5B），NS1有爭論?；蚍中停耗壳皩CV尚不能通過血清分型，而根據(jù)NS5基因序列同源性及親緣關(guān)系分析可將世界各地分離到的毒株分為6個基因型，11個基因亞型 (a、b、c表示)。準(zhǔn)種：HCV同一基因亞型內(nèi)不同基因異質(zhì)性群體。(E2)易感動物和細(xì)胞培養(yǎng)：黑猩猩是HCV唯一易感動物模型。細(xì)胞模型為JFH-1/HCVc

20、c（cell culture）抵抗力：HCV對氯仿、乙醚等有機(jī)溶劑敏感，UV照射、100 5 min、20%次氯酸、福爾馬林 (1:1000)均可使HCV失活。傳播途徑：HCV主要通過輸血或血制品、注射、性交和母嬰傳播。潛伏期為2-26 w，平均7.4 w，但由輸血或血制品引起的丙型肝炎潛伏期較短，大多數(shù)在輸血后5-12 w發(fā)病。大多數(shù)患者不出現(xiàn)癥狀或癥狀較輕，多為無黃疽型，90%以上的患者演變?yōu)槁愿窝祝M(jìn)而發(fā)展為肝硬變，甚至原發(fā)性肝癌。關(guān)于HCV感染的慢性化機(jī)制，目前認(rèn)為HCV直接損害肝細(xì)胞、免疫病理損傷、細(xì)胞凋亡三個方面導(dǎo)致肝細(xì)胞破壞。檢測：1抗HCV抗體的檢測通過ELISA、放射免疫法檢測抗HCV IgG或IgM。若抗HCV IgM陽性時可對HCV感染進(jìn)行早期診斷。2HCV RNA檢測多采用RT-PCR檢測HVC RNA。該法敏感性和特異性好，可以提高HCV RNA檢出率，供診斷時做參考。預(yù)防：嚴(yán)格篩選獻(xiàn)血人員和加強(qiáng)血制品的管理，控制輸血傳播。免疫球蛋白有無預(yù)防作用尚無定論。治療：目前還無特異性防治對策，IFN-聯(lián)合利巴韋林。 六、丁型肝炎病毒（hepatitis D virus，HDV）缺陷病毒，必須在HBV或其它嗜肝DNA病毒輔助下才能復(fù)制，因此其致病必須同時有HBV感染，病情較單純感染HBV的患者嚴(yán)重。 HDV為直徑