梔子苷鎮(zhèn)痛分析論文

1、梔子苷鎮(zhèn)痛分析論文1材料與方法 1.1材料 1.1.1藥品與試劑杜冷丁，宜昌人福藥業(yè)有限公司產(chǎn)品；梔子苷，本實(shí)驗(yàn)室提取純化2；氫化可的松注射液，天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司產(chǎn)品；伊文思藍(lán)，上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站分裝廠產(chǎn)品；角叉菜膠，Sigma公司。 1.1.2動(dòng)物昆明種小鼠，1822g，湖北省動(dòng)物防疫中心提供。 1.2方法3，4 1.2.1梔子苷對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究昆明種雌性小鼠40只，隨機(jī)分為5組：生理鹽水陰性對(duì)照組、梔子苷大劑量組（50mg/kg）、梔子苷中劑量組（25mg/kg）、梔子苷小劑量組（12.5mg/kg）、杜冷丁陽(yáng)性對(duì)照組。分組前進(jìn)行篩選，調(diào)節(jié)小鼠熱板測(cè)痛儀，使溫度保持在

2、（55.00.2），每次取1只小鼠，放入測(cè)痛儀內(nèi)，記錄自放入到出現(xiàn)舔后足所需的時(shí)間(s)作為該鼠的痛閾值。凡小于5s或大于30s出現(xiàn)舔后足者，以及喜跳躍者，一律棄去不用。取合格者進(jìn)行分組，標(biāo)記，重新測(cè)量?jī)纱?，取平均值作為該鼠給藥前的基礎(chǔ)痛閾值。 梔子苷大、中、小劑量組連續(xù)3d按時(shí)按量皮下注射給藥，給藥1次/d，給藥時(shí)間間隔24h/次。每天給藥前，先稱小鼠體重，按小鼠的體重計(jì)算給藥量后再給藥，陰性對(duì)照組給予等量體積的生理鹽水。第4天時(shí)，給藥組稱重后按小鼠體重皮下注射給藥，5組按順序給藥。每組給藥后30，60，90，120min分別測(cè)定小鼠痛閾值。若小鼠在熱板上停留60s后仍無(wú)痛反應(yīng)，則取出，按6

3、0s計(jì)算。比較給藥組和對(duì)照組的差異情況，作組間t檢驗(yàn)。 1.2.2梔子苷對(duì)醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)的影響 取昆明種小鼠40只，雌雄各半，按性別體重隨機(jī)分為5組，每組8只，打點(diǎn)標(biāo)記后送入動(dòng)物房飼養(yǎng)。5組對(duì)應(yīng)的分別是：生理鹽水陰性對(duì)照組、梔子苷大劑量組（50mg/kg）、梔子苷中劑量組（25mg/kg）、梔子苷小劑量組（12.5mg/kg）、杜冷丁陽(yáng)性對(duì)照組。前3d給藥同“1.2.1”項(xiàng)。第4天時(shí)，稱完小鼠體重后，空白對(duì)照組和給藥組仍然按時(shí)按量皮下注射給藥，并且與前次給藥時(shí)間間隔24h，杜冷丁陽(yáng)性對(duì)照組最后給藥。依每只小鼠給藥時(shí)間為準(zhǔn)，杜冷丁陽(yáng)性組小鼠給藥300min后即陰性組及給藥組給藥1h后，腹腔

4、注射0.6%的醋酸溶液0.1ml/10g。觀察扭體反應(yīng)并計(jì)算20min內(nèi)小鼠扭體數(shù)。比較給藥組和對(duì)照組的差異情況，作t檢驗(yàn)。 1.2.3梔子苷對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 取昆明種小鼠40只，雄性，體重1822g，按體重隨機(jī)分為5組：生理鹽水陰性對(duì)照組、梔子苷大劑量組（50mg/kg）、梔子苷中劑量組（25mg/kg）、梔子苷小劑量組（12.5mg/kg）、氫化可的松陽(yáng)性對(duì)照組。每組8只，打點(diǎn)標(biāo)記后送入動(dòng)物房飼養(yǎng)。前3d給藥同“1.2.1”項(xiàng)。第4天時(shí)，稱完小鼠體重后，前4組仍然按時(shí)按量皮下注射給藥，并且與前次給藥時(shí)間間隔24h，氫化可的松陽(yáng)性對(duì)照組最后給藥。以每只小鼠給完藥的時(shí)間為基準(zhǔn)，氫化

5、可的松陽(yáng)性對(duì)照組給藥30min后，給藥組給藥1h后，各組小鼠右耳前后兩面涂抹二甲苯（0.02ml/只）；以每只小鼠致炎時(shí)間為準(zhǔn)，15min后將小鼠脫頸椎處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用8mm直徑打孔器于左右耳廓相應(yīng)部位各打一耳片，電子天平稱重。以左右耳片的重量之差作為腫脹度。算出腫脹度和腫脹抑制率（%），并與對(duì)照組比較（t檢驗(yàn)）。 1.2.4梔子苷對(duì)醋酸誘發(fā)小鼠毛細(xì)血管通透性的影響 小鼠分組同“1.2.3”項(xiàng)。前3d給藥同“1.2.1”項(xiàng)。第4天時(shí)，稱完小鼠體重后，3個(gè)給藥組及陰性對(duì)照組仍然按時(shí)按量皮下注射給藥，并且與前次給藥時(shí)間間隔24h。氫化可的松陽(yáng)性對(duì)照組最后給藥，皮下注射氫化可的松。以每只

6、小鼠給完藥的時(shí)間為基準(zhǔn)，氫化可的松陽(yáng)性對(duì)照組給藥30min后，空白及給藥組給藥1h后，尾靜脈注射0.5%的伊文思藍(lán)溶液0.1ml/10g體重，后立即腹腔注射0.6%醋酸溶液0.1ml/10g體重，以注射完醋酸溶液的時(shí)間為基準(zhǔn)，20min后脫頸椎處死小鼠，剪開腹腔，用8ml生理鹽水分4次清洗腹腔，合并洗滌液，3000r/min離心15min，取上清液，于590nm處測(cè)定其吸光值。 1.2.5梔子苷對(duì)角叉菜膠致小鼠足腫脹的影響 小鼠分組同“1.2.3”項(xiàng)。前3d給藥同“1.2.1”項(xiàng)。第4天時(shí)，稱完小鼠體重后，空白對(duì)照組和3個(gè)給藥組仍然按時(shí)按量皮下注射給藥，并且與前次給藥時(shí)間間隔24h，氫化可的松

7、陽(yáng)性對(duì)照組最后給藥。依每只小鼠給藥時(shí)間為準(zhǔn)，氫化可的松陽(yáng)性組小鼠給藥30min后,陰性及給藥組給藥1h后致炎，即在每只動(dòng)物右后足注射1%角叉菜膠50l致炎；以每組小鼠致炎時(shí)間為準(zhǔn)，致炎后3h處死小鼠，稱左、右后足重量，以左、右后足重量的差值作為腫脹厚度。比較給藥組和對(duì)照組的差異情況，作t檢驗(yàn)。 1.2.6梔子苷對(duì)炎癥組織滲出液中炎癥介質(zhì)含量PGE2的OD值的影響 將第“1.2.5”項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中小鼠的致炎足剪碎后放入相應(yīng)的標(biāo)記瓶中，各瓶中加入3ml生理鹽水，將致炎足浸泡24h。浸泡完畢以后將浸出液離心3000r/min，5min。再取上清液0.1ml，加入到裝有2ml氫氧化鉀-甲醇溶液的試管中，混勻

8、后，取其中的5%混合液于50恒溫水浴鍋中異構(gòu)化20min，再用甲醇稀釋到10ml，于278nm波長(zhǎng)處測(cè)定其OD值。比較給藥組和對(duì)照組PGE2含量的差異，并進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。 2結(jié)果 2.1梔子苷對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用給藥后不同時(shí)間痛閾見表1。表1梔子苷對(duì)小鼠痛閾值的影響(略) 由表1可知，梔子苷中劑量（25mg/kg）能延長(zhǎng)熱刺激所致小鼠在無(wú)痛覺反應(yīng)時(shí)間，具有一定的鎮(zhèn)痛作用（P0.01）。 2.2梔子苷對(duì)醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)的影響 扭體反應(yīng)的抑制率（%）=對(duì)照組扭體次數(shù)-實(shí)驗(yàn)組扭體次數(shù)對(duì)照組扭體次數(shù)100% 腹腔注射醋酸溶液后，除陽(yáng)性組外其它各組均出現(xiàn)腹部收縮，軀體扭曲，后肢伸展及蠕行等扭體反應(yīng)，見表

9、2。杜冷丁對(duì)醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)有十分明顯的抑制作用，P0.001；梔子苷50mg/kg劑量組和12.5mg/kg劑量組對(duì)醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)有明顯的抑制作用(P0.05)，最大扭體次數(shù)減少百分率可達(dá)55%，說明梔子苷對(duì)醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)具有明顯的抑制作用。 表2梔子苷醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)的影響(略) 2.3梔子苷對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響結(jié)果見表3。表3梔子苷對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(略) 腫脹度（mg）=右耳廓重左耳廓重 抑制率（%）=陰性對(duì)照組小鼠平均耳廓腫脹度-給藥組小鼠平均耳廓腫脹度陰性對(duì)照組小鼠平均耳廓腫脹度100% 用二甲苯致炎后，各組小鼠右耳均可見高度紅腫。結(jié)果表明，氫

10、化可的松組（P0.01）和梔子苷12.5mg/kg劑量組(p0.05),25mg/kg劑量組(P0.01)對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹均有明顯的抑制作用，且梔子苷對(duì)小鼠耳廓腫脹的抑制作用表現(xiàn)出良好的量、效關(guān)系，其抑制作用隨劑量的減小而有所增強(qiáng)。 2.4梔子苷對(duì)醋酸誘發(fā)小鼠毛細(xì)血管通透性的影響結(jié)果見表4。表4梔子苷對(duì)醋酸誘發(fā)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響(略) 結(jié)果顯示：與生理鹽水組比較，梔子苷和氫化可的松均可降低由醋酸引起的小鼠毛細(xì)血管通透性的增加，其中梔子苷大劑量組和氫化可的松能導(dǎo)致腹腔毛細(xì)血管滲透液的吸光值顯著降低（P0.01），即對(duì)急性炎癥滲出有明顯的抑制作用。 2.5梔子苷對(duì)角叉菜膠致小鼠足腫

11、脹的影響結(jié)果見表5。表5梔子苷對(duì)角叉菜膠致小鼠足腫脹的影響(略) 抑制率（%）=對(duì)照組平均腫脹厚度-給藥組平均腫脹厚度對(duì)照組平均腫脹厚度100% 角叉菜膠誘發(fā)小鼠足水腫的急性非感染性炎癥模型，腫脹高峰在致炎后35h，其模型穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，常用于篩選抗炎藥物。小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明梔子苷對(duì)角叉菜膠致小鼠足腫脹沒有明顯抗炎作用，而氫化可的松對(duì)角叉菜膠致小鼠足腫脹有十分明顯的抑制作用（P0.01）。 2.6梔子苷對(duì)小鼠炎癥組織滲出液中炎癥介質(zhì)含量PGE2的OD值的影響結(jié)果見表6。表6梔子苷對(duì)小鼠炎癥組織滲出液中介質(zhì)（PGE2）的影響(略) 由表6可知,氫化可的松炎癥滲出液中PGE2的含量明顯低于對(duì)照組，其

12、抗炎作用與抑制PGE2釋放有一定關(guān)系，P0.01。梔子苷對(duì)炎癥滲出液中PGE2的含量則與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異,其抗炎作用可能與PGE2釋放沒有關(guān)系。 3討論 通過熱板法來研究梔子苷對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用的效果，結(jié)果表明梔子苷中劑量能延長(zhǎng)熱刺激所致小鼠痛覺反應(yīng)時(shí)間；并且，梔子苷大劑量組和小劑量組能夠顯著抑制醋酸引起的小鼠的扭體次數(shù)，抑制率可達(dá)到55%，表明梔子苷具有一定的鎮(zhèn)痛作用。 通過二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)梔子苷中劑量和小劑量對(duì)小鼠的耳廓腫脹有明顯的抑制作用。梔子苷可降低由醋酸引起的小鼠毛細(xì)血管通透性的增加，梔子苷大劑量組可顯著降低毛細(xì)血管的通透性，對(duì)急性炎癥滲出有明顯的抑制作用。

13、梔子苷對(duì)角叉菜膠致小鼠足腫脹卻沒有明顯抗炎作用，對(duì)炎癥組織滲出液中的炎癥介質(zhì)PGE2的釋放也沒有明顯影響。 【參考文獻(xiàn)】 1王鋼力.大黃梔子果實(shí)化學(xué)成分的研究J.中國(guó)中藥雜志，1999,24（1）:38. 2張慶華.從梔子黃廢液中提取梔子甙的工藝研究J.化學(xué)與生物工程,2005,9:31. 3徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，第2版M.北京:人民衛(wèi)生出版社,1991:659. 4陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)M.北京:人民衛(wèi)生出版社,1993. 【摘要】目的研究梔子苷的鎮(zhèn)痛和抗炎作用。方法小鼠熱板實(shí)驗(yàn)，醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，梔子苷對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)，梔子苷對(duì)醋酸誘發(fā)小鼠毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)，梔子苷對(duì)角叉菜膠致小鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)等。結(jié)果梔子苷25mg/kg劑量（P0.05）能延長(zhǎng)熱刺激所致小鼠痛覺反應(yīng)時(shí)間，梔子苷50mg/kg劑量組和12.5mg/kg劑量組對(duì)醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)有明顯的抑制作用（P0.05），最大扭體次數(shù)減少百分率可達(dá)55%，具有一定的鎮(zhèn)痛作用；梔子苷12.5mg/kg劑