運(yùn)用PCR技術(shù)對乙肝患者血清資料的檢測分析

1、運(yùn)用PCR技術(shù)對乙肝患者血清資料的檢測分析聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction)，簡稱PCR1，是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段?？煽醋魃矬w外的特殊DNA復(fù)制。我科近年來采用PCR技術(shù)對乙肝患者的血清資料進(jìn)行檢測分析，為比較PCR與傳統(tǒng)檢測方法的差異，特與采用傳統(tǒng)檢測手段患者資料進(jìn)行對照分析，現(xiàn)綜合報道如下。一、資料與方法1一般資料:隨機(jī)抽取于2013年6月在我院乙肝治療的50例患者，年齡分布為2060歲。調(diào)查的50例患者均為乙肝患者，全身均無系統(tǒng)性疾病和藥物過敏史。患者需要進(jìn)行采血、化驗(yàn)等輔助檢查。現(xiàn)將50例患者隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，實(shí)驗(yàn)組人數(shù)

2、30人，男12人、女18人，對照組人數(shù)20人，男11人、女9人。分組完全按照隨機(jī)分組的方法來進(jìn)行分組，兩組患者在年齡、性別及疾病原因等方面比較，差異不顯著，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。2納入和評價標(biāo)準(zhǔn):納入標(biāo)準(zhǔn):年齡在2060歲的乙肝患者;沒有免疫缺陷等疾病、智力正常、自然狀況一切正常2;排除標(biāo)準(zhǔn):存在感覺功能缺陷;先天性的疾病;高血壓等。3方法:實(shí)驗(yàn)組采取PCR檢測技術(shù)，對照組采取傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法，即常規(guī)的物化檢測。兩組的用藥方法用量相同，均采用局部浸潤方法注射。對照組:常規(guī)檢測技術(shù);實(shí)驗(yàn)組:采用PCR技術(shù)，根據(jù)對乙肝患者抗原抗體檢測的敏感度進(jìn)行評價。4效果評價標(biāo)準(zhǔn):觀察檢測抗原抗體的數(shù)量和靈

3、敏度3作為評估標(biāo)準(zhǔn)。5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采集到的數(shù)據(jù)采用SPSS150軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，百分率(%)表示計(jì)數(shù)資料，定性資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，成組設(shè)計(jì)的t檢驗(yàn)用于組間比較，當(dāng)P005時，可認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。二、結(jié)果兩組的檢測效果統(tǒng)計(jì)情況見表1。表中的數(shù)據(jù)顯示P值小于005，表示調(diào)查結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即表明PCR技術(shù)對乙肝的檢測優(yōu)于傳統(tǒng)學(xué)檢測。討論P(yáng)CR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫(經(jīng)常是60左右)時引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度(72左右)，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(53)的方向合成互補(bǔ)鏈

4、?；诰酆厦钢圃斓腜CR儀實(shí)際就是一個溫控設(shè)備，能在變性溫度，復(fù)性溫度，延伸溫度之間很好地進(jìn)行控制。醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)是對病人的血液、體液、分泌物或脫落細(xì)胞等標(biāo)本，進(jìn)行化驗(yàn)檢查，以獲得病原、病理變化及臟器功能狀態(tài)等資料。通過對患者的上述標(biāo)本進(jìn)行醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，達(dá)到對患者疾病進(jìn)行診斷與輔助診斷的目的。ELISA測定的是乙肝病毒表達(dá)的蛋白質(zhì)(多肽)抗原或相應(yīng)的抗體。FQ-PCR測定乙肝病毒DNA。檢測HBV-DNA是判斷乙肝病毒有無復(fù)制的金指標(biāo);。ELISA方法測定乙肝五項(xiàng)指標(biāo)依然是輔助診斷乙肝的常規(guī)方法，特別對急性乙肝的發(fā)現(xiàn)有重要作用，只是該方法對檢測慢性乙肝表現(xiàn)得越來越不靈敏，特別是在乙肝病毒發(fā)生了變異以后，

5、需要進(jìn)行HBV-DNA檢測才能確診。在技術(shù)上，F(xiàn)Q-PCR采用熒光標(biāo)記和閉管檢測，克服了常規(guī)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染所致假陽性的缺點(diǎn)，使結(jié)果具有極高的特異性和敏感性。但在分析FQ-PCR結(jié)果時，還應(yīng)考慮以下因素:FQ-PCR的反應(yīng)體系復(fù)雜，易受多種因素影響。待測標(biāo)本的溶血、脂血、處理不當(dāng)都會導(dǎo)致其假陽性或假陰性;FQ-PCR只能檢測血中游離的HBV-DNA，當(dāng)病毒整合到肝細(xì)胞染色體上，隨同肝細(xì)胞一起復(fù)制、表達(dá)時，ELISA可出現(xiàn)陽性反應(yīng)，但血清中已沒有HBV顆粒存在4，此時FQ-PCR為陰性反應(yīng);當(dāng)患者感染的HBV-DNA發(fā)生突變，不能與熒光探針結(jié)合，F(xiàn)Q-PCR為陰性，而ELISA可為陽性;當(dāng)患者

6、處于恢復(fù)期或既往感染，ELISA檢測乙肝五項(xiàng)指標(biāo)可有多種模式。因此，在乙肝病毒感染的診斷上，二者有各自的優(yōu)點(diǎn)，不可互相替代。從表1研究結(jié)果可以看出，觀察組采用PCR技術(shù)檢測乙肝患者表面抗原，具有較高的檢測敏感性，兩組結(jié)果比較結(jié)果具有顯著性差異。因此FQ-PCR檢測定量HBV-DNA客觀地反映了HBV感染、復(fù)制及病程變化，修正或補(bǔ)充了對ELISA測定結(jié)果的解釋，特別是在病毒感染早期，ELISA不能檢測到低滴度的病毒抗原時，F(xiàn)Q-PCR即可檢測到HBV-DNA的復(fù)制，有利于乙肝的早期診斷。對于用干擾素等藥物治療的患者，測定治療前后病毒核酸的拷貝數(shù)，有利于療效觀察及預(yù)后判斷。參考文獻(xiàn)：1李偉，李峰生，陳舒，等乙肝病毒血清hbv-DNA標(biāo)記物與血清的關(guān)系J細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2011，24:818，8212成軍，孫關(guān)忠陳瑜，等高低濃度血清中五項(xiàng)乙肝標(biāo)志物的表現(xiàn)模式分析J細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2012，17:443-4443林杓鋒，李校坤，吳帆，等實(shí)行定量PC