MicroRNA-338在大鼠坐骨神經(jīng)損傷修復(fù)中的有效性研究

1、王建勇 敖強(qiáng) 韋玉軍 龔鍇 中國醫(yī)科大學(xué)組織工程教研室 清華大學(xué)醫(yī)學(xué)中心 2015年11月01日 自體移植 神經(jīng)修復(fù)導(dǎo)管 分子生物治療 國外研究 國內(nèi)研究 周圍神經(jīng)修復(fù)研究背景 MicroRNA (miRNA) 是一類由 內(nèi)源基因編碼的長度約為22 個 核苷酸的非編碼單鏈RNA 分子， 它們在動植物中參與轉(zhuǎn)錄后。 到目前為止， 在動植物以及病 毒中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有28645 miRNA 分子。大多數(shù)miRNA 基因以 單拷貝、多拷貝或基因基因簇 (cluster) 的形式存在于基因組 中 miRNA對周圍神經(jīng)損傷修復(fù)研究背景 目前，國內(nèi)外學(xué)者研究miRNA對周圍神經(jīng)損傷修復(fù)影響的研究 主要集中在兩個

2、方面：一是在細(xì)胞水平研究miRNA對雪旺細(xì)胞增殖、 遷移髓鞘化和/或神經(jīng)元軸突延長的影響；有研究表明，miRNA338 能夠促進(jìn)雪旺細(xì)胞增殖及促進(jìn)體外培養(yǎng)的DRG髓鞘化；二是研究坐 骨神經(jīng)損傷后脊髓、DRG、坐骨神經(jīng)以及其支配的肌肉中相關(guān) miRNA表達(dá)的變化情況，對如何利miRNA治療坐骨神經(jīng)修復(fù)損傷以 及體內(nèi)評估m(xù)iRNA促進(jìn)坐骨神經(jīng)損傷修復(fù)的治療效果方面仍然是空 白。 實驗方法 實驗方法 行為學(xué) 影像學(xué) 電生理 組織學(xué) 透射電鏡 免疫熒光 結(jié) 果 行為學(xué)觀察 AD：術(shù)后8周空病毒對照組大鼠體征，術(shù)側(cè)后肢握力不強(qiáng)，不能較好的 伸展，行走時被動拖曳足背，并且有自殘傾向（箭頭所示）。 FI ：

3、術(shù)后8周mir-338實驗組大鼠體征，術(shù)側(cè)后肢握力較好，能夠主動伸 展伸直，并且奔跑中活動自如（箭頭所示）。 坐骨神經(jīng)功能指數(shù)（SFI） SFI=-38.3(EPL-NPL)/NPL+109.5(ETS-NTS)/NTS+13.3(EITS-NITS)/NITS-8 0表示功能正常，-100表示坐骨神經(jīng)功能完全喪失。 核磁共振 AB:mir-21實驗組殼聚糖導(dǎo)管橋接，能明顯看到導(dǎo)管位置，神經(jīng)通過導(dǎo)管生長良好。 CD:對照組導(dǎo)管下游沒有看到明顯的神經(jīng)生長 電生理 大鼠術(shù)后2個月檢測到的神經(jīng)-肌肉動作電位 （CMAPs）A:GFP空病毒對照組； Bmir-338慢病毒實驗組：；C：正常神經(jīng)組；D：

4、坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度 B HE和乙酰膽堿酯酶染色 A-C：8周后各組大鼠術(shù)側(cè)腓腸肌HE染色，A對照組橫紋肌走行不規(guī)則，細(xì)胞核排列紊亂；B實驗組橫紋肌較規(guī)則，細(xì)胞核分布 均勻；C正常組橫紋肌走行連續(xù)，排列規(guī)則； D-F：8周后各組大鼠術(shù)側(cè)腓腸肌乙酰膽堿酯酶染色，D對照組乙酰膽堿酯酶減少，肌纖維較不規(guī)則；E實驗組乙酰膽堿酯酶較 多，肌纖維走行比較規(guī)則；F正常膽堿酯酶染色，數(shù)量較多，排列整齊； 甲苯胺藍(lán)染色 術(shù)后第8周各組再生神經(jīng)組織和正常神經(jīng)組織半薄切片甲苯胺藍(lán)染色。Bar=50um A： GFP空病 毒對照組；B：mir-338慢病毒實驗組；C：正常神經(jīng)組織；D：坐骨神經(jīng)軸突直徑長度 電鏡 術(shù)后第8周各組再生神經(jīng)組織和正常神經(jīng)組織超薄切片透射電鏡觀察。A：GFP空病毒對 照組；B：mir-338慢病毒實驗組；C：正常組；D：各組髓鞘厚度百分比分布 免疫組織化學(xué)染色 術(shù)后8周各組再生神經(jīng)遠(yuǎn)端組織和正常神經(jīng)組織的免疫組化觀察。a1-a3:正常神經(jīng)b1-b3：mir-21慢病毒組；c1-c3：空病毒對 照組；紅色的為NF-200免疫組化染色，綠色的為S100免疫組化染色。標(biāo)尺為10 m How do thi