布魯氏菌病的檢測(cè)方法

1、布魯氏菌病的檢測(cè)方法檢疫檢驗(yàn)布魯氏菌病的檢測(cè)方法耿淑梅(黑龍江省海倫市畜牧局動(dòng)物檢疫站152300)1病原學(xué)檢測(cè)方法布魯氏菌及其種與生物型的檢測(cè)鑒定,除直接進(jìn)行病原分離和鑒定方法外,用過氧化物酶標(biāo)記或熒光標(biāo)記的特異性免疫染色檢驗(yàn)方法也有報(bào)道.20世紀(jì)90年代以來,分子生物學(xué)檢測(cè)鑒定方法已得到大力發(fā)展.其中,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(pcr)以其快速,準(zhǔn)確,高效成為研究較多的檢測(cè)方法.國外有人在1994年針對(duì)牛,羊,綿羊,豬種布魯氏菌設(shè)計(jì)不同的引物,應(yīng)用pcr方法擴(kuò)增在不同種間存在重復(fù)差異的布魯氏菌保守重復(fù)基因單元is711,以區(qū)別布魯氏菌的種.1999年又有人報(bào)道了用pcr一步法快速檢測(cè)軟質(zhì)干酪和牛乳中

2、的布魯氏菌.2000年國外有人報(bào)道用聯(lián)合pcr對(duì)感染牛的乳汁,鼻分泌物檢測(cè)布魯氏菌和結(jié)核菌.據(jù)報(bào)道位于is711序列下游的26個(gè)堿基對(duì)(bp)基因是海洋哺乳動(dòng)物的特殊標(biāo)記.s19和rb51疫苗菌株已可以用pcr技術(shù)鑒定,s19的赤鮮醇敏感基因缺失702bp,所有其他布魯氏菌都有1063bp,s19只有361bp.rb51菌株的編碼葡胺聚糖酶的wboa基因發(fā)生了變異,在此基礎(chǔ)上建立了rb51特異性pcr鑒定方法.pcr在布魯氏菌的檢測(cè),鑒定方面越來越受到重視,以菌體基因組和基因組外的某些特定序列為檢測(cè)基因,不僅可以確定布魯氏菌的種,還可以確定屬.此外,dna探針,基因芯片方法等有望成為病原診斷的

3、實(shí)用方法.一些pcr技術(shù)已日趨成熟,pcr已被oie確定為比較成熟的可以鑒別主要流行種的病原檢測(cè)鑒定方法.脈沖凝膠電泳方法等已用于臨床布魯氏菌病原鑒定.2免疫學(xué)檢測(cè)方法目前,應(yīng)用比較成熟的免疫學(xué)檢測(cè)方法主要有虎紅平板凝集試驗(yàn)(rbt),試管凝集試驗(yàn)(sat),補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(c,全乳環(huán)狀反應(yīng)(mrt).除sat外,這些試驗(yàn)技術(shù)與國際上采用的技術(shù)是一致的.傳統(tǒng)方法的凝集試驗(yàn)(包括sat和平板凝集試驗(yàn))在發(fā)達(dá)國家已基本上停止使用,取代的方法是緩沖布魯氏菌抗原試驗(yàn)(bbat),rbt.這2種試驗(yàn)除保持了快速凝集試驗(yàn)的高敏感性外,還由于采用低ph值而減少了非特異性反應(yīng).在國際貿(mào)易中bbat,rbt是牛,

4、羊,豬種布魯氏菌病診斷的指定試驗(yàn),作為篩選試驗(yàn)用.cfr至今仍是布魯氏菌病的重要診斷方法,是牛,羊,綿羊副睪種布魯氏菌病診斷的國際貿(mào)易指定試驗(yàn),作為確診試驗(yàn)用.也是公認(rèn)的高特異性試驗(yàn),但是,由于試驗(yàn)操作繁雜,又難以標(biāo)準(zhǔn)化,并且敏感性降低,所以在實(shí)際防控中使用并不多.mrt由于使用非常方便,并且具有良好的敏感性,是奶牛布魯氏菌病監(jiān)測(cè)的主要方法.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(elisa)是20世紀(jì)90年代發(fā)展起來的高敏感性的試驗(yàn)方法,而且操作更方便.elisa既可以作為確定試驗(yàn),又可以作為篩選試驗(yàn).進(jìn)入21世紀(jì)以來,世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(oie)已將其列人國家貿(mào)易指定試驗(yàn).elisa方法不但用于血清學(xué)診斷,還可用

5、于乳汁檢查.豬種布魯氏菌和綿羊副睪種布魯氏菌已有成熟的elisa診斷方法.關(guān)于elisa的研究報(bào)道相當(dāng)多,表明這是大家認(rèn)為比較有前途的診斷方法.elisa效果的關(guān)鍵在于抗原的選用.在已經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化的牛布魯氏菌病elisa診斷中,目前oie推薦的是使用光滑型脂多糖(s-lps)抗原.據(jù)報(bào)道,從牛種布魯氏菌和羊種布魯氏菌獲得了能表達(dá)高度免疫原性蛋白的基因,其生產(chǎn)的蛋白可用于鑒別s19和rev.1疫苗免疫與自然感染.用綿羊副睪種布魯氏菌表面抗原及用重組蛋白和單克隆抗體作為elisa抗原,認(rèn)為可獲得良好的診斷結(jié)果.對(duì)于elisa技術(shù)來說,除所使用的抗原對(duì)方法的敏感性特異性有決定性影響外,還受到對(duì)敏感性特異性選擇,當(dāng)提高敏感性時(shí),就會(huì)降低一定的特異性.由于凝集試驗(yàn)不適合綿羊副睪種布魯氏菌病的診斷,瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散(agid)試驗(yàn)就成為綿羊副睪種布魯氏菌病的常用診斷方法.熒光偏振試驗(yàn)(fpa)是oie認(rèn)為敏感性,特異性與elisa相當(dāng)?shù)脑囼?yàn),美國于2004年將fpa確定為官方確證試驗(yàn).有人用fpa檢測(cè)牛種布魯氏菌,并與其他血清學(xué)檢測(cè)方法進(jìn)行了比較.認(rèn)為fpa是穩(wěn)定的血清學(xué)方法,其敏感性和特異性在初步評(píng)價(jià)中分別為92.1%和99.4%,在后