[畢業(yè)設(shè)計(jì)精品]茶多酚對(duì)心肺復(fù)蘇大鼠生存時(shí)間和腎損傷的影響

1、茶多酚對(duì)心肺復(fù)蘇大鼠生存時(shí)間和腎損傷的影響 目 錄一、論文 茶多酚對(duì)心肺復(fù)蘇大鼠生存時(shí)間和腎損傷的影響1英文縮略語22中文摘要33英文摘要54論文主體 前言 8 材料與方法 10結(jié)果13討論17參考文獻(xiàn)22附圖 255全文小結(jié)26 二、綜述 綜述 茶多酚的藥理研究進(jìn)展 27英漢雙解縮略詞表縮略詞英文全稱中文全稱tptea polyphenols茶多酚ofroxygen free radicals氧自由基iriischemia reperfusion injury缺血再灌注損傷sodsurfactant protein超氧化物歧化酶mdamalondialdehyde丙二醛ca cardiac

2、arrest心跳驟停cprcardiopulmonary resuscitation心肺復(fù)蘇roscrestoration of spontaneous circulation 自主循環(huán)茶多酚對(duì)心肺復(fù)蘇大鼠生存時(shí)間和腎損傷的影響摘 要 目的：各種原因引起的心臟驟停（cardiac arrest, ca）可導(dǎo)致全身器官嚴(yán)重缺血缺氧，及時(shí)有效的心肺復(fù)蘇（cardiopulmonary resuscitation, cpr）可能使部分患者恢復(fù)自主循環(huán)（return of spontaneous circulation, rosc），但與此同時(shí)也帶來各器官組織的缺血再灌注損傷，嚴(yán)重影響復(fù)蘇后生存時(shí)間和

3、生存質(zhì)量。如何降低復(fù)蘇后的死亡率和病殘率是目前醫(yī)學(xué)界最為關(guān)注的熱點(diǎn)之一。茶多酚（tea polyphenols，tp）具有很強(qiáng)的抗氧化作用，對(duì)局部缺血再灌注損傷動(dòng)物心、腦、腎具有保護(hù)作用。心臟驟停與心肺復(fù)蘇的過程同樣可導(dǎo)致全腦缺血再灌注損傷，茶多酚是否能夠通過其抗氧化作用改善cpr預(yù)后?本文通過建立窒息性心臟驟停大鼠模型，對(duì)rosc后大鼠即刻應(yīng)用tp，觀察tp對(duì)血流動(dòng)力學(xué)、生存時(shí)間及神經(jīng)功能的影響，觀察腎臟形態(tài)學(xué)改變，檢測腎組織超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, sod）活力、丙二醛（malondialdehyde，mda）含量的變化，評(píng)價(jià)tp對(duì)cpr的影響，為探索抗氧

4、化劑用于改善cpr后器官功能的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：選用健康sd大鼠，體重320-440 g，水合氯醛麻醉（3ml/kg，腹腔注射），夾閉氣管插管誘導(dǎo)窒息性心臟驟停，8min后給予胸外心臟按壓及機(jī)械通氣。按壓1min時(shí)給予腎上腺素（0.04mg/kg），rosc大鼠經(jīng)靜脈即刻隨機(jī)給予生理鹽水（2ml/kg）或tp（10mg/kg），觀察rosc后1h內(nèi)收縮壓、舒張壓及平均動(dòng)脈壓的變化，rosc后大鼠的存活時(shí)間及復(fù)蘇后24h、48h存活率，并進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。取存活到12h、24h、48h大鼠腎臟，常規(guī)切片，觀察病理改變，腎組織勻漿檢測sod活力、mda含量。結(jié)果：1.tp組與生理鹽水組在ro

5、sc后1h收縮壓、舒張壓和平均壓無顯著性差異，tp組大鼠的生存時(shí)間明顯長于生理鹽水組（37.311.2h vs 24.314.1h, p0.05），tp組rosc后24h、48h生存率明顯高于鹽水組（p0. 01），且24、48 h神經(jīng)功能評(píng)分顯著高于生理鹽水組（p0.05）。2.形態(tài)學(xué)觀察表明，tp能夠減輕大鼠cpr后腎臟結(jié)構(gòu)損傷。復(fù)蘇后12h、24h、48h腎組織勻漿液sod活力、mda含量檢測結(jié)果顯示tp組和生理鹽水組無顯著性差異。結(jié)論：1.tp能改善窒息致心臟驟停大鼠心肺復(fù)蘇預(yù)后，延長復(fù)蘇后大鼠的生存時(shí)間，提高24h和48h生存率，同時(shí)改善神經(jīng)功能。2.tp能減輕窒息致心臟驟停大鼠心肺

6、復(fù)蘇后腎臟結(jié)構(gòu)損傷。關(guān)鍵詞 茶多酚；窒息；心臟驟停；心肺復(fù)蘇；腎保護(hù)the effect of tea polyphenols on survival time and renal injury after resuscitation in ratsabstract objectives:cardiac arrest (ca) caused by a variety of reasons results in severe anoxia and ischemia in bodys organs. although timely and effective cardiopulmonary res

7、uscitation (cpr) can bring return of spontaneous circulation (rosc) in some patients, ischemic reperfusion injury occurs in organs at same time, in turn to impact badly on suvival time and suvival quality after resuscitation. it is one of the most hotspot in medicine at present how to decrease morta

8、lity and disability rate after resuscitation. tea polyphenols has strong antioxidant effect and can protect the heart, brain and kidney in local ischemia reperfusion. cpr and ca cause also ischemic reperfusion injury. if tp can improve cpr outcome via its antioxidant effect?this study evaluates the

9、tp effect on cpr to provide experimental basis for antioxidant treatment on organ functional improvement after resuscitation. tp was used in an asphyxia rat model as soon as posc. hemodynamics, suvival time ane nerve function were monitored, renal morphologic alterations were observation, superoxide

10、 dismutase （sod）and malondialdehyde（mda）of renal tissues were tested.methods: spraguedawley rats, weighing 200-400 g were anesthetized by chloral hydrate（3ml/kg，intraperitoneal injection）. asphyxial cardiac arrest was induced by clamping the tracheal tubes. at the end of 8 min of asphyxiation, cpr w

11、as started with chest press and mechanical ventilation. epinephrine (0.04mg/kg) was injected at 1 min of compression. the animals were treated randomly with either saline (2ml/kg) or tp (10mg/kg) following rosc. the changes of systolic pressure, diastolic pressure, mean arterial pressure were monito

12、red after 1h of rosc. survival time, neurological deficit score (nds) and the survival rate were recorded after 12, 24 and 48h of rosc respectively. the renal conventional sections from 12h, 24h, 48h survival rats were doned to observe pathological changes. sod, mda of renal homogenate of these rats

13、 were assayed.results:1.there was no significant difference in systolic pressure, diastolic pressure, mean arterial pressure within 1h of post-resuscitation in the tp group and the saline group. the survival time of rats in tp group was significantly longer than that of in saline group (37.311.2h vs

14、 24.314.1h, p 0.05), 24h and 48h survival rates in tp group after rosc and nds score were also significantly higher than that of saline group (p 0.01, p 0.05).2. the morphologic observation indicted that tp alleviated renal structural injury in post-resuscitation rats.there not were significant diff

15、erence in sod and mda of renal homogenate of 24h, 48h suvival rats between tp group and saline groupconclusion:1.tp can improve cpr outcome in asphyxial ca rats, presenting the enlongation of survival time, the increase survival rate of 24h and 48h with the improvement of nerve function.2. tp can al

16、leviate renal structural injury in asphyxial ca rats.key words tea polyphenols; asphyxia; cardiac arrest; cardiopulmonary resuscitation; renal protection前 言心肺復(fù)蘇（cardiopulmonary resuscitation, cpr）為呼吸終止及心跳停頓時(shí)，合并使用人工呼吸及心外按摩來進(jìn)行急救的一種技術(shù)。各種原因引起的心臟驟停（cardiac arrest, ca）可導(dǎo)致全身器官組織嚴(yán)重缺血缺氧，及時(shí)有效的心肺復(fù)蘇（cardiopulmo

17、nary resuscitation, cpr）可能使部分患者恢復(fù)自主循環(huán)（return of spontaneous circulation, rosc），但與此同時(shí)也帶來各器官組織的缺血再灌注損傷，嚴(yán)重影響復(fù)蘇后生存時(shí)間和生存質(zhì)量，約四分之三rosc者死于住院期間（死因包括心力衰竭、復(fù)發(fā)心臟驟停、缺血性腦病和感染）或有持久性神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，輕者智力障礙，重者成為植物狀態(tài)，直接影響患者的生活質(zhì)量及生命延續(xù)，給家庭和社會(huì)造成極大的精神傷害和沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。如何降低復(fù)蘇后的死亡率和病殘率是目前醫(yī)學(xué)界最為關(guān)注的熱點(diǎn)之一。cpr后缺血再灌注損傷病理機(jī)制復(fù)雜，已知過量氧自由基損害是其中的一個(gè)重要因素。

18、如果在rosc后補(bǔ)充抗氧化物質(zhì)，消除過多的氧自由基，改善氧自由基生成/抗氧化失衡狀態(tài)，就能及早地阻斷自由基損傷性級(jí)聯(lián)反應(yīng)，將產(chǎn)生rosc后器官保護(hù)作用，有利于延長cpr后動(dòng)物生存時(shí)間，降低死亡率。茶多酚（tea polyphenols，tp）是從茶葉中提取的多酚類成分，在氧化還原反應(yīng)中可以貢獻(xiàn)出數(shù)個(gè)電子，使其它物質(zhì)被還原，因而產(chǎn)生較強(qiáng)的抗氧化作用，抗氧化作用遠(yuǎn)強(qiáng)于vitc、vite1,2，tp能夠阻止過氧化過程中脂質(zhì)過氧化自由基的產(chǎn)生，而生成活性較低的多酚自由基。tp的鄰位二酚羥基具有較強(qiáng)的絡(luò)合金屬離子性能，能夠絡(luò)合游離鐵而減輕自由基的級(jí)聯(lián)反應(yīng)3。tp還可通過絡(luò)合細(xì)胞內(nèi)鈣而降低鈣濃度，防止鈣超

19、載及其所帶來的一系列繼發(fā)性的病理損害4。此外，tp還能夠激活細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)。雖然局部腦缺血再灌注損傷模型研究表明tp能夠通過其抗氧化作用對(duì)神經(jīng)損傷起保護(hù)作用5-9，但tp是否對(duì)cpr的生存時(shí)間和器官損傷產(chǎn)生影響仍未知。本研究建立窒息性ca大鼠模型，復(fù)蘇成功后注射tp，觀察血流動(dòng)力學(xué)、生存時(shí)間、神經(jīng)功能、腎組織結(jié)構(gòu)、腎氧化與抗氧化等指標(biāo)，評(píng)價(jià)tp對(duì)cpr的影響，為探索抗氧化劑用于改善cpr后器官功能的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1.材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康sd大鼠84只，雌雄不拘，體重200400g（由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供）。1.2 主要儀器與藥品alc-v9動(dòng)物呼吸機(jī) 上海奧爾科特生物科

20、技有限公司bl-420f生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng) 成都泰盟科技有限公司小動(dòng)物胸外按壓器 廣西醫(yī)科大學(xué) 空氣壓縮機(jī) 上海捷德機(jī)械電器有限公司高速冷凍離心機(jī)：2k-16 德國 sigma 顆粒制冰機(jī)：lqp-b-4 上海安亭科學(xué)儀器廠電子天平：bs2245 北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司電熱恒溫干燥箱：dh 500-s-ii 上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠三用電熱恒溫水箱：shhwz1cr600 北京長源實(shí)驗(yàn)一起廠生產(chǎn)分光光度器:721 上海第三分析儀器廠：高壓滅菌消毒鍋：ss-325 日本 tomy奧林巴斯生物顯微鏡：cx41 日本olympus10%水合氯醛注射液 廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院5%葡萄糖氯化鈉注射液 武

21、漢濱湖雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司0.9%氯化鈉注射液 武漢濱湖雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司肝素鈉注射液 上海第一生化藥業(yè)有限公司鹽酸腎上腺素注射液 廣州白云山明興制藥有限公司茶多酚干粉 金綠源（中國）生物科技有限公司mda檢測試劑盒:201010201 南京建成生物工程所sod檢測試劑盒:201010201 南京建成生物工程所考馬室亮蘭蛋白檢測試劑盒:201010201 南京建成生物工程所1. 3實(shí)驗(yàn)方法采用腹腔注射10%水合氯醛（3ml/kg）進(jìn)行大鼠麻醉，經(jīng)口把14g插管插入氣管以備接呼吸機(jī)用。行左側(cè)股動(dòng)脈插管以測動(dòng)脈壓，同側(cè)股靜脈插管以便用藥，經(jīng)四肢連線常規(guī)記錄標(biāo)準(zhǔn)ii導(dǎo)聯(lián)心電圖，用bl - 420f

22、生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)連續(xù)同步記錄動(dòng)脈血壓和心電圖。采用氣管夾閉法建立窒息性ca模型。ca定義為動(dòng)脈搏動(dòng)波消失且伴有平均動(dòng)脈壓20mmhg，持續(xù)5min以上23；cpr5min內(nèi)未能恢復(fù)rosc為復(fù)蘇失敗，退出實(shí)驗(yàn)（n=4）。復(fù)蘇5min內(nèi)恢復(fù)rosc的大鼠被分成兩組，生理鹽水組（股靜脈注射生理鹽水，2ml/kg, n=40），tp組（股靜脈注射0.05%tp溶液, 10mg/kg, n=40），連續(xù)60min記錄動(dòng)脈血壓和心電圖變化。60min后拔除動(dòng)靜脈導(dǎo)管并縫合傷口。待大鼠出現(xiàn)自主呼吸40次/min，停用呼吸機(jī)1min后血壓、心率和呼吸狀況穩(wěn)定或持續(xù)好轉(zhuǎn)時(shí)拔除氣管插管，撤離呼吸機(jī)。將大鼠放入籠

23、中，觀察48h內(nèi)存活時(shí)間（自主循環(huán)恢復(fù)到自主呼吸消失），24h、48h的存活率，并在24h、48h進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。參照jia等24 的神經(jīng)功能評(píng)分方法，從意識(shí)、基本反射、運(yùn)動(dòng)、感覺、行為學(xué)等方面對(duì)存活大鼠在rosc后24h、48h進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，標(biāo)準(zhǔn)如下：神經(jīng)功能評(píng)分系統(tǒng)a 一般行為缺陷總分：19分意識(shí)，知覺正常10；昏迷5；無反應(yīng)0； 覺醒 自動(dòng)睜眼3；刺激睜眼1；無睜眼0； 呼吸 正常6；異常（過緩或過快）3；無呼吸0；b腦干功能總分：21分 嗅覺（對(duì)食物的反應(yīng)）存在3；不存在0 視覺（光刺激的頭部運(yùn)動(dòng)）存在3；不存在0 瞳孔對(duì)光反應(yīng)存在3；不存在0 角膜反應(yīng)存在3；不存在0 驚跳反應(yīng)

24、存在3；不存在0 胡須刺激反應(yīng)存在3；不存在0 吞咽：吞咽液體或固體存在3；不存在0c運(yùn)動(dòng)評(píng)估：強(qiáng)度（總分：6分，左右各3分）正常3；僵硬或軟弱1；無運(yùn)動(dòng)或癱瘓0；（左右兩邊單獨(dú)評(píng)分，）d感覺評(píng)估：疼痛刺激反應(yīng)（總分6分，左右各3分）反應(yīng)靈敏3；反應(yīng)弱或異常（延展或屈曲姿勢(shì)）1；無反應(yīng)0；（左右兩邊單獨(dú)評(píng)分）e自主行為總分：6分； 步態(tài)協(xié)調(diào)正常3分；異常1；不存在0； 平衡木行走正常3分；異常1；不存在0；f反射 總分：12分； 正位反射，直反射正常3分；異常1；不存在0； 拒絕趨地反射正常3分；異常1；不存在0； 視覺配合正常3分；異常1；不存在0； 轉(zhuǎn)向試驗(yàn)正常3分；異常1；不存在0；g癲

25、癇發(fā)作（痙攣性或非痙攣性）：（總分10；）無癲癇10；部分癲癇5；完全癲癇；注：平衡木試驗(yàn)：在一離地面0.5m,寬2cm長1m的木棍上行走。走完1m者為正常；未能走完1m,并停留在木棍上或者跌落者為異常；放在木棍上立即跌落者為不存在。正位反射：即反正反射，強(qiáng)迫鼠背接觸地面，大鼠能自己翻身。轉(zhuǎn)向試驗(yàn)：在一長0.5m的胡同里行走，走到離盡頭15cm時(shí)自動(dòng)轉(zhuǎn)向。視覺配合：鼠尾被吊起，大鼠能夠通過視覺調(diào)整并適應(yīng)自身的位置。拒絕趨地反射：背靠一傾斜45度斜面的大鼠能糾正過來并向上移動(dòng)。評(píng)分范圍為0-80分，0分為死亡，80分為完全正常，評(píng)分由兩人分別測定后取平均分值。分別取rosc后存活到12h、24h

26、、48h時(shí)間點(diǎn)的大鼠腎臟，置于4%多聚甲醛中再固定、脫水、石蠟包埋、常規(guī)切片（厚度為4 um），在光鏡下觀察形態(tài)變化。另取腎組織，勻漿，按試劑盒說明操作，采用分光光度計(jì)測定勻漿液超氧化物歧化酶（sod）活力和丙二醛（mda）含量。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用spss13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，比較用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用2檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)，p0.05為差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2. 結(jié)果2. 1窒息前兩組大鼠基礎(chǔ)參數(shù)比較 窒息前兩組大鼠的體重、心率、血壓、體溫參數(shù)比較無明顯差異，見表1。表1 兩組大鼠基礎(chǔ)參數(shù)比較( s)組 別茶多酚組（n=40）鹽水組（n=40）體重（g）33

27、0.189.6331.5.695.9心率（次/分）418.425.6426.831.2收縮壓（mmhg）136.124.1134.821.9舒張壓（mmhg）103.718.894.420.0平均動(dòng)脈壓（mmhg）118.020.5111.020.1體溫（。c）35.81.036.30.92.2 rosc后血壓的比較2.2.1 rosc后，兩組大鼠的收縮壓比較無顯著性差異，見圖1。04080120160200blpr2pr4pr10pr20pr30pr40pr50pr60time(min)sbp(mmhg)鹽水組茶多酚組圖1 自主循環(huán)恢復(fù)60分鐘后兩組大鼠收縮壓比較（p0.05）（bl=bas

28、eline,基礎(chǔ)狀態(tài)，pr=post resuscitation, 復(fù)蘇后）2.2.2 rosc后，兩組大鼠的舒張壓比較無顯著性差異，見圖2。04080120160200blpr2pr4pr10pr20pr30pr40pr50pr60time(min)dbp(mmhg)鹽水組茶多酚組圖2自主循環(huán)恢復(fù)60分鐘后兩組大鼠舒張壓比較（p0.05）（bl=baseline,基礎(chǔ)狀態(tài)；pr=post resuscitation, 復(fù)蘇后）2.2.3 rosc后，兩組大鼠的平均動(dòng)脈壓比較無顯著性差異，見圖3。04080120160200blpr2pr4pr10pr20pr30pr40pr50pr60tim

29、e(min)map(mmhg)鹽水組茶多酚組圖3 自主循環(huán)恢復(fù)60分鐘后兩組大鼠平均動(dòng)脈壓比較（p0.05） （bl=baseline,基礎(chǔ)狀態(tài)；pr=post resuscitation, 復(fù)蘇后）2.3 rosc時(shí)間和存活時(shí)間比較 兩組大鼠rosc時(shí)間無顯著性差異。但tp組大鼠的存活時(shí)間明顯長于生理鹽水組（p0.05），見表2。表2 自主循環(huán)恢復(fù)時(shí)間和存活時(shí)間的比較(s)組 別自主循環(huán)恢復(fù) (s)存活時(shí)間(h)tp組（n=40）99.636.437.311.2*生理鹽水組（n=40）116.349.524.314.1 與鹽水組比較，*，p0.05 2.4不同時(shí)間點(diǎn)存活率比較rosc后，tp

30、組大鼠24h、48h 存活率明顯高于鹽水組(p0.01)，見表3。表3 兩組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)存活率比較組 別24h48htp組（n=40）85.0%*（n=34） 40.0%*（n=16）生理鹽水組(n=40)假復(fù)蘇組(n=5)52.5%（n=21）100%(n=5)15.0%（n=6）100%(n=5) 與鹽水組比較，*，p0.01 2.5神經(jīng)功能評(píng)分比較 tp組大鼠24h、48h 神經(jīng)功能評(píng)分明顯高于生理鹽水組（p0.05），見表4。表4 兩組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分比較m(p25，p75)組 別24h評(píng)分48h評(píng)分tp組57(47,62) * 0(0,68) *生理鹽水組假復(fù)蘇組35(0,54)8

31、00(0,0)80 與鹽水組比較， *，p0.052.6腎組織形態(tài)學(xué)觀察2.6.1肉眼觀察（1）假復(fù)蘇組：外觀無異常，表面光滑、飽滿，質(zhì)軟，彈性好，呈暗紅色。（2）tp組：表面光滑、飽滿，質(zhì)稍軟，彈性較好，呈暗紅色；（3）生理鹽水組：腫脹，呈暗紅色，部分可見明顯散在瘀斑。3.6.2 光鏡觀察假復(fù)蘇組腎小球結(jié)構(gòu)完好，腎小管上皮細(xì)胞大多無明顯腫脹，亦無變性、壞死，間質(zhì)改變不明顯(見附圖1)。生理鹽水組光鏡可見腎小球萎縮，腎小管上皮細(xì)胞變性壞死、脫落，腎間質(zhì)水腫(見附圖2)。tp組以腎小管腫脹為主，上皮細(xì)胞壞死、脫落較少，腎小球也有一定程度的萎縮(見附圖1)。2.7腎組織sod、mda測定表5 三組

32、大鼠腎臟sod活性、mda值比較指標(biāo)組別茶多酚組鹽水組假復(fù)蘇組mda(nmol/ml)12h1.8020.38 1.840.361.460.31 24h1.7120.241.680.351.560.2848h2.010.281.540.141.510.46sod(u/ml)12h25.366.2728.116.8326.066.8824h27.256.4228.844.5628.676.7248h23.946.6125.654.8128.066.163.討論ca和cpr后機(jī)體重要器官心臟和大腦在結(jié)構(gòu)和功能上遭受的損傷是由兩個(gè)病理階段造成的。第一階段是在ca期間，全身血液循環(huán)停止，各器官嚴(yán)重缺血

33、缺氧，啟動(dòng)了一系列病理變化過程：缺血缺氧后，組織葡萄糖、atp快速耗竭，糖酵解產(chǎn)物生成和脂肪酸類物質(zhì)堆積使細(xì)胞內(nèi)酸中毒；能量耗竭后，離子泵失活，細(xì)胞內(nèi)鈉滯留，膜內(nèi)電位去極化，na/ca交換異?；蚰り栯x子通道開放，鈣進(jìn)入細(xì)胞增多和胞內(nèi)鈣庫攝、貯功能阻礙，使胞漿鈣大量增加；胞內(nèi)鈣超載又引起線粒體損傷，而線粒體損傷繼而引起氧自由基生成。神經(jīng)細(xì)胞鈣超載還可促進(jìn)興奮性氨基酸大量釋放，產(chǎn)生毒性反應(yīng)10。第二階段發(fā)生在cpr停止和rosc后，源于缺血再灌注損傷。多種損害因素，如氧自由基、鈣超載、炎癥因子、血液高凝性、血栓形成與微循環(huán)障礙等（神經(jīng)損害還涉及到興奮性氨基酸的毒性作用）導(dǎo)致心肺復(fù)蘇成功者在心臟方面

34、發(fā)生心肌頓抑、心臟收縮和舒張功能減退；在中樞神經(jīng)方面發(fā)生壞死、凋亡，從而導(dǎo)致早期復(fù)蘇成功者最終死亡或持久性神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥。氧自由基，如超氧化物、羥氧自由基是引起ca/cpr心、腦首次和二次損傷的主要因素之一。心跳停博患者經(jīng)搶救，恢復(fù)自主循環(huán)后，雖然心腦供血、供氧有所恢復(fù)，但線粒體正常功能尚未恢復(fù)，氧供應(yīng)水平超過了線粒體能夠利用的水平，以至氧自由基通過多個(gè)途徑爆發(fā)式生成：（1）缺血使線粒體dna受損，呼吸鏈復(fù)合物電子傳遞受破壞，黃素腺嘌呤二核苷酸依賴性復(fù)合物途徑被過度利用，次黃嘌呤轉(zhuǎn)化為黃嘌呤，黃嘌呤分解為尿素反應(yīng)中都伴隨超氧陰離子（o2-）釋放。（2）細(xì)胞鈣內(nèi)流增加，觸發(fā)花生四烯酸代謝，花生四

35、烯酸轉(zhuǎn)化為pgh2中釋放o2-。（3）神經(jīng)型一氧化氮合酶激活，使過亞硝酸鹽（onoo-）產(chǎn)生。（4）神經(jīng)系統(tǒng)小膠質(zhì)細(xì)胞、血液白細(xì)胞激活也可產(chǎn)生氧自由基。另一方面，內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)大量消耗，使自由基生成/清除嚴(yán)重失衡，引發(fā)自由基損傷性級(jí)聯(lián)反應(yīng)，表現(xiàn)為：（1）使膜脂質(zhì)過氧化，細(xì)胞結(jié)構(gòu)、膜離子轉(zhuǎn)運(yùn)和屏障功能被破壞。（2）誘導(dǎo)dna、rna、多糖和氨基酸等大分子物質(zhì)交聯(lián)變性或斷裂，繼而引起細(xì)胞死亡和（或）凋亡。（3）激活白細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸鹽氧化酶，引起一系列血管性病理反應(yīng)：白三烯和血小板激活因子生成，內(nèi)皮粘附因子（p-選擇素、細(xì)胞間粘附分子-1）表達(dá)增多，抗粘附因子失活，促

36、進(jìn)微血栓形成，微循環(huán)障礙11。因此，抗氧化、阻斷氧自由基級(jí)聯(lián)反應(yīng)是cpr治療的一條思路。tp是茶葉中多羥基酚類化合物的總稱，主要成分為兒茶素類、黃酮類、黃酮醇類、花青素類、酚酸、縮酚酸類及聚合酚類等, 其中兒茶素類約占總量的65% 80%。兒茶素類主要包括表兒茶素 ( ec) 、表沒食子兒茶素( egc) 、表兒茶素沒食子酸酯( ecg)和表沒食子兒茶素沒食子酸酯( egcg) 4 種物質(zhì), 其中egcg約占兒茶素的50 %左右12。tp能夠通過多種途徑產(chǎn)生抗氧化作用13：（1）直接清除氧自由基，tp分子中帶有多個(gè)活性羥基（oh），易氧化成醌類而提供質(zhì)子，有效地清除超氧陰離子( o- 2 )

37、、羥自由基(：oh ) 、單線態(tài)氧( 1o2 ) 及過氧化氫( h2o2 )及中間產(chǎn)物脂過氧自由基和烷氧自由基而終止鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。（2）螯合金屬離子，在中性或酸性條件下, tp的鄰位二酚羥基對(duì)過渡態(tài)金屬離子有一定的絡(luò)合作用, 從而阻止金屬離子對(duì)活性氧等自由基的生成。（3）激活細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)。我們?cè)趓osc后即刻靜脈注射tp，與生理鹽水組比較，tp對(duì)復(fù)蘇后大鼠動(dòng)脈血壓影響不大，但能夠顯著地延長復(fù)蘇后大鼠生存時(shí)間和提高24h、48h生存率，并且能夠提高生存大鼠的神經(jīng)功能。本研究結(jié)果表明了tp對(duì)cpr的抗氧化治療效果，提示tp通過清除cpr后過量生成的氧自由基和/或阻斷氧自由基級(jí)聯(lián)反應(yīng)及增強(qiáng)機(jī)體抗

38、氧化系統(tǒng)功能多方面的作用，減輕cpr后機(jī)體器官的缺血再灌注損傷，有效地提高cpr救治效果。這一結(jié)果也支持了其他cpr后抗氧化研究所提示的意義：xu y等14發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因過氧化物岐化酶高表達(dá)大鼠ca/cpr后腦血流量恢復(fù)到正常水平的時(shí)間短于野生大鼠，而且生存狀態(tài)也優(yōu)于野生大鼠。cerchiari el等15對(duì)窒息誘發(fā)ca的實(shí)驗(yàn)狗實(shí)施cpr時(shí)，靜脈注射過氧化物歧化酶配合治療，能夠減小復(fù)蘇后腦血流量的波動(dòng)和提高肢體感覺喚起能力。dezfulian c等16觀察到硝酸鹽能夠調(diào)節(jié)再灌注早期線粒體活性氧的產(chǎn)生，阻滯急性心功能衰竭和減輕存活者神經(jīng)損傷程度，提高ca小鼠cpr后存活率。比較吸入不同含氧量氣體對(duì)c

39、a/cpr后神經(jīng)損傷的影響的實(shí)驗(yàn)也表明了氧化與抗氧化的相互關(guān)系：高氧組（fio2 = 1.0）狗復(fù)蘇后12和24h小時(shí)的神經(jīng)損傷明顯大于常氧組（fio2 = 0.21）和高氧+抗氧化劑組，提示抗氧化劑在一定程度上可以減輕高氧造成的神經(jīng)損害17。甲磺酸酯是一種膜脂質(zhì)過氧化抑制劑，能夠減輕實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的缺血再灌注損傷，促進(jìn)器官功能、包括神經(jīng)功能的恢復(fù)18。對(duì)電刺激誘發(fā)室顫致ca的狗模型，行常溫、常規(guī)cpr，rosc后靜脈給予脂質(zhì)過氧化抑制劑（氨基類固醇u74006f），與檸檬酸對(duì)照組比較，顯示復(fù)蘇后24h存活率提高，平均生存時(shí)間延長，復(fù)蘇后1，2，24h呈現(xiàn)更好的神經(jīng)功能指標(biāo)，復(fù)蘇后12h更低的血漿脂

40、肪酸過氧化物濃度，復(fù)蘇后2，3，6h更高的血漿維生素e濃度19。研究tp對(duì)不同器官cpr后缺血再灌注損傷的影響是探明其提高生存效果機(jī)制的重要工作，tp對(duì)心臟、神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用由課題組其他成員進(jìn)行，本文從顯微結(jié)構(gòu)和sod、mda方面探討了tp對(duì)cpr后腎臟的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，tp對(duì)crp大鼠腎臟結(jié)構(gòu)具有保護(hù)作用，主要表現(xiàn)為減輕腎小管上皮細(xì)胞壞死、脫落，減輕間質(zhì)水腫。此作用有助于機(jī)體重要器官心臟和大腦的恢復(fù)，提高cpr大鼠的生存時(shí)間和24h、48h的生存率。雖然腎組織sod活性、mda含量在tp組、假復(fù)蘇組和生理鹽水組之間沒有明顯差異，但不能否定tp抵抗cpr后腎臟結(jié)構(gòu)的病理改變與其抗氧化

41、活性有關(guān)。在缺血再灌注損傷病理作用中，氧自由基的損害是多方面的，除了削弱體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)功能（sod是其中的一個(gè)還原酶）、氧化不飽和脂肪酸（mda是其中的一個(gè)氧化產(chǎn)物）外，還通過其它途徑產(chǎn)生損害作用。氧自由基使內(nèi)皮細(xì)胞和黏膜細(xì)胞通透性增加，炎性細(xì)胞滲出、浸潤；激活中性粒細(xì)胞產(chǎn)生一系列毒性因子, 使組織損傷；直接損傷腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞,使腎小球系膜細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞變性、壞死20；通過細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路引發(fā)細(xì)胞凋亡21。因此，要探明tp對(duì)crp大鼠腎臟結(jié)構(gòu)保護(hù)作用的機(jī)制，還有大量的工作需要去作。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)呈現(xiàn)了抗氧化劑對(duì)cpr后心、腦的保護(hù)作用的治療價(jià)值，但卻未得到臨床應(yīng)用的肯定，主要原因：一是

42、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究用的抗氧化劑多是化學(xué)品而非臨床用藥，故無臨床報(bào)道；二是抗氧化劑治療的時(shí)間窗短暫。大量氧自由基于ca和rosc后瞬間產(chǎn)生和瞬間發(fā)生損害作用，抗氧化劑須在cpr期間或rosc后及時(shí)使用才會(huì)有明顯效應(yīng)，而臨床實(shí)施cpr時(shí)不可能作實(shí)驗(yàn)性觀察，一些抗氧化劑對(duì)cpr后心、腦的保護(hù)作用觀察也是延遲性，故療效不確定。因此，從現(xiàn)用的疾病防治品中尋找能夠改善復(fù)蘇預(yù)后的有效抗氧化物應(yīng)更具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。tp能夠改善常規(guī)cpr動(dòng)物的救治效果，取決于其高效的抗氧化活性、較高的安全性（為天然物質(zhì)）、給藥的及時(shí)性（我們?cè)趓osc后即刻使用）。我們的工作豐富了cpr研究內(nèi)容，為抗氧化劑應(yīng)用于cpr提供了實(shí)驗(yàn)研究依

43、據(jù)。 參考文獻(xiàn)1方芳, 崔志清, 韓永晶 茶兒茶素抗大鼠腦缺血再灌注損傷與對(duì)腦細(xì)胞內(nèi)ca2的作用，中國藥學(xué)雜志，2003，38(12): 917-919.2wei ih, wu yc, wen cy,ect. green tea polyphenol (-)-epigallocatechin gallate attenuates the neuronal nadph-d/nnos expression in the nodose ganglion of acute hypoxic rats, brain res, 2004, 999(1):73-80.3zhou x, fan gc, ren

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