藥學專業(yè)體內藥分作業(yè)

1、體內藥物分析作業(yè)分析方法建立后需進行包括準確度、精密度等一系列的評價項目進行驗證。請問：對所建立的藥物體外及體內分析方法，其驗證要求有何不同，為什么？舉2文獻說明，標明文獻出處。評價一個體內藥物分析方法的優(yōu)劣主要有以下幾個指標：精密度、準確度、靈敏度、專屬性或選擇性、可測濃度范圍、測定所需時間以及對生物樣品的適應性(分析方法要模擬生物樣品在預處理或儲存容器中的狀態(tài)，是生物樣品保持穩(wěn)定性)等。由于體液中的藥物含量通常很低，且樣品量往往一定，同時一些內源性雜質和藥物代謝產(chǎn)物會干擾分析，故對分析方法驗證要求靈敏度更高，選擇性（分離雜質能力強）更好，還應與生物樣品相適應，保持樣品穩(wěn)定性。例一高效液相色

2、譜法測定石杉堿甲微球在大鼠體內的血藥濃度及藥物殘留量（符旭東，平其能，高永良，中國藥科大學藥劑教研室,20031210)本文首先用堿化后有機溶劑提取的方法處理樣本,然后采用乙腈和含02的三乙胺水溶液作為流動相的主要組成，通過調節(jié)二者的比例，可在排除內源性物質干擾的前提下，盡量地縮短保留時間提高檢測的靈敏度。本文曾比較三氯甲烷和乙酸乙酯的提取效果，結果表明用三氯甲烷提取血漿樣本，可在滿足提取回收率大于70的前提下，減少內源性物質的萃取。而用乙酸乙酯提取肌肉勻漿液樣本，可獲得更高和更穩(wěn)定的提取回收率。結果：血漿樣品測定的線性范圍為25500g/l，最低定量濃度為25g/l。肌肉勻漿液樣本測定的線性

3、范圍為10082016 mg/l，最低定量濃度為1008 mg/l。兩種方法的相對回收率均在85115范圍內。rsd小于12。與另一篇文獻中，體外檢測藥物含量相比，便可說明體內藥物分析的高靈敏性和高選擇性。如：石杉堿甲注射用緩釋微球制備方法的比較及其體內外評價(潘峰，陳慶華怫，包泳初，朱大元，蔣山好,上海醫(yī)藥工業(yè)研究院)中，檢測石杉堿的含量，便為體外為普通的藥物檢測。例二芐片人體藥動學及生物利用度(王珍，金銳，于景翠，杜智敏，哈爾濱醫(yī)科大學第二臨床醫(yī)學院臨床藥學藥物研究所，黑龍江省高校重點實驗室，黑龍江哈爾濱150081)研究頭孢氨芐片在健康人體內的血藥濃度經(jīng)時過程及人體生物利用度。方法采用h

4、plc法測定20名健康受試者單劑量1：3服19頭孢氨芐片受試制劑及參比制劑后的藥動學數(shù)據(jù)。經(jīng)過血漿樣品處理，血漿標準曲線的制備，回收率與精密度試驗等血漿中頭孢氨芐的最低檢出濃度為05mgl，回收率及日內、日間變異系數(shù)等，均符合生物等效性試驗的要求hplc法測定頭孢氨芐甲氧芐啶膠囊含量的方法改進(韓志云，朱迎春江蘇省淮安藥品檢驗所淮安2230001)以hplc法同時測定復方頭孢氨芐甲氧芐啶 膠tt中頭孢氨芐與甲氧芐啶的含量。方法 以o02mol/l一磷酸溶液(用20氫氧化鈉調節(jié)ph值至3-5o05)-乙腈(85：15)為流動相，檢測波長為235nm。結果 頭孢氨芐在10009000g/ml、甲氧

5、芐啶在20018-00g/ml范圍內，峰面積與其濃度呈良好線性關系；頭孢氨芐平均回收率為100%、rsd為015 ；甲氧芐啶平均回收率為1001% 、rsd為019.23 1的hplc法含量測定色譜條件：色譜柱cl b柱(46 mmx250 mm，5am)；流動相甲醇008 moll乙酸銨緩沖液(ph 6o)(50：50)；檢測波長3 10 nm；流速10mlmin；柱溫40；進樣量20 ul。測定方法：精密稱取l微球25 mg置lo ml量瓶中，加乙腈2 iill，渦旋至溶解，用甲醇定容，搖勻。經(jīng)045岬尼龍濾膜過濾，濾液以流動相稀釋10倍，經(jīng)離心(17 000xg)10 min后，取上清液

6、進樣測定。標準曲線和方法學研究：精密稱取1原藥適 量，用甲醇制得濃度分別為125、25、5、10、20 ltgml的標準溶液，進樣測定，以峰面積(a)對l濃度(c)線性回歸，得回歸方程為a=51105c一38103，r=0999 9。高、中、低濃度樣品的絕對回收率分別為(9994-104)，(1000士002)，(993士026)(珂=3)；日內月肋分別為07l、09l、266(n=5)；日間尺分別為151、o76、274(，產(chǎn)5)。24微球體外釋藥精密稱取1微球50 mg置具塞玻璃瓶中，加入釋放介質ph 74磷酸鹽緩沖液(pbs)，含nan，、吐溫-80、吐溫一20各002100 ml，于3

7、7水浴振蕩(110 rmin)中進行釋放試驗。分別于d1、3、5、7、10、14、1 6取樣l m1，并補充同溫等量釋放介質，離心(1 7 000xg)10 min，取上清液進樣測定。標準曲線：精密稱取1適量，用釋放介質制得濃度為125、25、5、10、20 i，tgml的標準溶液，進樣測定，以峰面積(彳)對1濃度(c)線性回歸，得回歸方程為峰面積a=51x105c_19104，r=0999 9。兩種方法制得l微球的體外釋放見圖2。結果表明，ow法所得微球的首日突釋明顯大于oo法所得微球。原因與1易隨乙酸乙酯擴散至外水相有關，嵌在plga微球骨架表層或近表層的藥物釋放。d10起釋藥速度減緩，d

8、16仍停留在約75水平。而oo法制備的微球能緩釋14d，藥物基本釋完。25微球體內釋藥參考并改良了國外檢測黃體激素釋放激素(lhrh)的方法bj，將1微球注入大鼠腹部皮下后，于不同的時間間隔小心切取注射部位的微球和肌肉組織，勻漿化后測定殘留的藥量，間接反映微球的體內釋藥速度。雄性sd大鼠36只，隨機分成6組，每組6只。精密稱取l微球適量置安瓿中，用含05羧甲纖維素鈉和01吐溫80的水溶液混懸。每只大鼠于腹部皮下注射05 ml(相當于1 2 mg)。同時用適量乙腈溶解注射器及安瓿中殘余的微球，測定殘余的藥量，計算實際給藥量。大鼠回籠飼養(yǎng)，分別于注射微球后d1、3、5、7、10、14處死1只，剖開

9、注射部位的表皮，小心取下微球及周圍組織，冷凍后切成薄片，置玻璃勻漿器中，加乙腈一水(9：1)2 ml，反復研磨5 min，用流動相稀釋至10 m1，渦旋混勻，離心(17 000xg)10 min后，取上清液進樣測定。標標準曲線取大鼠腹部肌肉，加乙腈一水(9：1)適量制成勻漿液。取2 ml，共6份，分別加入50 tagml的1溶液01、02、05、1、2、4 m1，用流動相定容至10 ml，渦旋混勻，制成濃度為05、l、25、5、10和20 irtgml的樣品溶液，離心(17 000xg)10 min后，取上清液進樣測定，以峰面積(彳)對1濃度(c)線性回歸，得回歸方程為a=48x 105c一22104，r=0999 9。定量限為05agml。取上述大鼠肌肉勻漿液2 ml，共3份，加入適量plga的乙腈溶液，再分別加入50 i_tgml的l溶液02、l、4 ml，用流動相定容至10 ml，渦旋混勻，制成濃度為1、5、20 lagml的樣品溶液，離心(17 000xg)10 min后，取上清液進樣測定。計算得回收率分別為