戴安液相色譜故障診斷

1、HPLC的故障診斷與維修I. 常見問題常見問題 基線噪音基線噪音可能的原因：可能的原因：流動(dòng)池臟檢 測 器 燈 有 問 題如果是周期性的，電壓或泵的脈沖溫度對檢測器的影響氣泡經(jīng)過檢 測 器Time (min.)基線漂移基線漂移 梯度洗脫 溫度不穩(wěn)定 (示差檢測器） 流動(dòng)相中有污染物 柱中的流動(dòng)相沒有平衡 體系中有污染物流出可能的原因：可能的原因：鬼鬼 峰峰 鬼峰即使不進(jìn)樣也會(huì)出現(xiàn)的峰沒有進(jìn)樣601530150371517問題1- 流動(dòng)相臟問題2- 容器污染問題3- 柱子污染20% - 100% MeOH沒有進(jìn)樣峰峰 型型雙 峰柱 塌 陷正 常 峰 雙 峰柱中有死體積 過濾片部分堵塞只有一個(gè)雙峰

2、組分的共洗脫可能原因：可能原因：樣品與溶劑不匹配，溶劑與柱子不匹配峰峰 型型所有的峰都展寬柱效降低柱死體積大進(jìn)樣量 / 質(zhì)量高粘度流動(dòng)相 部分峰展寬前次進(jìn)樣后流出的組分大分子量樣品蛋白或聚合物峰展寬樣品與流動(dòng)相不匹配峰峰 型型拖尾峰對稱性 1.2NormalTailingNormalTailing原因：原因：部分峰拖尾二次保留效應(yīng)殘留硅醇基的反應(yīng)小峰緊跟在大峰的后面流出柱頭有污染金屬所有峰拖尾額外的柱效應(yīng)柱壞/不適當(dāng)?shù)娜軇┎贿m當(dāng)?shù)臉悠妨糠宸?型型正常峰伸舌峰前伸峰不對稱性 0.9可能的原因可能的原因柱過載在大峰前，有小峰流出樣品溶劑不適當(dāng)柱死體積過濾片部分堵塞峰峰 型型原因: 流動(dòng)相吸收本底高

3、 進(jìn)樣過程中進(jìn)了空氣 離子對分離中的系統(tǒng)峰 樣品組分的吸收(RI或UV)低于流動(dòng)相寬寬 峰峰柱外體積增加* 在進(jìn)樣口到柱或柱到檢測器之間，使用細(xì)的短的連接管* 保證所有的管路接頭都使用正確* 用小體積檢測池* 減少進(jìn)樣量或降低樣品濃度HPLC常見問題系統(tǒng)壓力問題壓力高壓力低或沒有壓力壓力不穩(wěn)流路基線噪音問題基線不穩(wěn)定(不重復(fù))長、短程振蕩基線漂移噪音脈沖尖刺HPLC常見問題分析系統(tǒng)壓力問題壓力高的原因溫度太低流速太高流動(dòng)相粘度大管路堵塞儀器或色譜柱堵塞壓力傳感器問題HPLC常見問題分析(續(xù))系統(tǒng)壓力問題壓力低或沒有壓力溫度太高;流速太低泵關(guān)閉或保險(xiǎn)絲斷了泵未輸送流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶中無溶劑 低壓限設(shè)置

4、不當(dāng)泵未正確排氣溶劑入口過濾頭堵 入口管路中有空氣泵失效系統(tǒng)內(nèi)有滲漏處所用溶劑不正確自動(dòng)進(jìn)樣器在Purge時(shí)卡住HPLC常見問題分析(續(xù))系統(tǒng)壓力問題壓力不穩(wěn)壓力傳感器問題泵排氣不充分泵失效流動(dòng)相未正確脫氣所用溶劑不混溶或易揮發(fā)HPLC常見問題分析(續(xù))流路基線噪音問題短程振蕩泵壓不穩(wěn)泵入口管松,彎或堵塞溶劑混合不充分檢測池中有大氣泡泵入口閥臟或失效泵柱塞桿密封墊磨損檢測器出口溶液成滴狀流入廢液瓶判斷故障與故障排除的原則 規(guī)則一 確認(rèn)問題至少發(fā)生兩次以上。如果問題不重復(fù) 出現(xiàn)，很難證實(shí)其確實(shí)存在。 規(guī)則二 一次只變化一個(gè)因素，以使你能夠確認(rèn)所變因 素與問題之間的關(guān)聯(lián)。 規(guī)則三 恢復(fù)原狀。如果使

5、用更換組件方法來查找問題 之所在,完畢后應(yīng)將原有完好組件安裝回原處。 否則,換下的組件將來很難再利用,會(huì)造成浪費(fèi)。 規(guī)則四 嘗試預(yù)測將來可能發(fā)生的問題。利用成功的故 障排除經(jīng)驗(yàn)來改善您目前的預(yù)防保養(yǎng)工作,使現(xiàn) 有問題再發(fā)率降至最低。 規(guī)則五 養(yǎng)成記錄的好習(xí)慣。一個(gè)好記錄是成功地進(jìn)行 故障排除的關(guān)鍵。色譜圖常見問題色譜圖常見問題主要有兩類:色譜峰峰形異常問題例如負(fù)峰,寬峰,肩峰,雙峰,峰形不對稱等色譜峰保留時(shí)間問題保留時(shí)間不穩(wěn)定等色譜圖常見問題分析(一)色譜峰峰形異常問題:色譜圖中未出峰:進(jìn)樣問題:未進(jìn)樣或樣品分解流動(dòng)相問題:泵未輸液或流動(dòng)相不正確檢測器設(shè)置不正確,或檢測器有問題一個(gè)或幾個(gè)峰是負(fù)

6、峰流動(dòng)相吸收本底高進(jìn)樣過程中進(jìn)了空氣離子對分離中的系統(tǒng)峰樣品組分的吸收(RI或UV)低于流動(dòng)相色譜圖常見問題分析(一)(續(xù))色譜峰峰形異常問題:峰比預(yù)想的要小樣品粘度過大進(jìn)樣器有問題或進(jìn)樣體積有誤檢測器設(shè)置不正確,定量環(huán)(Loop)體積不正確檢測器輸出未置零用了不正確的檢測器輸出信號(hào)檢測池被污染檢測器的燈可能有問題色譜圖常見問題分析(一)(續(xù))色譜峰峰形異常問題:雙峰或肩峰進(jìn)樣量或樣品濃度過大保護(hù)柱或色譜柱進(jìn)口堵塞保護(hù)柱或色譜柱污染或失效前伸峰進(jìn)樣量或樣品濃度過大溶樣的溶劑相對于流動(dòng)相太強(qiáng)保護(hù)柱或色譜柱污染或失效色譜圖常見問題分析(一)(續(xù))色譜峰峰形異常問題:拖尾峰保護(hù)柱或色譜柱問題:污染或

7、失效(選擇合適的柱子)進(jìn)樣問題檢測器時(shí)間常數(shù)不正確平頭峰檢測器設(shè)置不正確進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高色譜峰保留時(shí)間問題:保留時(shí)間飄忽不定(各次運(yùn)行之間)系統(tǒng)不穩(wěn)定或未達(dá)化學(xué)平衡泵壓力不穩(wěn)(泵頭里有氣泡)進(jìn)樣體積過大或樣品濃度過大溫度波動(dòng)流動(dòng)相混合不均勻色譜柱被污染色譜圖常見問題分析(二)色譜峰保留時(shí)間問題:保留時(shí)間增加或減少(各次運(yùn)行之間)系統(tǒng)不穩(wěn)定或化學(xué)平衡不足泵流速變化溫度變化色譜柱污染,柱效下降流動(dòng)相被污染溶劑入口過濾器堵或管路堵塞系統(tǒng)滲漏色譜圖常見問題分析(二)(續(xù))色譜圖常見問題分析(二)(續(xù))色譜峰保留時(shí)間問題:保留時(shí)間改變到一個(gè)新的恒定值流動(dòng)相不正確或其組成不正確泵流速變化實(shí)際輸液

8、的流速不正確(泵失靈或故障)環(huán)境溫度變化；柱溫不正確色譜柱尺寸或類型不正確色譜柱被污染流動(dòng)相含有穩(wěn)定劑或穩(wěn)定劑發(fā)生變化輸液系統(tǒng)的梯度滯后體積不正確色譜圖常見問題色譜圖常見問題主要有兩類:色譜峰峰形異常問題例如負(fù)峰,寬峰,肩峰,雙峰,峰形不對稱等色譜峰保留時(shí)間問題保留時(shí)間不穩(wěn)定等色譜圖常見問題分析(一)色譜峰峰形異常問題:色譜圖中未出峰:進(jìn)樣問題:未進(jìn)樣或樣品分解流動(dòng)相問題:泵未輸液或流動(dòng)相不正確檢測器設(shè)置不正確,或檢測器有問題一個(gè)或幾個(gè)峰是負(fù)峰流動(dòng)相吸收本底高進(jìn)樣過程中進(jìn)了空氣離子對分離中的系統(tǒng)峰樣品組分的吸收(RI或UV)低于流動(dòng)相色譜圖常見問題分析(一)(續(xù))色譜峰峰形異常問題:所有的峰均

9、為負(fù)峰:信號(hào)電纜接反或檢測器輸出極性設(shè)置顛倒光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡所有的峰都是寬峰系統(tǒng)未平衡或未達(dá)到化學(xué)平衡溶樣的溶劑比流動(dòng)相強(qiáng)很多色譜柱類型或尺寸不正確色譜柱或保護(hù)柱被污染或降級(jí)溫度變化對色譜柱的影響色譜圖常見問題分析(一)(續(xù))色譜峰峰形異常問題:較早洗脫的峰呈寬峰進(jìn)樣體積過大或樣品濃度太高進(jìn)樣器有問題,定量環(huán)(Loop)大小不合適在線過濾器,保護(hù)柱,色譜柱或管路堵塞管路問題:內(nèi)徑不對或切管不正確管路連接問題:接頭或錐箍不正確檢測器時(shí)間常數(shù)不正確色譜圖常見問題分析(一)(續(xù))色譜峰峰形異常問題:峰比預(yù)想的要小樣品粘度過大進(jìn)樣器有問題或進(jìn)樣體積有誤檢測器設(shè)置不正確,定量環(huán)(Loop)體積不正確

10、檢測器輸出未置零用了不正確的檢測器輸出信號(hào)檢測池被污染檢測器的燈可能有問題色譜圖常見問題分析(一)(續(xù))色譜峰峰形異常問題:雙峰或肩峰進(jìn)樣量或樣品濃度過大保護(hù)柱或色譜柱進(jìn)口堵塞保護(hù)柱或色譜柱污染或失效前伸峰進(jìn)樣量或樣品濃度過大溶樣的溶劑相對于流動(dòng)相太強(qiáng)保護(hù)柱或色譜柱污染或失效色譜圖常見問題分析(一)(續(xù))色譜峰峰形異常問題:拖尾峰保護(hù)柱或色譜柱問題:污染或失效進(jìn)樣問題檢測器時(shí)間常數(shù)不正確平頭峰檢測器設(shè)置不正確進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高色譜峰保留時(shí)間問題:保留時(shí)間飄忽不定(各次運(yùn)行之間)系統(tǒng)不穩(wěn)定或未達(dá)化學(xué)平衡泵壓力不穩(wěn)(泵頭里有氣泡)進(jìn)樣體積過大或樣品濃度過大溫度波動(dòng)流動(dòng)相混合不均勻色譜柱被污染色譜圖常見問題分析(二)色譜峰保留時(shí)間問題:保留時(shí)間增加或減少(各次運(yùn)行之間)系統(tǒng)不穩(wěn)定或化學(xué)平衡不足泵流速變化溫度變化色譜柱污染,柱效下降流動(dòng)相被污染溶劑入口