萱草組培優(yōu)化條件和培養(yǎng)基篩選

1、 專業(yè)： 班級： 編號： 學(xué)院 學(xué)院畢業(yè)論文萱草組織培養(yǎng)條件優(yōu)化和培養(yǎng)基的篩選 學(xué) 院： 專 業(yè)： 姓 名： 班 級： 指導(dǎo)教師： 二0一一年五月二十三日目錄摘 要1前言2一、植物組織培養(yǎng)的概述21.1植物組織培養(yǎng)的定義及工藝流程21.1.1定義21.1.2 植物組織培養(yǎng)工藝流程21.2組織培養(yǎng)的意義及特點21.2.1意義21.2.2特點31.3萱草國內(nèi)外研究概況31.3.1萱草育種研究31.3.2萱草的繁殖31.3.3萱草屬植物的應(yīng)用研究41.4萱草的生態(tài)習(xí)性、產(chǎn)地與文化51.5研究目的及意義5二、材料與方法52.1材料52.2設(shè)計方法6三、分析63.1不同激素配比對誘導(dǎo)愈傷組織的影響73.

2、2激素濃度對誘導(dǎo)不定根和繼代增殖的影響73.3不同激素配比對誘導(dǎo)不定根的影響83.4 切法不同對生根的影響83.5 移栽9四、結(jié)論9致謝10參考文獻11 摘 要本篇論文的目的就是研究萱草的植物組織培養(yǎng)技術(shù)，比較分析組培繁育較傳統(tǒng)的分株繁育的優(yōu)勢，從而為萱草的工廠化育苗提供科學(xué)依據(jù)。方法：即萱草母株的幼嫩莖尖為外植體，采用MS培養(yǎng)基，附加不同的植物激素和切法進行試驗。結(jié)論：1、愈傷組織組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基配方是MS+6-BA1.0mg.L+NAA0.1mg.L，不定芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基配方是MS+6-BA1.0mg.L+NAA0.1mg.L，不定根誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基是1/2MS+IBA0.1mg.L

3、+NAA0.1mg.L; 2、容易生根的最佳的切法是留有一定的愈傷可以保護其生根部位不被切傷還有利于生根也利于營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和生根。生根有單芽做法和從芽做法，不過單芽做法生根速度快，2 d便開始生根，7d便可完全生根，主要為主根即肉質(zhì)根關(guān)鍵詞 萱草 組織培養(yǎng) 分株繁殖 前言一、植物組織培養(yǎng)的概述1.1植物組織培養(yǎng)的定義及工藝流程1.1.1組織培養(yǎng)概念的界定 （1） 植物組織培養(yǎng)概念（廣義）又叫離體培養(yǎng)，指從植物體分離出符合需要的組織.器官或細(xì)胞，原生質(zhì)體等，通過無菌操作，在人工控制條件下進行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟價值的其他產(chǎn)品的技術(shù)。（2） 植物組織培養(yǎng)概念（狹義）指用植物各部

4、分組織，如形成層.薄壁組織.葉肉組織.胚乳等進行培養(yǎng)獲得再生植株，也指在培養(yǎng)過程中從各器官上產(chǎn)生愈傷組織的培養(yǎng)，愈傷組織再經(jīng)過再分化形成再生植物。1.1.2 植物組織培養(yǎng)工藝流程1、培養(yǎng)基的配置 2、滅菌 3、接種 4、培養(yǎng) 5、訓(xùn)化移栽。1.2組織培養(yǎng)的意義及特點1.2.1意義1.增加遺傳變異性，改良作物2.繁殖植物3.有用化合物的工業(yè)化生產(chǎn)4.培養(yǎng)物質(zhì)溫貯藏和種質(zhì)庫的建立1.2.2特點1.能夠進行快速繁殖2.引進新品種能夠節(jié)省資金投入1.3萱草國內(nèi)外研究概況1.3.1萱草育種研究萱草屬是瑞典植物學(xué)家林奈1753年在植物種質(zhì)中建立。亞洲約有15種，其中原產(chǎn)我國的約有11中。植物學(xué)家A.B.S

5、tout成功證明能夠從萱草遺傳因素的基因庫中，索取改變萱草品質(zhì)和紅色素形成強度及花色分配模式的遺傳因子，從而擴大萱草雜交和選育的范圍。P.GCorliss從理論上推斷人類可以育出2321億之多不同性狀的萱草。在歐美地區(qū)，群眾性培育萱草新品種在19世紀(jì)末就已新起。其中美國約在1930年就開始收集我國和日本的萱草植物作為原始種質(zhì)進行育種工作，目前已有數(shù)以萬計的園藝品種上市，居百合花卉品種的首位。在1946年還成立了萱草協(xié)會定期出版刊物，報道有關(guān)萱草最新雜交。育種、繁殖、栽培等方面的研究成果，公布每年獲得優(yōu)異品種名單，并對限有品種做區(qū)域性規(guī)劃，以供不同區(qū)域初次栽培萱草的愛好者參考。從1947年美國萱

6、草協(xié)會承擔(dān)官方栽培萱草注冊工作后，已有4玩多個注冊品種亮相，大大豐富了該屆植物資源。1.3.2萱草的繁殖A常規(guī)繁殖 萱草屬植物一般采用播種、扦插、分株的方法繁殖，常用方法為分株繁殖。萱草分株能力強，可從根莖處發(fā)生多數(shù)萌蘗，分株繁殖是萱草屬植物常用且經(jīng)濟的繁殖方法。分株繁殖多選在春季萌芽前或秋季落葉后進行，可在最短時間內(nèi)獲得有開花能力的植株，并能保持品種特性，但繁殖系數(shù)低，一株萱草一般靠分株繁殖每年僅能繁殖45株，難以滿足市場商品化生產(chǎn)的需要。而采用組織培養(yǎng)快速繁殖可以滿足市場商品化需求，并保持不同品種的本身性狀，在最短時間內(nèi)獲得大量種苗，是工廠化育苗的重要途徑。B 萱草的組織培養(yǎng) 在國外，Me

7、yer和Griesbach等先后對萱草立體培養(yǎng)進行過研究。目前國內(nèi)研究僅可以總結(jié)為有如下幾個方面：（1）不同品種的萱草的組織培養(yǎng)研究王漢海等一大花萱草Stelladaoro型的莖尖為材，在MS+01mg/L6-BA+0.5mg/LNAA上誘導(dǎo)出不定芽，但一株植物僅能取到一個莖尖，取材受限制且毀壞母本14；張偉麗等以大花花萱草型的花托為材進行再生體系的研究，但仍存在取材受限的不足15。（2）萱草不同外植體離體再生的比較研究姜鳳英，孔剛等以研究表明同一基因型的不同外植體間誘導(dǎo)下情況也存在較大差異，外植體類型對愈傷組織的誘導(dǎo)和分化培養(yǎng)都有顯著影響 1213。（3）萱草組培苗生根誘導(dǎo)的研究柏文琴等對”

8、紅運“、”奶油卷“兩個品種的萱草進行生根誘導(dǎo)，效果較為理想。研究表明，在獲得健壯試管苗的情況下，萱草的生根過程相對容易16。1.3.3萱草屬植物的應(yīng)用研究A觀賞特性花色鮮艷，栽培容易，且春季萌發(fā)早，綠葉成叢極為美觀 B藥用價值萱草性味甘涼，具有利濕熱、寬胸、消食的功效。治胸膈煩熱、黃疸、小便赤澀。本草綱目載“消食，利濕熱?！?根部性味甘涼，主要功能是清熱利尿，涼血止血。用于治療腮腺炎，黃疸，膀胱炎，尿血，小便不利，乳汁缺乏，月經(jīng)不調(diào)，衄血，便血。外用治乳腺炎。 萱草根，有些種具有毒性，服過量可致瞳孔擴大，呼吸抑制，甚至失眠和死亡，因此必須加以謹(jǐn)慎，要在醫(yī)師指導(dǎo)下使用，以免發(fā)生事故。C 園林用途

9、萱草品種繁多，花色豐富，花期長久，栽培容易，春季萌發(fā)早，綠葉成叢，很美觀。除可成片栽在園林隙地和林下外，園林中多叢植或巖石園自然栽植。還可布置在花境或路帝作邊緣及背景材料，也可剪取切花。D 食用價值黃花菜有較好的健腦，抗衰老功效，是因其含有豐富的卵磷脂，這種物質(zhì)是機體中許多細(xì)胞，特別是大腦細(xì)胞的組成成分，對增強和改善大腦功能有重要作用，同時能清除動脈內(nèi)的沉積物，對注意力不集中、記憶力減退、腦動脈阻塞等癥狀有特殊療效，故人們稱之為“健腦菜”。另據(jù)研究表明，黃花菜能顯著降低血清膽固醇的含量，有利于高血壓患者的康復(fù)，可作為高血壓患者的保健蔬菜。黃花菜中還含有效成分能抑制癌細(xì)胞的生長，豐富的粗纖維能促

10、進大便的排泄，因此可作為防治腸道癌瘤的食品。1.4萱草的生態(tài)習(xí)性、產(chǎn)地與文化萱草原產(chǎn)于我國南部，性耐寒，喜濕潤，耐干旱，畏積水，耐貧瘠，喜通風(fēng)良好場地。喜陽光充足，不甚耐陰。同時又是我國的母親花。又名忘憂草，代表“忘卻一切不愉快的事”。1.5研究目的及意義萱草是理想的觀花觀葉的地被植物，且有較高的藥用和食用價值。但常規(guī)繁殖方法繁殖系數(shù)低，受季節(jié)限制。而采用組織培養(yǎng)繁殖是解決上述問題的有效途徑。本篇論文主要研究萱草組織培養(yǎng)的較好的配方，從而滿足工廠化的需求，得到較高的經(jīng)濟利益。二、材料與方法2.1材料本實驗所需的材料都是上海大地種苗園藝有限公司所提供的無病害、生長健壯的帶花的萱草植株。外植體為幼

11、嫩花梗。切法不同進行生根的實驗是在生產(chǎn)過程中而做的，材料都是用于生根的瓶裝幼體萱草。2.2設(shè)計方法（1）外植體的選擇與處理方法萱草莖尖分生組織和其他植物分生組織一樣，莖尖部分含病毒量少或是無毒的，且形態(tài)已基本形成，生長速度快，遺傳穩(wěn)定，正是以上特點，可以利用萱草莖尖進行組織培養(yǎng)。取外植體萱草的莖尖分生組織,除去幼葉和葉原基,使其露出生長點,并留有基盤以防其被剝散。 將修整好的萱草莖尖外植體用洗潔精液浸泡30min,然后在流水下沖洗15-20min。在超凈工作臺上，將外植體轉(zhuǎn)移到無菌空瓶中，用75%過酒精消毒15-20s,無菌水沖洗一次。用0.1%的升汞消毒15min，然后用無菌水沖洗4-5次，

12、得到無菌莖尖外植體后進行接種（2）不同激素的培養(yǎng)基誘導(dǎo)愈傷組織 將萱草幼嫩莖尖分別放置于不同激素的培養(yǎng)基即試1試2和試3試4試5試6中，接種完畢后放置培養(yǎng)室培養(yǎng)20天，結(jié)果見表1。（3）不同激素濃度誘導(dǎo)愈傷組織及繼代增殖 將誘導(dǎo)出的愈傷組織放置于不同配比激素的培養(yǎng)基中即試7試8試9中，接種完畢后放置培養(yǎng)室培養(yǎng)一周，結(jié)果見表2。（4）不同的激素誘導(dǎo)不定根 將萱草幼嫩花梗分別放置于不同激素的培養(yǎng)基即試10試11和試12試13，接種完畢后放置培養(yǎng)室培養(yǎng)15天，結(jié)果見表3（5）是否切凈愈傷組織 將用于生根的的萱草分成兩組進行接種，一組為愈傷組織完全切凈，一組為不完全切凈，接種完畢后放置培養(yǎng)室培養(yǎng)十天，

13、結(jié)果見4。（6） 培養(yǎng)條件 培養(yǎng)室溫度 ( 251) ,相對濕度： 30-50%，光照強：18002500lx,光照每天 16h。（7）所用的培養(yǎng)基分別為：1 MS+6-BA0.1mg.L+NAA0.015mg 8 MS+6-BA0.025mg.L+NAA0.012 MS+6-BA0.1mg.L+NAA0.01mg 9 MS+6-BA0.05mg.L+NAA0.013 MS+6-BA0.05mg.L+NAA0.015mg 10 MS+NAA0.014 MS+6-BA0.025mg.L+NAA0.05mg 11 1/2MS+NAA0.015 MS+6-BA0.05mg.L+NAA0.1mg 12

14、 1/2MS+IBA0.016 MS+6-BA0.025mg.L+NAA0.01mg 13 1/2MS+IBA0.01+NAA0.017 MS+6-BA0.1mg.L+NAA0.01三、分析（結(jié)果與分析）3.1不同激素配比對誘導(dǎo)愈傷組織的影響 不同激素配比對誘導(dǎo)愈傷組織的影響培養(yǎng)基編號培養(yǎng)基及激素濃度mg/l愈傷組織數(shù)量愈傷組織的生長情況1MS+6-BA0.1.mg.L+NAA0.015mg.2MS+6-BA0.1mg.L+NAA0.01mg.3MS+6-BA0.05mg.L+NAA0.015mg.4MS+6-BA0.025mg.L+NAA0.05mg.5MS+6-BA0.05mg.L+NAA

15、0.1mg.6MS+6-BA0.025mg.L+NAA0.01mg.40333020308愈傷淡黃色，玻璃化明顯愈傷黃綠色，有突起的芽點愈傷黃綠色，有芽點愈傷黃綠色，愈傷黃綠色，有芽點愈傷小，綠色由上述表格可以看出激素濃度越高，越容易誘導(dǎo)出愈傷組織，但當(dāng)細(xì)胞分裂素過于高時，顯然不利于愈傷組織的形成，故當(dāng)培養(yǎng)基是MS+6-BA0.1mg.L+NAA0.01mg最有利于愈傷組織的形成。3.2激素濃度對誘導(dǎo)不定根和繼代增殖的影響 激素對誘導(dǎo)不定根和繼代增殖的影響培養(yǎng)基編號 培養(yǎng)基及激素濃度mg/l不定根生長狀況苗高（cm）78910MS+6-BA0.1mg.L+NAA0.01MS+6-BA0.025

16、mg.L+NAA0.01MS+6-BA0.05mg.L+NAA0.01MS+NAA0.01苗高12苗子細(xì)苗高12葉翠綠苗高23葉翠綠生長健壯但苗稀少，玻璃化苗高24葉深綠有不定根苗少由上述表格可以看出，隨其濃度的增加芽數(shù)增加，苗子細(xì)弱。結(jié)果表明：繼代次數(shù)的增加，細(xì)胞分裂素濃度的增加，容易因其玻璃化，苗子不健壯，再生產(chǎn)過程中繼代次數(shù)的增加會降低細(xì)胞分裂素的濃度。3.3不同激素配比對誘導(dǎo)不定根的影響 不同激素配比對誘導(dǎo)不定根的影響培養(yǎng)基編號培養(yǎng)基及激素濃度mg/l生根情況1112131/2MS+NAA0.011/2MS+IBA0.011/2MS+IBA0.01+NAA0.01生根率85%根粗壯約有

17、52條生根率86.7%少量側(cè)根根數(shù)約24條生根率99%根粗壯約4條由表格得知，萱草生根容易。結(jié)果表明：誘導(dǎo)不定根的最佳培養(yǎng)基配方是1/2MS+IBA0.01+NAA0.01，經(jīng)過十天的培養(yǎng)后開始長出根，至15天后，生根率到99%。3.4 切法不同對生根的影響 通過實習(xí)時發(fā)現(xiàn)，在生產(chǎn)過程中，每株幼苗基部留有一定的愈傷組織,若切得過于干凈反而不不利于生根，因其莖段極短容易被切散且生根部位易被切傷，留有一定的愈傷可以保護其生根部位不被切傷還有利于生根也利于營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和生根。生根有單芽做法和從芽做法，不過單芽做法生根速度快，2 d便開始生根，7d便可完全生根，主要為主根即肉質(zhì)根。從芽做法10d左右

18、方可完全生根，因其帶有小芽在生根過程中小芽要吸收營養(yǎng)進行生長，營養(yǎng)供應(yīng)不足生根就緩慢。見表格4就生根切發(fā)不同所做的跟蹤調(diào)查表培養(yǎng)周期（天）愈傷切凈的生根率（）愈傷不切干凈的生根率（）3510110301060100由表格可以看出，愈傷切得不干凈的生根率要大于愈傷切得干凈的生根率。結(jié)果表明：愈傷組織切得過于干凈反而不利于生根，在做生根時，應(yīng)該留有一定的愈傷組織，不應(yīng)切得過于干凈。3.5 移栽移栽時對環(huán)境無嚴(yán)格要求，適應(yīng)力強，僅珍珠巖與有機質(zhì)混合好后，裝入穴盤，將洗好的苗種于其中，蓋上遮陽網(wǎng)，溫度2027度即室溫即可，無需其他要求，存活率高達95%四、結(jié)論1、愈傷組織組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基配方是MS

19、+6-BA0.1mg.L+NAA0.01mg.L，不定芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基配方是MS+6-BA0.1mg.L+NAA0.01mg.L，不定根誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基是1/2MS+IBA0.01mg.L+NAA0.01mg.L; 2、容易生根的最佳的切法是留有一定的愈傷可以保護其生根部位不被切傷還有利于生根也利于營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和生根。生根有單芽做法和從芽做法，不過單芽做法生根速度快，2 d便開始生根，7d便可完全生根，主要為主根即肉質(zhì)根。3、將誘導(dǎo)出的愈傷組織轉(zhuǎn)接于分化培養(yǎng)基后,可以很快形成致并分化出芽叢,經(jīng)繼代培養(yǎng)后,可以分化出大量健壯的小苗，然后將健壯的小苗轉(zhuǎn)接與生根培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，10d后便可得完

20、整植株。結(jié)果表明通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)可快速得到宣草苗（45d）,大量供應(yīng)與社會需求，滿足工廠化發(fā)展的需求。致謝在這里也向指導(dǎo)老師致謝，您很正直，責(zé)任人心極強很像我高中時的班主任，熟悉而緊張，您的嚴(yán)格要求讓我害怕又感激，因為這正是您責(zé)任心強的最好表現(xiàn)，而責(zé)任心也是現(xiàn)在很多人所缺乏的東西，卻也是社會上所必備的東西，您為我上了離校前很寶貴的一課，再次感謝您在百忙之中給予我論文指導(dǎo)，給予我的幫助，讓我可以更好的完成畢業(yè)論文，順利畢業(yè)。參考文獻1 周樸華,何立珍.黃花菜不同外植體形成的愈傷組織再生苗觀察J.武漢植物學(xué)研究, 1994, 11(3):253-256. 2 范銀燕,崔根芳.黃花菜無性系快速繁殖技術(shù)研究J.山西農(nóng)業(yè)科