生化檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識

1、生化檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識 一、常規(guī)標(biāo)本的采集、處理 （一）常規(guī)標(biāo)本的采集 生化檢驗(yàn)的標(biāo)本有血液、尿液、腦脊液 和腹水等，其中以血液標(biāo)本最為常用。 o 1. 檢驗(yàn)申請單 o 申請單是實(shí)驗(yàn)檢查的第一步。一份完整的申請單應(yīng) 包括：條碼號，門診號，住院號；病人的姓名，性 別，出生日期；病房，床位號；臨床診斷，問題或 特殊檢驗(yàn)注意事項(xiàng)；申請檢查項(xiàng)目；標(biāo)本類型；采 樣時(shí)間，標(biāo)本接收時(shí)間（年.月.日.時(shí).分）；有關(guān) 治療情況（如用藥情況）；醫(yī)生姓名等。其中有關(guān) 臨床和治療信息，特別是用藥信息是檢驗(yàn)師評價(jià)結(jié) 果的必要條件。藥物困難在體外影響分析方法或在 體內(nèi)引去病理變化，因此，要特別注意在申請單上 提供類信息.。 o

2、 2. 血液標(biāo)本的采集 o 生化檢驗(yàn)用的血液標(biāo)本可來自于靜脈、 動脈或毛細(xì)血管。靜脈血是最常用的標(biāo)本， 靜脈穿刺是最常用的采血方法。毛細(xì)血管采 血主要用于兒童，血?dú)夥治龆嗍褂脛用}血。 o （1） 采血前準(zhǔn)備 o 為了使實(shí)驗(yàn)室結(jié)果有效地用于臨床，實(shí)驗(yàn)室 應(yīng)了解在收集標(biāo)本前和收集標(biāo)本時(shí)，所有會 影響實(shí)驗(yàn)室的非患者內(nèi)在疾病因素。采取各 種措施，提出對患者采集標(biāo)本前以及采集時(shí) 的要求，稱之為患者準(zhǔn)備。 o （2） 靜脈采血法 o 采血步驟： o 采血前要核對病人姓名、年齡、性別、編號 及檢驗(yàn)項(xiàng)目等，按試驗(yàn)項(xiàng)目要求，準(zhǔn)備好相 應(yīng)的容器，如空白試管、抗凝管或促凝管等。 病人應(yīng)取坐位或臥位，采血部位通常是前

3、臂 肘窩的正中靜脈。若用普通采血法，采血后 應(yīng)取下針頭，將血液沿管壁緩慢注入試管內(nèi)。 o注意事項(xiàng)： oa.很多生化成分受膳食影響，因此，采血前要確認(rèn)病 人是否空腹。 ob.避免充血和血液濃縮：采血時(shí)應(yīng)動作迅速，盡可能 縮短止血帶使用時(shí)間。用止血帶壓迫時(shí)間最好不超過 半分鐘，否則將使生化結(jié)果升高或下降。 oc.若病人正在進(jìn)行靜脈輸液，不宜在輸液同側(cè)手臂采 血；若女性病人做了乳腺切除術(shù)，應(yīng)在手術(shù)對側(cè)手臂 采血。 od.采血的體位：體位改變可引起一系列的生理變化， 使血液中的許多指標(biāo)發(fā)生改變。一般采取直立位采血， 其標(biāo)本的測定值比臥位高515。因此，采血時(shí) 要注意保持正確的體位（坐位或臥位），以及體

4、位的 一致性。 oe.采血時(shí)只能向外抽，決不能向靜脈內(nèi)推，以免注入 空氣，形成氣栓而造成嚴(yán)重后果。 o f.防止溶血：造成溶血的因素有注射器和容器不干燥、 不清潔；穿刺不順利，組織損傷過多；淤血時(shí)間過長； 抽血速度太快；血液注入容器時(shí)未取下針頭或注入速 度過快產(chǎn)生大量泡沫；震蕩過于劇烈等。若用普通注 射器采血后，未取針頭直接將血注入真空管內(nèi)，也易 造成溶血。體內(nèi)溶血屬合格標(biāo)本，但應(yīng)在報(bào)告單上注 明。 o g.如需全血、血漿，可將血液如上法注入盛有抗凝劑 的試管內(nèi)，立即輕輕搖動，使血液和抗凝劑混勻，以 防血液凝固。如需作二氧化碳結(jié)合力測定時(shí)，抽取血 液后，應(yīng)立即注入有石蠟油的抗凝試管中，注入時(shí)針

5、 頭應(yīng)插入石蠟油面以下，以隔絕空氣，立即送驗(yàn)。否 則血液中二氧化碳逸出，使檢驗(yàn)結(jié)果降低，影響準(zhǔn)確 性。 o h.采血完畢，連同檢驗(yàn)單及時(shí)送驗(yàn)，清理用物，歸還 原處。一次性注射器使用后應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡集中處理。 o 常用全血標(biāo)本采血量與要求（不需空腹） o 常用全血標(biāo)本采血量與要求（空腹） 常用血清標(biāo)本采血量與要求 o （3）動脈采血法 o 肱動脈、股動脈、橈動脈以及其它任何部位的動脈都 可以作為采血點(diǎn)，但多選擇肱動脈和橈動脈。 o 操作方法 用2 ml注射器，連接7號針頭，吸1：500肝 素生理鹽水溶液1ml，將活塞來回抽動，使內(nèi)壁沾勻 肝素，再推掉全部肝素溶液，將活塞推至空筒頂端后 不再回拉，

6、以保持注射器內(nèi)無空氣。選擇動脈（橈動 脈采血比較方便），常規(guī)消毒病人的皮膚及操作者的 左手食、中指后，以左手繃緊皮膚，右手持注射器， 用左手食指觸摸動脈搏動處，以45度角進(jìn)針，見血液 自動加入空筒內(nèi)至2ml后拔出針頭，囑病人按壓局部5 分鐘，應(yīng)立即用橡皮泥或橡皮塞封閉針頭（針頭斜面 埋入橡皮中即可），以隔絕空氣，在手中搓動注射器， 使血與肝素混合，立即送驗(yàn)。 o 注意事項(xiàng) o 血標(biāo)本必須隔絕空氣。因?yàn)檠獨(dú)夥治鍪?指當(dāng)天大氣壓條件下，用隔絕空氣的血標(biāo)本 與一定濃度的氣體相結(jié)合，而后測定人體內(nèi) ph值、氧分壓等，作為監(jiān)測及追蹤觀察病人 的血?dú)馇闆r。血標(biāo)本中若進(jìn)入空氣將產(chǎn)生誤 差。因此采血的注射器使

7、用前應(yīng)檢查有無漏 氣，針頭必須連接緊密，標(biāo)本采集后立即封 閉針頭斜面。 o 及時(shí)送驗(yàn)。標(biāo)本采集后應(yīng)立即送驗(yàn)，如 要等待測定，應(yīng)將標(biāo)本置于0到4度冰箱內(nèi)保 存不得超過1小時(shí)，以免影響檢驗(yàn)結(jié)果。 o （4）真空采血法 o 雙向針一端插入真空試管內(nèi)，另一端在持針 器的幫助下刺入靜脈，血液在負(fù)壓作用下自 動流入試管內(nèi)。由于在完全封閉狀態(tài)下采血， 避免了血液外溢引起的污染，并有利于標(biāo)本 的轉(zhuǎn)運(yùn)和保存。標(biāo)準(zhǔn)真空采血管采用國際通 用的頭蓋和標(biāo)簽顏色顯示采血管內(nèi)添加劑種 類和試驗(yàn)用途。 o普通血清管 紅色頭蓋，采血管人不含添加劑，用于常規(guī)血清 生化，血庫和血清學(xué)相關(guān)檢驗(yàn)。 o快速血清管 橘紅色頭蓋，采血管內(nèi)有

8、促凝劑，可激活纖維蛋 白酶，使可溶性纖維蛋白變?yōu)椴豢扇艿睦w維蛋白多聚體，進(jìn)而 形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊?？焖傺骞芸稍?分鐘內(nèi)使采集的 血液凝固，適用于急診血清系列化試驗(yàn)。 o惰性分離膠促凝管 金黃頭蓋，采血管內(nèi)添加有惰性分離膠和 促凝劑。標(biāo)本離心后，惰性分離膠能夠?qū)⒀褐械囊后w成分 （血清或血漿）和固體成分（紅細(xì)胞，白細(xì)胞，血小板，纖維 蛋白等）徹底分開并完全積聚在試管中央而形成屏障，標(biāo)本在 48小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定。促凝劑可快速激活凝血機(jī)制，加速凝血過 程，適用于急診血清生化試驗(yàn)。 o 肝素抗凝管 綠色頭蓋，采血管內(nèi)添加有肝素。肝 素直接具有抗凝血酶的作用，可延長標(biāo)本凝血時(shí)間。 適用于紅細(xì)胞脆性試

9、驗(yàn)，血?dú)夥治?，紅細(xì)胞壓積試 驗(yàn)，血沉及普能生化測定，不適于做血凝試驗(yàn)。過 量的肝素會引起白細(xì)胞的聚集，不能用于白細(xì)胞計(jì) 數(shù)。因其可使血片染色后背景呈淡藍(lán)色，故也不適 于白細(xì)胞分類。 o 血漿分離管 淺綠色頭蓋，在惰性分離膠管內(nèi)加入 肝素鋰抗凝劑，可達(dá)到快速分離血漿的目的，是電 解質(zhì)檢測的最佳選擇，也可用于常規(guī)血漿生化測定 和icu等急診血漿生化檢測。血漿標(biāo)本可直接上機(jī)并 在冷藏狀態(tài)下保持48小時(shí)穩(wěn)定。 o.edta抗凝管 紫色頭蓋，乙二胺四乙酸（edta，分子量 292）及其鹽是一種氨基多羧基酸，可以有效地螯合血液標(biāo)本 中鈣離子，螯合鈣或?qū)⑩}反應(yīng)位點(diǎn)移去將阻滯和終止內(nèi)源性或 外源性凝過程，從而

10、防止血液標(biāo)本凝固。適用于一般血液學(xué)檢 驗(yàn)，不適用于凝血試驗(yàn)及血小板功能檢查，亦不適用于鈣離子， 鉀離子，鈉離子，鐵離子，堿性磷酸酶，肌酸激酶和亮氨酸氨 基肽酶的測定及pcr試驗(yàn)。 o.枸櫞酸鈉凝血試驗(yàn)管 淺藍(lán)頭蓋，枸櫞酸鈉主要通過與血樣 中鈣離子螯合而起抗凝作用。適用于凝血實(shí)驗(yàn)，國家臨訂實(shí)驗(yàn) 室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（national committee for clinical laboratory standards,nccls)推薦的抗凝劑濃度是3.2%或 3.8%（相當(dāng)于0.109mol/l或0.129mol/l),抗凝劑與血液的 比例為1：9。 o .枸櫞酸鈉血沉試驗(yàn)管 黑色頭蓋，血沉試驗(yàn) 要

11、求的枸櫞酸鈉濃度是3.2%(相當(dāng)于 0.109mol/l)抗凝劑與血液的比例為1：4 o .草酸鉀/氟化鈉 灰色頭蓋，氟化鈉是一種 弱效抗凝劑，一般常同草酸鉀或乙碘酸鈉合 并使用，其比例為氟化鈉1份，草酸鉀3份。 此混合物4mg可使1ml血液在23天內(nèi)不凝固 和抑制糖分解，它是血糖測定的估良保存劑， 不能用于尿素酶法測定尿素，也不有用于堿 性磷酸酶和淀粉酶的測定，推薦用于血糖檢 測。 o 3.尿液標(biāo)本的采集 o 尿液標(biāo)本的采集 （1） 采集方法 尿液標(biāo)本有隨機(jī)新鮮尿、定時(shí)尿及 24 小時(shí)尿， 根據(jù)檢查項(xiàng)目選擇標(biāo)本的采集類型。定量生化分析 多收集 24 小時(shí)尿液， 24 小時(shí)尿標(biāo)本采集方法如 下

12、： 囑病人在早晨 8 時(shí)排尿棄去，以后每次排尿 均收集于一大容器內(nèi)，至次日早晨 8 時(shí)最后一次 尿亦收集于容器內(nèi)。測量并記錄 24 小時(shí)尿液總量， 然后混勻尿液，取適量尿液送檢。 o （2） 注意事項(xiàng) 收集尿液標(biāo)本的容器必須清潔干燥， 最 好是一次性使用的容器。若容器反復(fù)使用， 則須用洗滌液和自來水清洗， 再用蒸餾水沖 洗。尿標(biāo)本要防止混入月經(jīng)血、陰道分泌物、 精液、前列腺液、糞便等異物。尿標(biāo)本收集 后應(yīng) 12 時(shí)內(nèi)送檢，以免細(xì)菌作用和化學(xué)成 分分解。若不能及時(shí)檢驗(yàn)（如收集 24 小時(shí) 尿液），將標(biāo)本置冰箱保存，若加入防腐劑， 保存效果更佳。 o 4.其他特殊標(biāo)本的采集 需專科醫(yī)生操作 二、標(biāo)

13、本的處理 o 標(biāo)本處理不當(dāng)將可能引起比分析更大的誤差。 因此，應(yīng)根據(jù)分析目的選擇合適的抗凝劑、 防腐劑和處理方法 o 1、抗凝劑 o 應(yīng)用物理或化學(xué)方法除去或抑制血液中的某 些凝血因子，阻止血液凝固，稱為抗凝。阻 止血液凝固的化學(xué)試劑稱為抗凝劑 （anticoagulant）。對抗凝劑的一般要求 是用量少、溶解度大、不影響測定。生化檢 驗(yàn)常用的抗凝劑有以下幾種： o （1）肝素 o 是一種含有硫酸基團(tuán)的粘多糖，其抗凝機(jī)理 主要是對抗凝血活酶和凝血酶的形成和 活 性，阻止血小板聚集。肝素 抗凝血常 用于 血?dú)夥治?和部分生化項(xiàng)目的測定，使用 1.0gl 的肝素溶液0.5ml 可抗凝5ml 血 液

14、。 o （2）草酸鉀氟化鈉 o 草酸鉀可與血中鈣離子生成草酸鈣沉淀，從 而阻止血液凝固。草酸鉀溶解度大，抗凝作 用強(qiáng)。氟離子能結(jié)合鈣而抗凝，但抗凝效果 較弱。氟離子可抑制糖酵解中的烯醇化酶， 防止糖酵解，若未加氟化鈉，血標(biāo)本中葡萄 糖含量將以每小時(shí)6 的速度下降。而在氟 化鈉的存在下，血糖濃度在25 可穩(wěn)定24 小時(shí)，4 可穩(wěn)定48 小時(shí)。因此，草酸鉀 氟化鈉是血糖測定標(biāo)本常使用的抗凝劑。 o 2.防腐劑 o 尿液檢驗(yàn)最好留取新鮮標(biāo)本及時(shí)檢查，否則 尿液生長細(xì)菌，使尿液中的化學(xué)成分發(fā) 生變 化。在留取24 小時(shí)或12 小時(shí)尿液時(shí)，尿液 標(biāo)本應(yīng)置冰箱保存或加入防腐劑（anti septic），常

15、用的防腐劑有： o （1）濃鹽酸 o 鹽酸使尿液保持酸性，阻止細(xì)菌繁殖， 同時(shí)防止一些化學(xué)物質(zhì)因尿液堿化而分解， 通常用量為05 10ml 濃鹽酸100 ml 尿液，適用于24 小時(shí)尿兒茶酚胺、秀草 扁桃酸（v m a）、17 羥皮質(zhì)類固醇和 17 酮類固醇等定量測定。 o （2）甲苯 o 甲苯可在尿液表面形成薄膜，防止細(xì)菌繁殖，用量 10 20ml 甲苯100ml 尿液， 適用于尿肌 酐、尿糖、蛋白質(zhì)、丙酮等生化項(xiàng)目的測定。 o （3）冰醋酸 o 用量5 10ml 冰醋酸24 小時(shí)尿液，適用于 24 小時(shí)尿醛固酮測定。 o （4）麝香草酚 o 可抑制細(xì)菌生長，用量為0lg 麝香草酚 100m

16、l 尿液。用10 的麝香草酚異丙醇溶液可增 加麝香草酚的溶解量，達(dá)到抑菌及保護(hù)代謝物的作 用，適用于尿鉀、鈉、鈣、氨 基酸、糖、尿膽原、 膽紅素等測定。 o 3.標(biāo)本的分離儲存和轉(zhuǎn)運(yùn) o 血液標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)分離血清或血漿，否則可發(fā) 生紅細(xì)胞與血清之間成分的相互轉(zhuǎn)移，或細(xì)胞中的 某些酶分解待測物等，而影響檢驗(yàn)結(jié)果。 o 例如，血清無機(jī)磷可由于紅細(xì)胞內(nèi)有機(jī)磷酸酯被磷 酸酯酶的水解而增加；血清中葡萄糖可因紅細(xì)胞內(nèi) 糖酵解酶的分解作用而降低 o 此外，鈉存在于紅細(xì)胞與血清中之比為1:2；鉀在血 清和紅細(xì)胞中之比為1:20；鈣在紅細(xì)胞中極少，幾 乎全部在血清中。因此，血清鈉、鉀、鈣測定時(shí)， 需注意及時(shí)

17、分離標(biāo)本，若不能立刻分離血清或血漿， 應(yīng)將標(biāo)本放置于室溫或37水浴箱內(nèi)，不能將血液 標(biāo)本直接放入4冰箱，以免發(fā)生溶血。 o 對不是因操作不當(dāng)引起的溶血、脂血或膽紅 素血，應(yīng)在檢驗(yàn)報(bào)告上注明，供醫(yī)生參考。 o 尿液、腦脊液和胸腹水等標(biāo)本常需離心，取 上清液進(jìn)行分析 o 分離后的標(biāo)本若不能及時(shí)檢測或需保留以備 復(fù)查時(shí)，一般應(yīng)放于4冰箱，某些檢測項(xiàng) 目的標(biāo)本存放于-20冰箱更穩(wěn)定。標(biāo)本存 放時(shí)需加塞，以免水分揮發(fā)而使標(biāo)本濃縮。 需注意的是，某些檢測指標(biāo)如乳酸脫氫酶的 標(biāo)本應(yīng)存放于室溫，置4反而不穩(wěn)定。 o 標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送實(shí)驗(yàn)室分析，標(biāo)本管道 傳遞系統(tǒng)可加快標(biāo)本傳遞速度和避免標(biāo)本的 錯(cuò)誤傳遞。若標(biāo)

18、本不能及時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室或 欲將標(biāo)本送到上級部門或檢測中心進(jìn)行分析 時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本裝入試管密封，再裝入乙烯塑 料袋，置冰瓶或冷藏箱內(nèi)運(yùn)輸，運(yùn)送過程中 應(yīng)避免劇烈震蕩。 o 要視所有標(biāo)本為傳染品，對“高危”標(biāo)本， 如乙肝病人標(biāo)本、艾滋病病人標(biāo)本等，要注 明標(biāo)識；急癥或危重病人標(biāo)本要特別注明。 嚴(yán)禁標(biāo)本直接用口吸取、接觸皮膚或污染器 皿的外部和實(shí)驗(yàn)臺。標(biāo)本用后均要做消毒處 理，盛標(biāo)本的器皿要消毒處理或毀型、焚燒。 二、比色分析的要點(diǎn)及注意事項(xiàng) o 生化檢驗(yàn)的定量分析主要是基于分光光度 技術(shù)的比色分析，包括：紫外、可見及濁度 分析 o 1. 分光光度計(jì)測量誤差：由朗伯-比爾定律 可知，只有在一定的濃度范

19、圍內(nèi)，即一定的 吸光度范圍同內(nèi)，由分光光度計(jì)測量所引起 的測定結(jié)果的相對誤差才是較小的；當(dāng)透光 率接近0或1.0時(shí)，其相對誤差趨于無限大； 一般在百分透光率在1080%的范圍內(nèi)(即 吸光度在10.1)，濃度測量相對誤差較??； 對于精密度高的儀器。當(dāng)吸度 a=0.7-0.2 時(shí)，百分透光率約為20-60%，測量誤差約 為1%。 o 減少分光光度計(jì)的測量誤差的條件有 選擇適宜波長的入射光：由于有色物質(zhì)對光有選 擇性吸收，為了使測定結(jié)果有較高的靈敏度，必須 選擇溶液最大吸收波長的入射光。 o 控制吸光度a的準(zhǔn)確的讀數(shù)范圍：由朗伯-比耳定律 可知，吸光度只有控制在0.20.7讀數(shù)范圍內(nèi)時(shí)， 測量的準(zhǔn)確

20、度較高。 o 選擇參比溶液：參比溶液是用來調(diào)節(jié)儀器工作零點(diǎn) 的。若樣品溶液，試劑，顯色劑無無色可用蒸餾水 作參比溶液；反之應(yīng)采用不加顯色劑的樣品液作參 比溶液 o 2. 顯色反應(yīng)及其影響因素 o 顯色反應(yīng)一般要求 (1)選擇性好:顯色劑最好只與一種被測組分 起顯色反應(yīng); (2)靈敏度高:靈敏度高有助微量組分的測定; (3)有色化合物性質(zhì)穩(wěn)定:確保前后測定準(zhǔn)確. (4)顯色劑與有色物顏色反差大:兩者最大吸 收波長之差應(yīng)大于60nm; (5)顯色反應(yīng)要易于控制:結(jié)果的確保實(shí)驗(yàn)再 現(xiàn)性. o 影響顯色反應(yīng)的主要因素 (1)顯色劑用量:通過實(shí)驗(yàn)來確定最適用量; (2)反應(yīng)液的酸堿度(ph)溶液酸堿度直

21、接影響 金屬離子與顯色劑存在形式以及有色化合物 組成的穩(wěn)定性. (3)反應(yīng)溫度:不同的顯色反應(yīng)需要不同的反 應(yīng)溫度,一般顯色反應(yīng)可在室溫下完成. (4)顯色反應(yīng)時(shí)間:顯色反應(yīng)的速度有快有慢. (5)干擾離子的影響:應(yīng)采用適當(dāng)方法消除其 影響 3. 722型分光光度計(jì)使用操作和注意事 項(xiàng) o 注意事項(xiàng)： o . 每臺儀器所配套的比色皿不能與其它儀器上的 比色皿單個(gè)調(diào)換。 o . 如果大幅度改變測試波長時(shí)，需等數(shù)分鐘后才 能正常工作。（因波長由長波向短波或短波向長波 移動時(shí)，光能量變化急劇，光電管受光后響應(yīng)較慢， 需一段光響應(yīng)平衡時(shí)間。 o . 如果顯示數(shù)值有異常很可能為鎢燈已壞，請盡 早更換。

22、o 4. 用于免疫測定，基本原理是：抗原抗體在 特殊緩沖液中快速形成抗原抗體復(fù)合物，使 反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。當(dāng)反應(yīng)液中保持抗體過量 時(shí)，形成的復(fù)合物隨抗原量增加而增加，反 應(yīng)液的濁度亦隨之增加，與一系列的標(biāo)準(zhǔn)品 對照，即可計(jì)算出受檢物的含量。 o 免疫濁度測定法按照儀器設(shè)計(jì)的不同可以分為兩種， 即比濁儀測定（turbidimetermeasure）和散射 比濁儀測定（nephelomitermeasure）。比濁儀 測定是測量由于反射、吸收或散射引起的入射光衰 減，其讀數(shù)以吸光度a表示。a什反映了入射光與 透射光的比率（a2log10t，t代表濁度百分 比）。散射比濁儀測定是測量入射光遇到質(zhì)點(diǎn)（復(fù)

23、 合物）后呈一定角度散射的光量，該散射光經(jīng)放大 后以散射值表示。 o 測定方法有終點(diǎn)法和速率法兩種。 o 終點(diǎn)法是在抗原-抗體反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)，即復(fù)合物形 成后作用一定時(shí)間，通常是30-60min，復(fù)合物濁度 不再受時(shí)間的影響，但又必須在聚合產(chǎn)生絮狀沉淀 之前進(jìn)行濁度測定。 o 速率法是在抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的過程中，在單位時(shí) 間內(nèi)兩者結(jié)合的速度。速率法是測最大反應(yīng)的速度， 即反應(yīng)達(dá)到頂峰時(shí)的峰值。抗原抗體結(jié)合反應(yīng)在幾 十秒內(nèi)得出結(jié)果，峰值的高低與抗原的量成正比， 峰值出現(xiàn)的時(shí)間和抗體濃度、抗原抗體的親和力直 接相關(guān)。速率法的靈敏度和特異性都比終點(diǎn)法好。 o 免疫透射濁度法，其反應(yīng)曲線不規(guī)則，試驗(yàn)

24、前進(jìn)行五點(diǎn)定標(biāo)五點(diǎn)定標(biāo)，按曲線回歸計(jì)算。 全自動生化分析儀 一、良好工作環(huán)境文章 1)環(huán)境溫度：1832，工作中波動小于42、 熱量11000kju、濕度：4080rh，并無冷 凝；若室溫不穩(wěn)定，應(yīng)安裝空調(diào)，安裝在通風(fēng)好， 分析儀不應(yīng)暴露在流動空氣中。 2)避免陽光直射、遠(yuǎn)離高頻電磁波等。 3)給水及排水：分析儀使用去離子水，去離子水器安 裝在距水龍頭10m內(nèi)，去離子水電阻率大于0.5mn， 用0.5ram的過濾網(wǎng)過濾細(xì)菌，去離子水及排水孔 安裝在儀器10m內(nèi)，廢液管連到醫(yī)院的傳染病處理 裝置處。 o 4)接有效的穩(wěn)壓、不間斷電源(ups)，以防 停電造成分析儀損壞或數(shù)據(jù)丟失，有保護(hù)性 接地線

25、，以防電擊和分析儀故障發(fā)生。 o 5)實(shí)驗(yàn)室整潔，空間足夠，室內(nèi)無化學(xué)腐蝕 性試劑，無煙霧和水蒸氣 o 二、技術(shù)性能評價(jià) o 1)基本性能：測試速度32005000測試 小時(shí)，ise900測試小時(shí)；反應(yīng)溫度37， 可選擇波長13種，340800nm。 o 2)樣品系統(tǒng)：試劑位192個(gè)，樣品位300個(gè)， 全反應(yīng)過程監(jiān)測，前后自動稀釋，最小樣本 量1.6ul最小試劑量120ul。 o 3)分析系統(tǒng)：反應(yīng)杯為特殊硬質(zhì)玻璃，反應(yīng) 時(shí)間8分20秒，反應(yīng)總量150550ul，自 動記錄質(zhì)控，自動沖洗，耗水量平均125升 小時(shí)。 生化試劑選擇和特點(diǎn) o 1)試劑有國家標(biāo)準(zhǔn)的生產(chǎn)、銷售經(jīng)營許可證，使用 方法符

26、合中華醫(yī)學(xué)會檢驗(yàn)分會或美國fda推薦方法， 試劑配方是中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)會或國際上推薦的配方。 o 2)系統(tǒng)使用四種規(guī)格的試劑瓶： o 120ml試劑瓶、60ml試劑瓶、30ml試劑瓶、 15ml試劑瓶，當(dāng)使用15ml或30ml試劑瓶時(shí)，必 須使用相應(yīng)的擋板固定試劑瓶；當(dāng)使用120ml試劑 瓶時(shí)，取出試劑瓶之間的擋板，在試劑冰箱內(nèi)設(shè)置 120ml試劑瓶時(shí)要求兩個(gè)60ml試劑瓶的寬度。 參數(shù)設(shè)置 o1)samle volume and dilution(樣品量和沖洗量)，樣品分配量 范圍1.625ul或稀釋量1.620ul，沖洗分配量0或10ul： oreagent r1 vol and dilut

27、ion(第1試劑量和稀釋量)試劑范圍 15250ul或稀釋水量0或235ul； oreagentr2 v0l and dilution (第2試劑量和稀釋量)試劑范圍 15250ul或稀釋水量0或235ul。若r2為0，此項(xiàng)不能設(shè)置。 o一般按商品試劑說明書上的推薦量，結(jié)合分析儀中規(guī)定的樣品和 試劑的最小加樣量、加樣范圍和最小反應(yīng)總體積按比例進(jìn)行縮減。 足夠精密度的情況下盡可能減少樣品的用量以減少樣品中的 成分對測定的影響。 o一般情況下，樣品體積占反應(yīng)總體積的10。 o 2)wavelengthpri(主波長)sec(副波長)。 實(shí)際應(yīng)用中選擇輔助波長主要用于消除脂血、 溶血、黃疸的干擾。通

28、常選最大吸收峰為主 波長，雙波長的設(shè)定最好向該試劑廠家索 取最為安全，因?yàn)椴煌碾p波長測定抗干擾 不同。 o 3)method(方法學(xué))可設(shè)置end終點(diǎn)法、 rate速率法、fixed兩點(diǎn)法、end1、 rate1、fixed1，前三種是以試劑為空白， 后三種是以比色杯為空白的； o end終點(diǎn)分析法檢測的是反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)的 吸光度值：rate速率法適用于呈零極反應(yīng) 的酶催化活性濃度的測定，其基本原理是： 基于恒定期(零級反應(yīng)期)酶促反應(yīng)速率和酶 催化活性濃度呈正比； o fixed固定時(shí)間法：是動態(tài)反應(yīng)期的吸光度 變化累加各讀點(diǎn)問隔吸光度差值，取吸光度 差值的累加值計(jì)算結(jié)果。 o 4)rea

29、ction(反應(yīng)方向)：+、-，end與 fixed法不起作用，但rate法一定要輸入 正確。 o5)pointl fst lst(測量l，輸入光電檢測起始點(diǎn)和結(jié)束點(diǎn))和 point2fstlst(測量2，輸入光電檢測起始點(diǎn)和結(jié)束點(diǎn))，pointl為 主測定，point2為輔助測定 o終點(diǎn)分析法：測定時(shí)間的選擇應(yīng)允分考慮到干擾的問題，讀點(diǎn)提 前、反應(yīng)達(dá)不到平衡、讀點(diǎn)緩后、非檢測物質(zhì)反應(yīng)、干擾物質(zhì)生 成、影響測定值，如：溴甲酚綠法檢測白蛋白，bcg試劑在 ph4.2時(shí)，不但能與白蛋白起反應(yīng)，而且還與血清中多種球蛋白 起反應(yīng)，但白蛋白與bcg的反應(yīng)是在60秒以內(nèi)完成的，而其他球 蛋白與之反應(yīng)要在3

30、0分鐘后才能完成，因此，為使測定結(jié)果趨于 準(zhǔn)確，讀數(shù)不應(yīng)超過10分鐘測定 orate法對于一種物質(zhì)的測定，由于選擇試劑和分析方法不同，其 測定時(shí)間也隨之變化，因而對于特定的試劑和分析方法，應(yīng)先做 出反應(yīng)進(jìn)程曲線，從曲線上選擇最佳的測定時(shí)間。 o 6)linearity(線性范圍)不同試劑公司的試劑 質(zhì)量不同，基測定的線性范圍也不同。對于 酶活性來說，可取一高值樣品作倍比稀釋， 按分析項(xiàng)目的波長、樣品量與試劑量、孵育 時(shí)間測定各管活性濃度，以活性濃度對稀釋 度作圖，在測定線性內(nèi)的最高濃度為測定線 性上限，最低濃度為測定線性下限。對于帶 標(biāo)準(zhǔn)的其他生化項(xiàng)目的測定，可配置系列濃 度的標(biāo)準(zhǔn)液，測定各濃

31、度的吸光度變化繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線，同樣可以求得測定線性。 做好室內(nèi)質(zhì)控： o 在每天的操作中，質(zhì)控樣品的測定數(shù)據(jù)被貯 存下來，進(jìn)行質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的變異檢查。 o 1)進(jìn)行質(zhì)控分析申請操作 o 2)在系統(tǒng)內(nèi)放置設(shè)有質(zhì)控樣品的綠色樣品架。 o 3)進(jìn)行了質(zhì)控分析申請后開始分析，分析 操作開始。 o 4)分析綠色樣品架后，檢查質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)有無錯(cuò) 誤。 常規(guī)性維護(hù)： o 1、每日維護(hù) o 1)檢查樣本和試劑分配器是否有滲漏； o 2)目視檢查洗劑原液detergent b桶內(nèi)液面 是否足夠； o 3)檢查清洗樣本針、試劑針和攪拌棒； o 4)檢查ise試劑分配器是否滲漏，自動沖樣 品池和電極通路； o2、每周維護(hù)

32、o1)手工清洗樣本針、試劑針和攪拌棒； o2)進(jìn)行w2(自動沖洗比色杯、攪拌棒、試劑探針與廢液管路)， 每周交替使用酸性或堿性洗液作w2(酸性洗液濃度為lmmol l的鹽酸，堿性洗液有效濃度為5的次氯酸鈉； o3)進(jìn)行photoca1(光電校正)，平均值：mencheck range： 0.030，吸光度差值：abscheck range：0.1，常見杯錯(cuò) 誤有：擦傷檢查錯(cuò)誤(綠色)；數(shù)據(jù)分散檢查錯(cuò)誤(紅色)：數(shù)據(jù) 比較檢查錯(cuò)誤(蘭色) o4)清洗樣品預(yù)稀釋瓶； o5)檢查ise電極選擇性。 o 3、每月維護(hù) o 1)清洗樣本探針、試劑探針和攪拌棒沖洗池； o 2)清洗空氣過濾網(wǎng)； o 3)清

33、洗去離子水和樣品針過濾片； o 4)每兩個(gè)月ise電極維護(hù)，如果電極已經(jīng)失 效，不會得到恰當(dāng)?shù)姆治鼋Y(jié)果； o 每兩個(gè)月或每20000個(gè)測試量要更換一次最 先壞的電極。 o 4、每三個(gè)月維護(hù) o 1)清洗沖洗管嘴； o 2)清洗離子水桶；。 o 3)更換水機(jī)棉芯、活性碳； o 4)ise每三個(gè)月維護(hù)更換混合物和廢液滾動 泵管； o 5、每六個(gè)月維護(hù) o 1)更換光源燈泡；光電數(shù)據(jù)任意波長100 的吸光度超過1.7354或低于0.01時(shí)應(yīng)更換 光源燈泡：出現(xiàn)“l(fā)ampdark”或者項(xiàng)目出現(xiàn) 大量“報(bào)警標(biāo)志“，反應(yīng)曲線呈波浪樣改變 并排除沖洗頭堵塞時(shí)應(yīng)更換光源燈泡，更換 光源燈泡后，一定要進(jìn)行光電校

34、正 (photoea1)。 o 2)清洗比色杯與比色杯輪盤；清洗比色杯與 比色杯輪盤后，一定要進(jìn)行光電校正 o 6、非經(jīng)常性維護(hù) o 1)檢查比色杯、樣品針與試劑針、攪拌棒、 沖洗頭管、樣品和試劑分配器、清洗液蠕動 泵、離子水過濾器、樣品針過濾器，如果有 出現(xiàn)故障及時(shí)更換。 o 2)ise非常規(guī)性維護(hù)，必要時(shí)應(yīng)更換參比電 極；添加參比液；更換相應(yīng)試劑。 常見的報(bào)警信息及處理方法分析 o 1.分析儀故障原因：異常關(guān)機(jī)，啟動ups儲 備電源，電力檢測失敗。 o 分析儀故障處理：開主機(jī)電源em stop(黃色鍵)，再按復(fù)位開關(guān)reset(色 鍵)，再分電電源power-on(綠色鍵)，直 到光電校正

35、燈穩(wěn)定才能開始分析，大約20分 鐘。 o 2.分析儀故障原因：試劑冰箱蓋未完全關(guān)閉 或試劑盤未被固定釘子定位。 o 分析儀故障處理：水平放置試劑盤對準(zhǔn)固 定銷，按下固定釘，關(guān)閉蓋子，重新檢測試 劑 o 3.分析儀故障原因：試劑被放錯(cuò)位置。 分析儀故障處理：設(shè)置合適的試劑瓶。 o 4.分析儀故障原因：試劑少了試劑空了。 分析儀故障處理：認(rèn)真檢查，補(bǔ)足試劑用 量。 o 5.分析儀故障原因：去離子水少了去離子水空了， 純水輸出管道堵塞或者純水機(jī)故障。 分析儀故障處理：檢查純水機(jī)或輸出管道工作狀 態(tài)是否正常，必要時(shí)找醫(yī)院維修組。 o 6.分析儀故障原因：樣品探針被堵塞樣品 包含有較多的纖維和蛋白。 分

36、析儀故障處理：棄去纖維或做必要的處 理和過濾，檢查是否有其他物質(zhì)混入，用鋼 絲插入樣品探針除去阻塞。 微量加樣器的使用、維護(hù)和校準(zhǔn)微量加樣器的使用、維護(hù)和校準(zhǔn) o1 基本原理、分類及適用范圍 o1.1空氣墊加樣器 o活塞沖程（空氣墊）加樣器中的空氣墊的作用是將吸于塑料吸頭 內(nèi)的液體樣本與活塞分隔開，空氣墊通過加樣器活塞的彈簧樣運(yùn) 動而移動，進(jìn)而帶動吸頭中的樣本移動。加樣體積一般在1 l至 10ml之間。適合于血清、血漿等普通樣本的加樣，在臨床上最常 使用。 o1.2活塞正移動加樣器 o活塞正移動加樣器的吸頭與空氣墊加樣器吸頭有所不同，其內(nèi)含 一個(gè)可與加樣器耦合的活塞，這種吸頭一般由生產(chǎn)廠家配套

37、生產(chǎn)， 不能使用普通的吸頭或不同廠家的吸頭。適用于具有高揮發(fā)性、 高粘稠度以及密度大于2.0g/cm3的液體或聚合酶鏈反應(yīng) (pcr)。 2 影響微量加樣器準(zhǔn)確的幾種常見因素及 對策 o2.1影響微量加樣器的物理因素 o2.1.1流體靜壓 加樣時(shí)，加樣器吸頭只能以垂直方式浸入2- 3mm，因?yàn)閮A斜的方式將減少液體柱的高度，導(dǎo)致吸取液體 過多。 o2.1.2吸頭潤濕 當(dāng)吸頭排空時(shí)，仍會有一些殘留的液體以 薄膜的形式吸附在吸頭里面，所以，在加樣時(shí)先吸打液體數(shù) 次，充分潤濕吸頭管腔,以保證加樣的一致性。 o2.1.3 流體動力學(xué) 為確保樣本的穩(wěn)定釋放，加樣器吸頭應(yīng)靠在 試管壁上，液體順著管壁流出，避免出現(xiàn)液滴，液滴的形成可 由于其表面張力的作用而阻止樣本的釋放。 o 2.2 加樣器本身的質(zhì)量因素 o 微量加樣器的失準(zhǔn)