病理科操作常規(guī)

1、醫(yī)技科室操作常規(guī)病理科操作常規(guī)第一章 病理學(xué)檢查常規(guī)第一節(jié) 普通活體組織病理學(xué)檢查常規(guī)一、申請(qǐng)單和標(biāo)本的驗(yàn)收（一）病理科應(yīng)有專人驗(yàn)收普通活體組織病理學(xué)檢查（常規(guī)活檢）申請(qǐng)單和送檢的標(biāo)本。1、同時(shí)接受同一患者的申請(qǐng)單和標(biāo)本。2、認(rèn)真核對(duì)每例申請(qǐng)單與送檢標(biāo)本及其標(biāo)志（聯(lián)號(hào)條或其他寫明患者姓名、送檢單位和送檢日期等的標(biāo)記）是否一致；對(duì)于送檢的微小標(biāo)本，必須認(rèn)真核對(duì)送檢容器內(nèi)或?yàn)V紙上是否確有組織及其數(shù)量。發(fā)現(xiàn)疑問(wèn)時(shí)，應(yīng)立即向送檢方提出并在申請(qǐng)單上注明情況。3、認(rèn)真檢查標(biāo)本的標(biāo)志是否牢附于放置標(biāo)本的容器上。4、認(rèn)真查閱申請(qǐng)單的各項(xiàng)目是否填寫清楚，包括：（1）患者基本情況姓名、性別、年齡、送檢單位（醫(yī)院、

2、科室）、床位、門診號(hào)住院號(hào)、送檢日期、取材部位、標(biāo)本數(shù)量等；（2）患者臨床情況病史（癥狀和體征）、化驗(yàn)影像學(xué)檢查結(jié)果、手術(shù)（包括內(nèi)鏡檢查）所見、既往病理學(xué)檢查情況（包括原病理號(hào)和診斷）和臨床診斷等。5、在申請(qǐng)單上詳細(xì)記錄患者或患方有關(guān)人員的明確地址、郵編及電話號(hào)碼，以便必要時(shí)進(jìn)行聯(lián)絡(luò)，并有助于隨訪患者。（二）驗(yàn)收標(biāo)本人員不得對(duì)申請(qǐng)單中由臨床醫(yī)師填寫的各項(xiàng)內(nèi)容進(jìn)行改動(dòng)。（三）下列情況的申請(qǐng)單和標(biāo)本不予接收。1、申請(qǐng)單與相關(guān)標(biāo)本未同時(shí)送達(dá)病理科。2、申請(qǐng)單中填寫的內(nèi)容與送檢標(biāo)本不符合。3、標(biāo)本上無(wú)有關(guān)患者姓名、科室等標(biāo)志。4、申請(qǐng)單內(nèi)填寫的字跡潦草不清。5、申請(qǐng)單中漏填重要項(xiàng)目。6、標(biāo)本嚴(yán)重自溶、

3、腐敗。干涸等。7、標(biāo)本過(guò)小，不能或難以制做切片。8、其他可能影響病理檢查可行性和診斷準(zhǔn)確性的情況。病理科不能接收的申請(qǐng)單和標(biāo)本一律當(dāng)即退回，不予存放。（四）臨床醫(yī)師采取的標(biāo)本應(yīng)盡快置放于盛有固定液（中性甲醛，即中性福爾馬林）的容器內(nèi)，固定液至少為標(biāo)本體積的倍。對(duì)于需要做特殊項(xiàng)目檢查（如微生物、電鏡、兔疫組織化學(xué)、分子生物學(xué)等）的標(biāo)本，應(yīng)按相關(guān)的技術(shù)要求進(jìn)行固定或預(yù)處理。（五）病理醫(yī)師只對(duì)病理科實(shí)際驗(yàn)收標(biāo)本的病理學(xué)診斷負(fù)責(zé)。（六）病理科應(yīng)建立與送檢方交接申請(qǐng)單和標(biāo)本的手續(xù)制度。具體交接方法由各醫(yī)院病理科自行制定。二、申請(qǐng)單和標(biāo)本的編號(hào)、登記（一）病理科驗(yàn)收人員應(yīng)在已驗(yàn)收的申請(qǐng)單上注明驗(yàn)收日期，及

4、時(shí)、準(zhǔn)確編號(hào)（病理號(hào)），并逐項(xiàng)錄入活檢標(biāo)本登記簿或計(jì)算機(jī)內(nèi)。嚴(yán)防病理號(hào)的錯(cuò)編、錯(cuò)登。（二）標(biāo)本的病理號(hào)可按年編序，或連續(xù)性（不分年度）編序。（三）同一病例同一次的申請(qǐng)單、活檢標(biāo)本登記簿（包括計(jì)算機(jī)錄入）、放置標(biāo)本的容器、組織的石蠟包埋塊（簡(jiǎn)稱蠟塊）及其切片等的病理號(hào)必須完全一致。（四）病理科應(yīng)建立驗(yàn)收人員與組織取材人員之間申請(qǐng)單和標(biāo)本的交接制度。（五）在病理科內(nèi)移送標(biāo)本時(shí)，必須確保安全，嚴(yán)防放置標(biāo)本的容器傾覆、破損和標(biāo)本的散亂、缺失等。三、標(biāo)本的預(yù)處理標(biāo)本驗(yàn)收人員對(duì)已驗(yàn)收的標(biāo)本酌情更換適宜的容器，補(bǔ)充足量的固定液。對(duì)于體積大的標(biāo)本，值班取材的病理醫(yī)師在不影響主要病灶定位的情況下，及時(shí)、規(guī)范地予

5、以剖開，以便充分固定。四、標(biāo)本的巨檢、組織學(xué)取材和記錄（一）對(duì)于核驗(yàn)無(wú)誤的標(biāo)本，應(yīng)按照下列程序進(jìn)行操作：1、肉眼檢查標(biāo)本（巨檢）；2、切取組織塊（簡(jiǎn)稱取材）；3、將巨檢和取材情況記錄于活檢記錄單上（活檢記錄單印于活檢申請(qǐng)單的背面）。（二）巨檢和取材的技術(shù)操作：1、巨檢和取材必須由病理醫(yī)師進(jìn)行，應(yīng)配備人員負(fù)責(zé)記錄。2、巨檢和取材過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)防污染工作人員和周圍環(huán)境。3、標(biāo)本一般應(yīng)經(jīng)適當(dāng)固定后再行取材。已知具有傳染性（例如結(jié)核病、病毒性肝炎等）的標(biāo)本，應(yīng)在不污染環(huán)境和（或）不擴(kuò)散傳染的原則下，經(jīng)必要的初步巨檢或切開后，立即置于盛有足量固定液的專用容器內(nèi)，充分固定后再行常規(guī)巨檢和取材。4、病理醫(yī)師在

6、對(duì)每例標(biāo)本進(jìn)行巨檢和取材前，應(yīng)與記錄人員認(rèn)真核對(duì)該例標(biāo)本及其標(biāo)志與申請(qǐng)單的相關(guān)內(nèi)容是否一致。若對(duì)申請(qǐng)單填寫的內(nèi)容和（或）標(biāo)本有疑問(wèn)（例如患者姓名有誤，標(biāo)本內(nèi)容、數(shù)量、病變特征與申請(qǐng)單填寫的情況不符等），應(yīng)暫行擱置，盡快與送檢方聯(lián)系，查明原因，確保無(wú)誤后，再行巨檢和取材。必要時(shí)，可邀請(qǐng)有關(guān)臨床醫(yī)師共同檢查標(biāo)本和取材。對(duì)于有疑問(wèn)的標(biāo)本，在消除疑問(wèn)前不得進(jìn)行巨檢和取材，應(yīng)將有關(guān)標(biāo)本連同其申請(qǐng)單一并暫時(shí)妥為保存。5、病理醫(yī)師進(jìn)行巨檢和取材時(shí)，記錄人員應(yīng)根據(jù)病理申請(qǐng)單內(nèi)容，向巨檢醫(yī)師報(bào)告患者的基本臨床情況、手術(shù)所見、標(biāo)本情況（采取部位、數(shù)量等）和送檢醫(yī)師的特殊要求等，并如實(shí)、清楚地將病理醫(yī)師的口頭描述記

7、錄于活檢記錄單上。必要時(shí)，應(yīng)在活檢記錄單上（或另附紙）繪簡(jiǎn)圖顯示巨檢所見和標(biāo)示取材部位。取材者應(yīng)核對(duì)記錄內(nèi)容。6、具有醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)價(jià)值的標(biāo)本可攝影存檔，并酌情妥為保存。7、病理科宜積極推行巨檢和取材的錄音記錄。每次巨檢和取材結(jié)束后，應(yīng)由專人立即對(duì)錄音內(nèi)容進(jìn)行文字整理，記錄于活檢記錄單上（手錄或用計(jì)算機(jī)錄入、打?。Ｓ嘘P(guān)的錄音資料應(yīng)保存至病理學(xué)診斷報(bào)告書發(fā)出后兩周。8、細(xì)小標(biāo)本取材時(shí)，可用伊紅點(diǎn)染并用軟薄紙妥善包裹。9、每例標(biāo)本取材前、后，應(yīng)用流水徹底清洗取材臺(tái)面和所有相關(guān)器物，嚴(yán)防檢材被無(wú)關(guān)組織或其他異物污染，嚴(yán)防細(xì)小檢材被流水沖失。10、巨檢和取材必須按照本規(guī)范的要求進(jìn)行操作（參見第章第四節(jié)）。

8、對(duì)于由不同部位或不同病變區(qū)域切取的組織塊，應(yīng)在其病理號(hào)之后再加編次級(jí)號(hào)（例如：一，一，一，；，c，）。11、巨檢者、取材者和記錄人員應(yīng)相互配合、核查，確保所取組織塊及其編號(hào)標(biāo)簽準(zhǔn)確地置人用于脫水的容器（脫水盒等）內(nèi)。12、標(biāo)本巨檢和取材后剩余的組織、器官應(yīng)置人適當(dāng)容器內(nèi)，添加適量州中性甲醛并附有相關(guān)病理號(hào)和患者姓名等標(biāo)志，然后按取材日期有序地妥善保存。取材剩余的標(biāo)本一般保存至病理學(xué)診斷報(bào)告書發(fā)出后兩周。13、病理醫(yī)師在每批標(biāo)本巨檢和取材后，應(yīng)與記錄人員共同核對(duì)取材內(nèi)容，并在活檢記錄單、取材工作單上簽名和簽署日期。14、取材后剩余的病理標(biāo)本屬于污染源，應(yīng)遵照有關(guān)規(guī)定處理。15、巨檢和取材醫(yī)師或記

9、錄人員與制片的技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)真辦理所取檢材、活檢申請(qǐng)單記錄單和取材工作單等的交接手續(xù)。具體交接方法由各醫(yī)院病理科自行制定。五、組織切片制備的基本要求（一）組織制片過(guò)程中，應(yīng)確保切片號(hào)與蠟塊號(hào)一致。（二）制片工作一般應(yīng)在取材后個(gè)工作日內(nèi)完成（不含需要脫鈣、脫脂等特殊處理的標(biāo)本）。（三）制片完成后，技術(shù)人員應(yīng)檢查制片質(zhì)量，并加貼標(biāo)有本病理科病理號(hào)的標(biāo)簽。常規(guī)石蠟包埋一染色片的優(yōu)良率（甲、乙級(jí)切片所占的比例，優(yōu)級(jí)率（甲級(jí)切片所占的比例）。不合格切片應(yīng)立即重做。切片質(zhì)量的基本標(biāo)準(zhǔn)參見表21。表21 常規(guī)石蠟包埋一染色切片質(zhì)量的基本標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)滿分（分）質(zhì)量缺陷減分組織切面完整，內(nèi)鏡咬檢、穿刺標(biāo)本切面數(shù)1

10、0組織稍不完整：減1分；不完整：減410分；未達(dá)到規(guī)定面數(shù)：減分切片?。╱）厚薄均勻切片厚（細(xì)胞重疊），影響診斷：減10分；厚薄不均勻：減分切片無(wú)刀痕、裂隙、顫痕10有刀痕、裂隙、顫痕，尚不影響診斷：減分；有刀痕、裂隙、顫痕，影響診斷：減分切片平坦，無(wú)皺褶、折疊10有皺褶或折疊，尚不影響診斷：各減分；有皺褶或折疊，影響診斷：各減分切片無(wú)污染物10有污染物：減分無(wú)氣泡（切片與載玻片間蓋玻片與切片、載玻片間），蓋玻片周圍無(wú)膠液外溢,透明度好10有氣泡：減分；膠液外溢：減分細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)染色對(duì)比清晰10細(xì)胞核著色灰淡或過(guò)藍(lán)：減分；紅（細(xì)胞質(zhì)）與藍(lán)（細(xì)胞核）對(duì)比不清晰：減分切片無(wú)松散，裱貼位置適當(dāng)10

11、切片松散：減分；切片裱貼位置不當(dāng)：減分切片整潔，標(biāo)簽端正粘牢，編號(hào)清晰10切片不整潔：減分；標(biāo)簽粘貼不牢：減分；編號(hào)不清晰：減分合計(jì)100注：切片質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：（1）甲級(jí)片：分（優(yōu)）；（2）乙級(jí)片：分（良）；（3）丙級(jí)片：分（基本合格）；（4）丁級(jí)片：分（不合格）（四）制片過(guò)程發(fā)生意外情況時(shí)，有關(guān)技術(shù)人員和技術(shù)室負(fù)責(zé)人應(yīng)及時(shí)向病理科主任報(bào)告，并積極設(shè)法予以補(bǔ)救。（五）制片完成后，技術(shù)人員應(yīng)將所制切片與其相應(yīng)的活檢申請(qǐng)單活檢記錄單、取材工作單等進(jìn)行認(rèn)真核對(duì)，確認(rèn)無(wú)誤后，將切片連同相關(guān)的活檢申請(qǐng)單活檢記錄單、取材工作單等一并移交給病理醫(yī)師。雙方經(jīng)核對(duì)無(wú)誤后，辦理移交簽字手續(xù)。具體交接方法由各醫(yī)院病

12、理科自行制定。（六）常規(guī)活檢組織切片制備技術(shù)的基本要求參見第章第一節(jié)。六、組織切片的光學(xué)顯微鏡檢查和病理學(xué)診斷（一）初檢病理醫(yī)師1、應(yīng)認(rèn)真閱讀申請(qǐng)單提供的各項(xiàng)資料，必要時(shí)（尤其是疑難病例），應(yīng)向有關(guān)臨床醫(yī)師了解更多的臨床信息。2、應(yīng)認(rèn)真閱讀活檢記錄單中關(guān)于標(biāo)本巨檢的描述。3、應(yīng)了解患者既往病理學(xué)檢查情況（包括切片的病理學(xué)診斷和有關(guān)文字記錄），包括：（1）本病理科既往受理者，必須及時(shí)調(diào)閱相關(guān)切片等病理學(xué)檢查資料；（2）非本病理科既往受理者，應(yīng)積極協(xié)助患者從有關(guān)病理科商借相關(guān)切片等病理學(xué)檢查資料參閱。4、應(yīng)在活檢記錄單上簽署“醫(yī)囑”，告知技術(shù)人員進(jìn)行必要的深切片、連切片、特殊染色和其他相關(guān)技術(shù)檢測(cè)

13、。5、應(yīng)全面、細(xì)致地閱片，注意各種有意義的病變。初檢的病理醫(yī)師，應(yīng)提出初診意見，送交主檢病理醫(yī)師復(fù)查。（二）主檢病理醫(yī)師1、主檢病理醫(yī)師對(duì)難以明確診斷的病例要做進(jìn)一步的處理。（1）必要時(shí)親自觀察標(biāo)本，補(bǔ)充或訂正病變描述，指導(dǎo)或親自補(bǔ)取組織塊。（2）提請(qǐng)科內(nèi)上級(jí)醫(yī)師會(huì)診或進(jìn)行科內(nèi)讀片討論（會(huì)診）。（3）與有關(guān)臨床醫(yī)師進(jìn)行臨床-病理會(huì)診。（4）必要時(shí)約見患者（尤其門診患者）或患者親屬（或其他患方相關(guān)人員），了解病情，說(shuō)明病理學(xué)診斷的疑難情況和延期簽發(fā)病理學(xué)診斷報(bào)告書的原因等。（5）于簽發(fā)病理學(xué)診斷報(bào)告書前進(jìn)行科外病理會(huì)診（診斷報(bào)告前病理會(huì)診），應(yīng)將各方面會(huì)診意見的原件（或復(fù)印件）作為檔案資料貼附于

14、有關(guān)患者的活檢記錄單中備查。（6）必要時(shí)，建議臨床醫(yī)師重復(fù)活檢，或密切隨查。2、主檢病理醫(yī)師根據(jù)常規(guī)切片的鏡下觀察，結(jié)合標(biāo)本巨檢、相關(guān)技術(shù)檢查結(jié)果、有關(guān)臨床資料和參考病理會(huì)診意見等，做出病理學(xué)診斷或提出病理學(xué)診斷意見（意向），清楚地書寫于活檢記錄單的有關(guān)欄目中，并親筆簽名。各方會(huì)診意見不一、難以明確診斷時(shí)，主檢醫(yī)師可參考會(huì)診意見酌情診斷，或在病理學(xué)診斷報(bào)告書中將各方會(huì)診意見列出，供臨床醫(yī)師參考。3、對(duì)打印的病理學(xué)診斷報(bào)告書，主檢病理醫(yī)師應(yīng)與活檢記錄單上的病理學(xué)診斷文字進(jìn)行核對(duì)，并親筆簽名（參見本節(jié)下文“八、病理學(xué)診斷報(bào)告書及其簽發(fā)”）。七、相關(guān)診斷技術(shù)的選用病理醫(yī)師可借助于組織化學(xué)染色（包括特

15、殊染色）、免疫組織化學(xué)染色、電子顯微鏡技術(shù)、分子生物學(xué)技術(shù)、流式細(xì)胞技術(shù)等相關(guān)診斷技術(shù)檢查提供的佐證，對(duì)某些病例（尤其是疑難病例）進(jìn)行病理學(xué)診斷（具體內(nèi)容參見第章）。八、病理學(xué)診斷報(bào)告書及其簽發(fā)（一）病理學(xué)診斷表述的基本類型類：檢材部位、疾病名稱、病變性質(zhì)明確和基本明確的病理學(xué)診斷。類：不能完全肯定疾病名稱、病變性質(zhì)，或是對(duì)于擬診的疾病名稱、病變性質(zhì)有所保留的病理學(xué)診斷意向，可在擬診疾病病變名稱之前冠以諸如病變“符合為”、“考慮為”、“傾向?yàn)椤薄ⅰ疤崾緸椤?、“可能為”、“疑為”、“不能排除（除外）”之類的詞語(yǔ)。類：檢材切片所顯示的病變不足以診斷為某種疾?。床荒茏龀鲱惢蝾惒±韺W(xué)診斷），只能進(jìn)行

16、病變的形態(tài)描述。類：送檢標(biāo)本因過(guò)于細(xì)小、破碎、固定不當(dāng)、自溶、嚴(yán)重受擠壓（變形）、被燒灼、干涸等，無(wú)法做出病理學(xué)診斷。（二）病理學(xué)診斷報(bào)告書的基本內(nèi)容1、患者的基本情況，包括病理號(hào)、姓名、性別、年齡、送檢醫(yī)院或科室（住院或門診）、住院號(hào)或門診號(hào)、送檢和收驗(yàn)日期等。2、巨檢病變和鏡下病變要點(diǎn)描述（一般性病變和細(xì)小標(biāo)本可酌情簡(jiǎn)述或省略）。3、與病理學(xué)診斷相關(guān)技術(shù)的檢查結(jié)果。4、病理學(xué)診斷的表述，參見上文“（一）病理學(xué)診斷表述的基本類型”。5、對(duì)于疑難病例或做出、類病理學(xué)診斷的病例，可酌情就病理學(xué)診斷及其相關(guān)問(wèn)題附加：（1）建議（例如進(jìn)行其他有關(guān)檢查、再做活檢、科外病理學(xué)會(huì)診、密切隨診或隨訪等）；（

17、2）注釋和（或）討論。6、經(jīng)過(guò)本病理科和（或）科外病理會(huì)診的病例，可將各方病理會(huì)診意見列于該例患者的病理學(xué)診斷報(bào)告書中。（三）病理學(xué)診斷報(bào)告書的書寫要求1、病理學(xué)診斷報(bào)告書的文字表述力求嚴(yán)謹(jǐn)、恰當(dāng)、精練，條理和層次清楚。2、病理學(xué)診斷報(bào)告書應(yīng)為一式二份，一份交予送檢方，另一份隨同患者的病理學(xué)檢查申請(qǐng)單和病理學(xué)檢查記錄單一并存檔。主檢病理醫(yī)師必須在每一份病理學(xué)診斷報(bào)告書上簽名，不能以個(gè)人印章代替簽名，不能由他人代為簽名。主檢病理醫(yī)師簽名的字跡應(yīng)能辨認(rèn)。3、手書的病理學(xué)診斷報(bào)告書必須二聯(lián)復(fù)寫，必須文字規(guī)范、字跡清楚，不得潦草、涂改。4、手書和計(jì)算機(jī)打印的病理學(xué)診斷報(bào)告書中的關(guān)鍵性文字，例如“癌”、

18、“瘤”、“陽(yáng)性”、“陰性”和數(shù)字等，要認(rèn)真核對(duì)，不得有誤。5、計(jì)算機(jī)打印的圖文病理學(xué)診斷報(bào)告書提供的病變圖像要準(zhǔn)確，具有典型（代表）性，放大倍數(shù)適當(dāng)。6、患者的基本情況項(xiàng)目必須嚴(yán)格按照送檢臨床醫(yī)師填寫的文字抄寫或用計(jì)算機(jī)輸錄于病理學(xué)診斷報(bào)告書中，并認(rèn)真核查無(wú)誤，簽發(fā)報(bào)告書的病理醫(yī)師和病理科的其他人員都不得改動(dòng)。7、病理醫(yī)師不得簽發(fā)虛假的病理學(xué)診斷報(bào)告書，不得向臨床醫(yī)師和患方人員提供有病理醫(yī)師簽名的空白病理學(xué)診斷報(bào)告書。（四）病理學(xué)診斷報(bào)告書的發(fā)送1、病理科自接受送檢標(biāo)本至簽發(fā)該例病理學(xué)診斷報(bào)告書的時(shí)間，一般情況下為個(gè)工作日以內(nèi)。2、由于某些原因（包括深切片、補(bǔ)取材制片、特殊染色、免疫組織化學(xué)染

19、色、脫鈣、疑難病例會(huì)診或傳染性標(biāo)本延長(zhǎng)固定時(shí)間等）延遲取材、制片，或是進(jìn)行其他相關(guān)技術(shù)檢測(cè)，不能如期簽發(fā)病理學(xué)診斷報(bào)告書時(shí)，應(yīng)以口頭或書面形式告知有關(guān)臨床醫(yī)師或患方，說(shuō)明遲發(fā)病理學(xué)診斷報(bào)告書的原因。3、病理科應(yīng)有專人發(fā)送病理學(xué)診斷報(bào)告書。住院患者的病理學(xué)診斷報(bào)告書應(yīng)發(fā)送至有關(guān)臨床科室。病理科所在醫(yī)院門診患者和院外患者病理學(xué)診斷報(bào)告書的發(fā)送方法，由各醫(yī)院病理科自行制定。4、病理學(xué)診斷報(bào)告書的經(jīng)收人員（包括患方人員）必須履行簽收手續(xù)。5、病理科已發(fā)出的病理學(xué)診斷報(bào)告書被遺失時(shí)，一般不予補(bǔ)發(fā)；必要時(shí)，經(jīng)病理科主任同意可以抄件形式補(bǔ)發(fā)。九、資料管理普通活體組織病理學(xué)檢查的資料必須妥善管理，有關(guān)規(guī)定參見

20、本章第五節(jié)。十、會(huì)診病理學(xué)會(huì)診是普通活體組織病理學(xué)診斷過(guò)程的重要環(huán)節(jié)，有關(guān)規(guī)定參見本章第六節(jié)。第二節(jié) 手術(shù)中快速活體組織病理學(xué)檢查常規(guī)一、概述（一）手術(shù)中快速活體組織病理學(xué)檢查（簡(jiǎn)稱快速活檢）是臨床醫(yī)師在實(shí)施手術(shù)過(guò)程中，就與手術(shù)方案有關(guān)的疾病診斷問(wèn)題請(qǐng)求病理醫(yī)師快速進(jìn)行的緊急會(huì)診，尤其需要臨床醫(yī)師與病理醫(yī)師間的密切合作。（二）快速活檢要求病理醫(yī)師在很短時(shí)間內(nèi)，根據(jù)對(duì)切除標(biāo)本的巨檢和組織塊快速冷凍切片（或快速石蠟切片）的觀察，向手術(shù)醫(yī)師提供的參考性病理學(xué)診斷意見。與常規(guī)石蠟切片的病理學(xué)診斷相比，快速活檢會(huì)診具有更多的局限性和誤診的可能性。有的病例難以快速診斷，需要等待常規(guī)石蠟切片進(jìn)一步明確診斷。

21、因此，應(yīng)向臨床醫(yī)師說(shuō)明快速活檢的：（1）局限性；（2）適用范圍；（3）慎用范圍；（4）不宜應(yīng)用范圍。（三）有關(guān)臨床醫(yī)師應(yīng)于手術(shù)前向患者和（或）患者授權(quán)人說(shuō)明快速活檢的意義和局限性等，取得患者和（或）患方的知情和理解?；颊吆停ɑ颍┗颊呤跈?quán)人應(yīng)在由醫(yī)院制定的手術(shù)中快速活檢患方知情同意書簽署意見和簽名。（四）主持手術(shù)的臨床醫(yī)師應(yīng)在手術(shù)前一天向病理科遞交快速活檢申請(qǐng)單，填寫患者的病史，重要的影像學(xué)、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果和提請(qǐng)病理醫(yī)師特別關(guān)注的問(wèn)題等。盡可能不在手術(shù)進(jìn)行過(guò)程中臨時(shí)申請(qǐng)快速活檢。（五）手術(shù)中快速活檢應(yīng)由經(jīng)過(guò)該項(xiàng)工作訓(xùn)練的主治醫(yī)師以上的病理醫(yī)師主持。尚不具備相應(yīng)條件的病理科不應(yīng)勉強(qiáng)開展手術(shù)中快速活

22、檢業(yè)務(wù)。（六）負(fù)責(zé)快速活檢的主檢病理醫(yī)師應(yīng)了解患者的（1）臨床情況；（2）手術(shù)所見；（3）既往有關(guān)的病理學(xué)檢查情況。二、適用范圍（一）需要確定病變性質(zhì)（如腫瘤或非腫瘤、良性腫瘤或惡性腫瘤等），以決定手術(shù)方案的標(biāo)本。（二）了解惡性腫瘤的擴(kuò)散情況，包括腫瘤是否浸潤(rùn)相鄰組織、有無(wú)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。（三）確定腫瘤部位的手術(shù)切緣有無(wú)腫瘤組織殘留。（四）確認(rèn)切除的組織，例如甲狀旁腺、輸卵管、輸精管及異位組織等。三、慎用范圍涉及截肢和其他嚴(yán)重致殘的根治性手術(shù)切除的標(biāo)本。需要此類手術(shù)治療的患者，其病變性質(zhì)宜于手術(shù)前通過(guò)常規(guī)活檢確定。四、不宜應(yīng)用范圍（一）疑為惡性淋巴瘤。（二）過(guò)小的標(biāo)本（檢材長(zhǎng)徑0.2者）。（

23、三）術(shù)前易于進(jìn)行常規(guī)活檢者。（四）脂肪組織、骨組織和鈣化組織。（五）需要依據(jù)核分裂象計(jì)數(shù)判斷良、惡性的軟組織腫瘤。（六）主要根據(jù)腫瘤生物學(xué)行為特征而不能依據(jù)組織形態(tài)判斷良、惡性的腫瘤。（七）已知具有傳染性的標(biāo)本（例如結(jié)核病、病毒性肝炎、艾滋病等）。五、申請(qǐng)單和標(biāo)本的驗(yàn)收、編號(hào)和登記手術(shù)中快速活體組織病理學(xué)檢查申請(qǐng)單和標(biāo)本的驗(yàn)收、編號(hào)和登記參見本章第一節(jié)中“一、”至“三、”項(xiàng)的有關(guān)規(guī)定。六、標(biāo)本的巨檢、取材和記錄（一）病理科驗(yàn)收快速活檢申請(qǐng)單和標(biāo)本后，應(yīng)參照本章第一節(jié)中“四、”項(xiàng)的有關(guān)規(guī)定，立即進(jìn)行標(biāo)本的巨檢、取材和記錄。（二）主持快速活檢的病理醫(yī)師應(yīng)親自參與標(biāo)本的巨檢和取材（或指導(dǎo)取材）。（三

24、）通常選取具有代表性的病變組織1或塊，需要時(shí)，增加取材塊數(shù)。七、組織切片的制備（一）冷凍切片1、完成冷凍染色切片制備的時(shí)間通常為min。2、恒冷箱切片機(jī)制片：至少應(yīng)于切片前開機(jī)預(yù)冷，冷室溫度一般為-15-20。常規(guī)開展冷凍切片快速病理學(xué)診斷的病理科，恒冷箱切片機(jī)宜處于24恒溫待機(jī)狀態(tài)。3、其他方法的冷凍切片制備參見第章第一節(jié)。（二）快速石蠟切片1、完成快速石蠟-染色切片的時(shí)間通常為30min。2、快速石蠟切片的制備方法參見第章第一節(jié)。制備好的冷凍或快速石蠟-染色切片，加貼標(biāo)有本病理科病理號(hào)的標(biāo)簽后，立即交由主檢病理醫(yī)師進(jìn)行診斷。八、手術(shù)中快速活檢會(huì)診意見及其簽發(fā)（一）有條件的病理科宜由兩位具有

25、中、高級(jí)職稱的病理醫(yī)師共同簽署快速活檢的病理學(xué)診斷意見。對(duì)于病變疑難、手術(shù)切除范圍廣泛和會(huì)嚴(yán)重致殘的手術(shù)中快速活檢，應(yīng)由兩位具有高級(jí)職稱的病理醫(yī)師共同簽署會(huì)診意見。主檢病理醫(yī)師簽名的字跡應(yīng)能辨認(rèn)。（二）快速活檢診斷意見一般在收到送檢標(biāo)本后40min內(nèi)發(fā)出；同一時(shí)間段內(nèi)相繼收到的多例患者標(biāo)本或是同一例患者的多次標(biāo)本，其發(fā)出報(bào)告的時(shí)間依次類推。對(duì)于疑難病變，可酌情延時(shí)報(bào)告。（三）對(duì)于難以即時(shí)快速診斷的病變（例如病變不典型、交界性腫瘤病變或送檢組織不足以明確診斷等），主檢病理醫(yī)師應(yīng)向手術(shù)醫(yī)師說(shuō)明情況，恰如其分地簽發(fā)病理學(xué)診斷意見或告知需要等待常規(guī)石蠟切片進(jìn)一步明確病理學(xué)診斷。（四）主檢病理醫(yī)師簽署的

26、快速活檢病理學(xué)診斷意見，宜以文字形式報(bào)告（具體發(fā)出方式由各醫(yī)院自行決定）?？焖倩顧z病理學(xué)診斷意見報(bào)告書發(fā)出前應(yīng)認(rèn)真核對(duì)無(wú)誤。九、冷凍切片后剩余組織的處理（一）冷凍切片后剩余的冷凍組織（簡(jiǎn)稱“凍對(duì)”）和冷凍切片取材后剩余、未曾冷凍的組織（簡(jiǎn)稱“凍?！保鶓?yīng)保存，用以制備常規(guī)石蠟切片，以便與冷凍切片進(jìn)行對(duì)照觀察。（二）“凍對(duì)”、“凍?！苯M織的蠟塊和切片須與同一病例手術(shù)后送檢的切除標(biāo)本編為同一病理號(hào)，并做出綜合性診斷。（三）當(dāng)冷凍切片病理學(xué)診斷意見與其“凍對(duì)”組織的常規(guī)石蠟-he片的病理學(xué)診斷不一致時(shí)，該例的病理學(xué)診斷一般應(yīng)以石蠟-he片診斷為準(zhǔn)。十、資料管理手術(shù)中快速活體組織病理學(xué)檢查的資料必須

27、妥善管理，有關(guān)規(guī)定參見本章第五節(jié)。第二章 病理學(xué)基本技術(shù)操作第一節(jié) 病理組織學(xué)診斷檢材的制備技術(shù)一、組織的固定（一）凡需要進(jìn)行病理組織學(xué)檢查的標(biāo)本（器官或組織），離體（活體或尸體）后，應(yīng)盡快置放（浸泡）于裝有足夠量固定液的容器中固定。固定液量應(yīng)為被固定標(biāo)本體積的倍。置放標(biāo)本的容器大小視標(biāo)本和固定液的體積而定，應(yīng)適當(dāng)大一些。臨床科室切取的標(biāo)本置放于容器中固定后，應(yīng)盡快送交病理科繼續(xù)固定。未能及時(shí)、充分固定的干涸或腐敗標(biāo)本不能再進(jìn)行固定和用于制作切片。（二）常規(guī)固定液為中性甲醛（10中性福爾馬林）。應(yīng)預(yù)先多量配制貯存，以備隨時(shí)使用。小標(biāo)本的固定時(shí)間為46，大標(biāo)本為1824或更久。（三）根據(jù)病理學(xué)特

28、殊檢查（特殊染色和組織化學(xué)染色、免疫組織化學(xué)染色和原位核酸分子雜交染色、電鏡觀察等）的需要，應(yīng)選用其他適宜的固定液進(jìn)行固定。參見后文“（七）常用固定液?！保ㄋ模┢鞴?、組織固定的基本方法可參見本章第四節(jié)“病理標(biāo)本的肉眼檢查和組織學(xué)切片取材技術(shù)”。1、管、胃、腸、膽囊、膀胱等空腔器官：依規(guī)范方法剪開后，按其自然狀態(tài)平鋪于硬紙板上（重點(diǎn)暴露黏膜面或內(nèi)表面的病變處），并用大頭針將標(biāo)本邊緣處固定于紙板上，然后放人中性甲醛中固定（黏膜面或內(nèi)表面朝向容器的液面，并覆蓋薄層脫脂棉）。2、肝、脾：由器官背面，沿其長(zhǎng)軸每間隔1.52.0縱向平行剖開，切成數(shù)片。將每片肝或脾輕輕地平放于裝有4中性甲醛的容器中，容器底

29、面襯以脫脂棉。應(yīng)避免標(biāo)本彎曲和相互間的疊壓。3、肺葉：放人固定液中的肺葉漂浮于液面，須在肺表面覆蓋浸含固定液的薄層脫脂棉。必要時(shí)從支氣管注人適量4中性甲醛。4、腎：沿腎外緣中線朝腎門方向做一水平切面（深達(dá)于腎盞），再行固定。5、淋巴結(jié)：先用4中性甲醛固定后，再沿其長(zhǎng)軸切開（腫大的淋巴結(jié)可切成數(shù)片，厚23），繼續(xù)固定。6、骨組織：先鋸成小片（若是長(zhǎng)骨應(yīng)做橫向鋸片），在4中性甲醛中固定24后，再進(jìn)行脫鈣。7、微小組織或液體沉淀物：先用拭紙或?yàn)V紙妥為包裹（須用大頭針扎牢），然后放入專用小盒內(nèi)進(jìn)行4中性甲醛固定，以防檢材遺失。凡進(jìn)入固定程序的標(biāo)本必須連帶其正確無(wú)誤的病理檢驗(yàn)號(hào)（病理號(hào)）。（五）多數(shù)固定

30、液對(duì)人體有害，需要防護(hù)，必須在封閉的通風(fēng)條件下進(jìn)行操作。（六）組織塊的切取和固定。1、由較大標(biāo)本切取用于制作切片的組織塊（取材）時(shí)，應(yīng)與標(biāo)本的斷面平行，組織塊厚度一般為0.3cm（不應(yīng)0.5cm），面積一般在（11.5）cm（11.5）cm。2、切取組織塊的形狀，在充分包括肉眼所見病變的前提下盡量規(guī)則些（例如方形、矩形、三角形等）；由一個(gè)標(biāo)本切取的多塊組織的形狀有所不同，便于蠟塊與其相應(yīng)切片的核對(duì)。3、固定組織塊的固定液量，一般應(yīng)為組織塊總體積的510倍以上。4、室內(nèi)常溫（25左右）下的固定時(shí)間為324；低溫（4）下的固定時(shí)間應(yīng)延長(zhǎng)。5、固定組織塊的容器要大一些。6、組織塊固定期間需要間斷地輕

31、搖或攪動(dòng)固定液以利于固定液的滲入。（七）常用固定液。1、4中性甲醛（10中性福爾馬林）固定液：甲醛（40）100無(wú)水磷酸氫二鈉6.5磷酸二氫鈉4.0蒸餾水9002、乙醇-甲醛（酒精-福爾馬林，af）固定液：甲醛（40）10095乙醇900說(shuō)明一般組織塊經(jīng)乙醇-甲醛固定2后，即可移入95乙醇內(nèi)脫水。3、carnoy固定液：無(wú)水乙醇 60氯仿 30冰醋酸 10說(shuō)明本液是組織化學(xué)染色的常用固定液，組織經(jīng)carnoy液固定12后，即可移入95乙醇中脫水。二、常規(guī)石蠟包埋組織切片（常規(guī)切片）的制備（一）制備程序1、水洗。2、脫水。3、透明。4、浸蠟。5、包埋。6、切片。（二）注意事項(xiàng)組織切片制備及其h染

32、色過(guò)程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蠟等為易燃、有毒物，必須專人管理，2以內(nèi)不得有明火，局部環(huán)境應(yīng)有良好的通風(fēng)和消防設(shè)施。（三）常規(guī)切片的手工操作1、水洗 用流水沖洗已經(jīng)固定的組織塊30min。2、脫水（常溫下）（1）乙醇-甲醛（af）液固定：60120min。（2）乙醇-甲醛（af）液固定：60120min。（3）80乙醇：60 min。（4）95乙醇：60 min。（5）95乙醇：60 min。（6）無(wú)水乙醇：60 min。（7）無(wú)水乙醇：60 min。3、透明（1）正丁醇：30min。（2）正丁醇：30min。4. 浸蠟；（1）石蠟：（52-54）60min。（2）石蠟：（52-56）6

33、0min。（3）石蠟：（52-56）60min。 注意事項(xiàng)：（1）用熔化石蠟必須有專人負(fù)責(zé)，必須在熔蠟箱內(nèi)或水浴中（70）進(jìn)行，不得用明火加溫；（2）熔蠟的容積應(yīng)為組織塊總體積的510倍以上；（3）組織塊經(jīng)二甲苯適度透明后方可轉(zhuǎn)人浸蠟過(guò)程，應(yīng)盡可能減少將透明后組織塊表面的二甲苯帶入熔蠟中；（4）浸蠟時(shí)間適宜，過(guò)短時(shí)浸蠟不充分（組織過(guò)軟），過(guò)長(zhǎng)時(shí)組織硬脆；（5）熔蠟應(yīng)及時(shí)過(guò)濾、更換。5、包埋（1）先將熔化的石蠟傾入包埋模具中，再用加熱的彎曲鈍頭鑷子輕輕夾取已經(jīng)過(guò)浸蠟的組織塊，使組織塊的最大面或被特別指定處的組織面向下埋入熔蠟中，應(yīng)將組織塊平整地置放于包埋模具底面的中央處。包埋于同一蠟塊內(nèi)的多塊細(xì)

34、小組織應(yīng)彼此靠近并位于同一平面上；腔壁、皮膚和黏膜組織必須垂直包埋（立埋）。（2）將與組織塊相關(guān)的病理號(hào)小條置入包埋模具內(nèi)熔蠟的一側(cè)。（3）待包埋模具內(nèi)的熔蠟表面凝固后，即將模具移入冷水中加速凝固。（4）從包埋模具中取出凝固的包埋蠟塊（簡(jiǎn)稱蠟塊），用刀片去除組織塊周圍的過(guò)多石蠟（組織塊周圍保留12石蠟為宜）。將包埋蠟塊修整成為規(guī)則的正方形或長(zhǎng)方形。（5）將病理號(hào)小條牢固地烙貼在蠟塊一側(cè)（編號(hào)應(yīng)清晰可見）。（6）把修整好的蠟塊烙貼在支持器上，以備切片。（7）使用包埋機(jī)的方法按有關(guān)廠商的說(shuō)明書操作。（8）注意事項(xiàng)。應(yīng)將組織塊嚴(yán)格分件包埋。包埋時(shí)一定要首先認(rèn)真核對(duì)組織塊的病理號(hào)（包括次級(jí)號(hào)）、塊數(shù)和

35、取材醫(yī)師對(duì)包埋面的要求，準(zhǔn)確地置入相應(yīng)的病理號(hào)小條。發(fā)生包埋差錯(cuò)時(shí)，必須立即與取材醫(yī)師和病理科當(dāng)班負(fù)責(zé)人取得聯(lián)系，及時(shí)處置。必須嚴(yán)防各種異物污染，勿將無(wú)關(guān)組織如縫線、紙屑或其他異物（尤其是硬質(zhì)異物）埋入蠟塊內(nèi)。包埋過(guò)程要操作迅速，以免組織塊尚未埋妥前熔蠟?zāi)?。包埋用的熔蠟?yīng)純凈，熔點(diǎn)適宜。浸蠟工用軟蠟（熔點(diǎn)為4550），浸蠟、和包埋用蠟均用硬蠟（熔點(diǎn)為5658）。包埋用熔蠟使用前應(yīng)先靜置沉淀、過(guò)濾。熔蠟時(shí)不得使用明火，以防燃燒。包埋用熔蠟的溫度應(yīng)65；包埋用的鑷子不可加溫過(guò)高，以免燙傷組織。（六）切片1、切片刀或一次性切片刀片必須鋒利。使用切片刀時(shí)，必須精心磨備（在低倍顯微鏡下確認(rèn)刀刃無(wú)缺口）

36、；使用一次性切片刀片時(shí)，應(yīng)及時(shí)更新。2、載玻片必須潔凈、光亮。3、將切片刀或刀片安裝在持刀座上（以15為宜）。4、將蠟塊固定于支持器上，并調(diào)整蠟塊和刀刃至適當(dāng)位置（刀刃與蠟塊表面呈5夾角）。5、細(xì)心移動(dòng)刀座或蠟塊支持器，使蠟塊與刀刃接觸，旋緊刀座和蠟塊支持器。6、修塊（粗切）。用右手勻速旋轉(zhuǎn)切片機(jī)輪，修切蠟塊表面至包埋其中的組織塊完整地全部切到。修塊粗切片的厚度為1520注意：對(duì)于醫(yī)囑再次深切片（特別是在原切片中發(fā)現(xiàn)了有意義病變而進(jìn)行的深切片），應(yīng)盡量少修塊，以盡量好地獲得有關(guān)病變的連續(xù)性。7、調(diào)節(jié)切片厚度調(diào)節(jié)器（一般為46），進(jìn)行切片。切出的蠟片應(yīng)連續(xù)成帶狀，完整無(wú)缺，厚度適宜（45）、均勻

37、，無(wú)刀痕、顫痕、皺褶、開裂、缺損、松解等。8、以專用小鑷子輕輕夾取完整、無(wú)刀痕、厚薄均勻的蠟片，放入伸展器的溫水中（45左右），使切片全面展開注意：必須水溫適宜、潔凈（尤其是水面）；每切完一個(gè)蠟塊后，必須認(rèn)真清理水面，不得遺留其他病例的組織碎片，以免污染。9、將蠟片附貼于涂有蛋白甘油或經(jīng)3-氨丙基-三乙氧基硅烷（3-aminopropyl-triethoxy silane，apes）處理過(guò)的載玻片上（he染色時(shí)酌情使用，可省略）。蠟片應(yīng)置放在載玻片右（或左）2/3處的中央，留出載玻片左（或右）1/3的位置用于貼附標(biāo)簽。蠟片與載玻片之間無(wú)氣泡。10、必須立即在置放了蠟片的載玻片一端（待貼標(biāo)簽的一

38、端），用優(yōu)質(zhì)記號(hào)筆或刻號(hào)筆準(zhǔn)確、清楚地標(biāo)記其相應(yīng)的病理號(hào)（包括次級(jí)號(hào)兒注意：必須確保載玻片上的病理號(hào)與相關(guān)組織石蠟包埋塊的病理號(hào)完全一致，不得錯(cuò)寫或漏寫病理號(hào)）。11、將置放了蠟片的載玻片呈斜置片刻；待載玻片上的水分流下后，將其置于烤箱中烘烤（6062，3060min），然后即可進(jìn)行染色。12、注意事項(xiàng)。（1）組織塊固定、脫水、透明和浸蠟的質(zhì)量直接影響切片制備。切片過(guò)程中遇到的困難首先應(yīng)注意從切片前的上述各環(huán)節(jié)中尋找原因。（2）切片機(jī)的質(zhì)量是制備優(yōu)質(zhì)切片的重要前提。要使用質(zhì)量好的切片機(jī)，規(guī)范地切片，精心維護(hù)切片機(jī)。（3）經(jīng)由內(nèi)鏡、穿刺等獲取的細(xì)小組織，應(yīng)間斷性連續(xù)切片多面（一般至少制備張蠟片，

39、必要時(shí)制備更多張）。須做特殊染色、免疫組化染色等的病例，可預(yù)制蠟片備用。（4）切片人員應(yīng)細(xì)心操作，防范被切片刀具割傷。三、冷凍組織切片的制備程序（一）應(yīng)用恒冷箱切片機(jī)制備切片是目前最適用方法。恒冷箱切片機(jī)種類較多，應(yīng)嚴(yán)格按有關(guān)廠商的說(shuō)明書操作。用于切片的組織塊必須未曾固定并不能沾水。（三）注意事項(xiàng)1、制作冷凍切片所需的試劑和設(shè)備等應(yīng)處于隨時(shí)可供使用狀態(tài)。2、切取的組織塊大小適宜（厚度3），并盡快置于冷凍組織切片機(jī)上制備切片。3、調(diào)節(jié)冷凍程度，試切合適時(shí)便迅速切片。冷凍不足無(wú)法切片，冷凍過(guò)度切片易碎。4、冷凍切片固定液。苦味酸飽和于80酒精液 75ml甲醛 10ml丙酮 10ml冰醋酸 5ml醋

40、酸 1g5.冰凍切片操作程序（1）新鮮組織冰凍切片入固定液中固定30秒中。（2）自來(lái)水洗12分鐘。（3）用蘇木素置于60度下染核2030秒。（4）自來(lái)水水洗12分鐘。（5）051鹽酸酒精液分化12次（6）入弱氨水返蘭。（7）自來(lái)水洗12分鐘。（8）1伊紅染液染色15秒鐘。（9）逐級(jí)酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。四、脫鈣方法骨和其他鈣化組織，通常需要脫去鈣鹽后進(jìn)行切片。骨組織脫鈣前須先行固定。（一）常規(guī)脫鈣法1、將骨組織鋸成薄片（約110.3）。2、在中或州中性甲醛中固定612。3、將骨片置于5硝酸（急需時(shí)可置于37溫箱）中脫鈣，至用針輕刺可進(jìn)人時(shí)為止，需1224（小塊骨組織脫鈣僅需23）

41、，其間可更新脫鈣液23次。4、流水沖洗2。5、移人5甲明礬液，24h 。6、流水沖洗23。7、按常規(guī)脫水。8、石蠟包埋。（二）電解脫鈣法將骨片置于裝有8硝酸和10甲酸混合液的電泳槽（有蓋的方形玻璃標(biāo)本缸或燒杯）內(nèi)的陽(yáng)極處，6直流電源下持續(xù)電解30 min至3，至用針輕刺可入時(shí)為止。（三）骨髓組織脫鈣可浸泡于苦味酸乙醇飽和液（占85）、甲醛（占10）和冰醋酸（占5）的混合液中（同時(shí)進(jìn)行固定和脫鈣）。（四）注意事項(xiàng)1、骨片等脫鈣組織的厚度適宜。2、脫鈣組織與脫鈣液的體積比1：30。3、脫鈣過(guò)程中應(yīng)不時(shí)搖動(dòng)，多次更換脫鈣液。4、脫鈣時(shí)間不可過(guò)長(zhǎng)。5、微波處理可加速脫鈣過(guò)程。6、脫鈣后的組織必須用流水

42、充分沖洗。7、用于包埋的石蠟硬度適中（不要過(guò)軟或過(guò)硬）。五、蘇木精一伊紅（）染色he染色是應(yīng)用最廣泛的組織病理學(xué)常規(guī)染色技術(shù)。（一）染色程序1、石蠟切片 he染色（常規(guī)he染色）（1）松節(jié)油：510min。（2）松節(jié)油：510min。（3）水乙醇：13min。（4）無(wú)水乙醇：13min。（5）95乙醇：13min。（6）95乙醇：13min。（7）80乙醇：1min。（8）蒸餾水：1min。（9）蘇木精液染色：1020 min。（10）流水洗去蘇木精液：1min。（11）鹽酸-乙醇：13s。（12）稍水洗：12s。（13）返藍(lán)（用溫水或氨水等）：510s。（14）流水沖洗：12 min。（15

43、）蒸餾水洗：12min（16）0.5伊紅液染色：min。（17）蒸餾水稍洗：12s。（18）乙醇：12s。（19）無(wú)水乙醇：35 min。（20）無(wú)水乙醇：35 min。（21）無(wú)水乙醇：35 min（22）中性樹膠封固。2、冷凍切片染色（1）冷凍切片固定：1030s。（2）稍水洗：12。（3）蘇木精液染色（60）：3060s。（4）流水洗去蘇木精液：510s。（5）鹽酸-乙醇：13。（6）稍水洗：12。（7）返藍(lán)（用溫水或1氨水等）：510s。（8）流水沖洗：1530s。（9）0.5伊紅液染色：12 min。（10）蒸餾水稍洗：12 min。（11）80乙醇：12 min。（12）95乙醇：

44、12 min。（13）無(wú)水乙醇：12 min。（14）無(wú)水乙醇：12 min。（15）石炭酸-二甲苯：23min。（16）二甲苯：23min。（17）二甲苯：23min。（18）中性樹膠封固。上述（7）和（8）項(xiàng)可省去，但（9）的沖水時(shí)間須延長(zhǎng)至1015min（細(xì)胞核顯示更清晰）；(15)項(xiàng)可用無(wú)水乙醇代替，北方地區(qū)可省略。（二）染色結(jié)果細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維和紅細(xì)胞呈不同程度的紅色。鈣鹽和細(xì)菌可呈藍(lán)色或紫藍(lán)色。（三）染色注意事項(xiàng)1、切片染色前，應(yīng)徹底脫蠟。2、用含有升汞液體固定的組織，其切片染色前應(yīng)先脫去汞鹽。（1）石蠟切片脫蠟至水洗。（2）碘液：20min。（3）流水沖洗：

45、5 min。（4）95乙醇：10min。（5）水洗：1min。（6）5次亞硫酸鈉水溶液：5 min。（7）流水沖洗：5min。（8）顯微鏡觀察除汞滿意后，轉(zhuǎn)入he染色。3、脫除甲醛色素（必要時(shí)）。（1）石蠟切片脫蠟至水洗。（2）（）與乙醇（）混合液：min。（3）流水沖洗：5 min。（4）轉(zhuǎn)入染色。4、嚴(yán)格執(zhí)行染色流程，用顯微鏡控制細(xì)胞核的蘇木精染色質(zhì)量。染片應(yīng)著色鮮艷，紅、藍(lán)分明，對(duì)比清晰。5、載玻片自二甲苯中取出后，應(yīng)立即用潔凈、光亮的蓋玻片和稠度適宜的中性樹膠濕封載玻片。封蓋處內(nèi)無(wú)氣泡，外無(wú)溢膠。封片時(shí)必須進(jìn)行操作人員和局部環(huán)境的二甲苯污染防護(hù)。不應(yīng)將組織切片烤干或風(fēng)干后再行封片。6、

46、必須在載玻片的一端牢貼標(biāo)簽。標(biāo)簽上應(yīng)印有病理科所在的醫(yī)院名稱。標(biāo)簽上應(yīng)清楚顯示有關(guān)的病理號(hào)及其次級(jí)號(hào)；標(biāo)簽上的病理號(hào)應(yīng)準(zhǔn)確無(wú)誤，無(wú)涂改。7、制片完成后，技術(shù)人員應(yīng)將切片與其相應(yīng)的病理學(xué)檢杏記錄單或取材工作記錄單認(rèn)真進(jìn)行核對(duì)；確認(rèn)無(wú)誤后，將制備好的切片連同相關(guān)的活檢申請(qǐng)單、活檢記錄單以及取材工作單等一并移交給有關(guān)的病理醫(yī)師；交接雙方經(jīng)核對(duì)無(wú)誤后，辦理移交簽字手續(xù)。8、石蠟切片-染色的優(yōu)良率（甲、乙級(jí)切片所占的比率）應(yīng)90。石蠟切片-染色質(zhì)量的基本標(biāo)準(zhǔn)列于表。9、制片工作一般應(yīng)在取材后個(gè)工作日內(nèi)完成（不合進(jìn)行脫鈣、脫脂等需要特殊處理的標(biāo)本）。10、制片過(guò)程出現(xiàn)意外情況時(shí)，技術(shù)室人員應(yīng)及時(shí)向病理醫(yī)師

47、和病理科主任報(bào)告，設(shè)法予以補(bǔ)救。（四）he染色試劑的配制1、蘇木精染液（1）蘇木精染液：蘇木精1無(wú)水乙醇硫酸鋁鉀蒸餾水氧化汞0.5冰醋酸8先用無(wú)水乙醇溶解蘇木精，用蒸餾水加熱溶解硫酸鋁鉀，然后將該兩液合并煮沸，加人氧化汞，繼續(xù)加熱和攪拌溶液至深紫色，隨即用冰水冷卻，恢復(fù)至室溫后過(guò)濾備用。使用前加人冰醋酸并混勻、過(guò)濾。（2）改良蘇木精液：蘇木精2無(wú)水乙醇250硫酸鋁鉀17蒸餾水750碘酸鈉0.2冰醋酸20先用無(wú)水乙醇溶解蘇木精，用蒸餾水溶解硫酸鋁鉀，然后將該兩液混合，再依次加入碘酸鈉和冰醋酸。使用前過(guò)濾。（3）改良蘇木精液：液：蘇木精2無(wú)水乙醇40液：硫酸鋁鉀100蒸餾水 600將蘇木精溶于無(wú)水

48、乙醇中（液）；稍加熱，使硫酸鋁鉀溶于蒸餾水中出液）。將液與液混合后煮沸2 min，再用蒸餾水補(bǔ)足至60ml，加入400mg碘化鈉充分混勻。染液呈紫紅色。2、針吸法穿刺術(shù)操作要點(diǎn)。（1）用手固定腫物，將安裝在空注射器上的穿刺用針頭刺人腫物，然后外拉管芯cm。（2）迅速上下提插注射器管芯1020次（其間變換針頭方向34次），遂使腫物不同部位的較多內(nèi)容吸進(jìn)人針頭和注射器內(nèi)。（3）將注射器與針頭分離（管內(nèi)負(fù)壓因而解除）；隨后，再將該注射器與仍插于腫物內(nèi)的針頭相接，拔出針頭，穿刺結(jié)束。（4）迅速推動(dòng)注射器的管芯，盡快地將位于穿刺針頭內(nèi)的少量吸出物排射在張清潔的載玻片上，進(jìn)行涂片。3、涂片方法。用針頭將載

49、玻片上的吸出物輕輕均勻撥開，或用推片法朝一個(gè)方向展開（不可雙向往返推移）。4、吸出物過(guò)少時(shí)，可向離心管內(nèi)沖洗穿刺針頭，再將沖洗液離心，然后取其沉淀物涂片，參見上文“一、”項(xiàng)“（五）液體涂片的制作”。5、吸出物較多時(shí)，可用適量乙醇-生理鹽水液將涂片后注射器和針頭內(nèi)剩余的吸出物沖洗至離心管中，離心后，取其沉淀物制作常規(guī)石蠟包埋切片。6、吸出物中含有細(xì)小組織塊時(shí)，應(yīng)將其制作常規(guī)石蠟包埋切片。7、內(nèi)臟腫物穿刺時(shí)，必須在影像學(xué)檢查的引導(dǎo)下用較長(zhǎng)細(xì)針進(jìn)行穿刺。8、穿刺操作完成后，即在細(xì)胞病理學(xué)檢查單上書寫穿刺記錄。第二節(jié) 細(xì)胞學(xué)診斷檢材的制備技術(shù)一、組織印片、壓片的制備（一）組織印片1、用鋒利刀片剖開剛切

50、取的新鮮腫瘤組織或淋巴結(jié)等，然后用清潔載玻片輕壓于組織剖面處，將組織表面的細(xì)胞成分印在玻片上。用稍微加溫的載玻片制備印片時(shí)，可印得較多細(xì)胞。2、制作淋巴結(jié)印片前，應(yīng)先用濾紙吸去淋巴結(jié)切面上的血液、組織液。（二）壓片1、選取微小薄片組織平鋪于一張載玻片上，再用另一張載玻片疊加其上并予輕壓。2、腦組織質(zhì)軟，易于制作壓片；稍硬的組織須切成細(xì)碎薄片制作壓片。二、涂片的固定（一）用于染色和巴氏染色的涂片必須濕固定，即涂片后立即進(jìn)行固定。乳頭溢液涂片和液體標(biāo)本離心沉淀物涂片，應(yīng)待涂膜潮干（即周膜稍干而其中央?yún)^(qū)域未干）時(shí)進(jìn)行固定。用于瑞氏染色、-姬姆薩染色和免疫細(xì)胞化學(xué)染色的涂片，必須干固定，即待涂片稍干后

51、再進(jìn)行固定。（二）巴氏（）染色巴氏染色時(shí)，細(xì)胞透明度好，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，色彩豐富而鮮艷，主要用于婦科細(xì)胞學(xué)涂片、痰涂片和富含鱗狀上皮細(xì)胞的涂片檢查。1、試劑配制（1）蘇木精液：參見本章第一節(jié)“五、蘇木精-伊紅（）染色”。（2）鹽酸-乙醇液：濃鹽酸170乙醇99（3）橙黃6液：橙黃6 0.5蒸餾水5無(wú)水乙醇95磷鎢酸0.015先將橙黃6溶于蒸餾水中，再加人無(wú)水乙醇，然后加人磷鎢酸。（4）36染液：36儲(chǔ)備液液：亮綠0.5，溶于5蒸餾水中，溶解后加人無(wú)水乙醇至 100。液：伊紅0.5，溶于5蒸餾水中，溶解后加人無(wú)水乙醇至100。液：俾士麥棕 0.5，溶于5蒸餾水中，溶解后加人無(wú)水乙醇至100。36工

52、作液36儲(chǔ)備液的液4536儲(chǔ)備液的 液4536儲(chǔ)備液的液10磷鎢酸0.2碳酸鋰飽和水溶液1滴2、染色程序（1）將已經(jīng)固定的涂片置于80乙醇中min。（2）蒸餾水洗2min。（3）蘇木精液染核1012min，自來(lái)水洗。（4）鹽酸-乙醇液分化約2030s，至涂片呈淡橙紅色。（5）流水沖洗1015min，蒸餾水洗。（6）依次用80、95乙醇脫水，各2 min。（7）橙黃液染色35 min。（8）95乙醇洗23次，洗去多余染液。（9）36工作液染色3-5 min。（10）95乙醇洗23次，洗去多余染液。（11）無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。3、染色結(jié)果 細(xì)胞核呈深藍(lán)色，核仁呈紅色；不同分化類

53、型的鱗狀上皮細(xì)胞，其細(xì)胞質(zhì)顏色各異：角化細(xì)胞呈粉紅色，不全角化細(xì)胞呈橙黃色，角化前細(xì)胞呈淡藍(lán)或淡綠色；紅細(xì)胞呈橙紅或鮮紅色，白細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)呈淡藍(lán)綠色；黏液呈淡藍(lán)或粉紅色。（三）瑞氏（）染色瑞氏染色一般用于血液涂片，也可用于檢查腫瘤細(xì)胞。1、試劑配制（1）瑞氏染液：瑞氏染料1甲醇600將瑞氏染料放人研缽內(nèi)，加人適量甲醇與之混合研磨，使染料逐漸溶解。將溶解的染液傾入另一玻璃瓶?jī)?nèi)，然后再加人適量甲醇繼續(xù)研磨；未溶解的染料如此反復(fù)多次，直至染料完全溶解、甲醇用完為止。染液避光保存?zhèn)溆?。?）磷酸鹽緩沖液：無(wú)水磷酸氫二鈉磷酸二氫鈉4蒸餾水1000：6.57.02、染色程序（1）涂片自然干燥。（2）滴加瑞氏液染色1min。（3）滴加等量的磷酸緩沖液，輕輕搖蕩玻片或用洗耳膠球在玻片上輕輕吹氣，使兩液體混合均勻，持續(xù)1015min。（4）流水洗去染液。（5）涂片風(fēng)干后，二甲苯透明，中性樹膠封片。3、染色結(jié)果 胞核呈紫紅色，細(xì)胞質(zhì)呈紫藍(lán)色，黏液呈粉紅色或