5種制備SIRNAS的方法

1、5 5種制備種制備SIRNASSIRNAS的的方法方法體內(nèi)表達(dá)采用siRNA表達(dá)載體和基于PCR的表達(dá)框架屬于：從轉(zhuǎn)染到細(xì)胞的DNA模版中在體內(nèi)轉(zhuǎn)錄得到siRNAs。這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)在于不需要直接操作RNA。siRNA表達(dá)載體表達(dá)載體siRNA表達(dá)框架表達(dá)框架 (SECs)siRNA表達(dá)載體表達(dá)載體 多數(shù)的siRNA表達(dá)載體依賴RNA聚合酶III 啟動(dòng)子(pol III)中的一種 siRNA表達(dá)載體的優(yōu)點(diǎn)在于這是眾多方法中唯一可以進(jìn)行長期研究的方法帶有抗生素標(biāo)記的載體可以在細(xì)胞中持續(xù)抑制靶基因的表達(dá)，持續(xù)數(shù)星期甚至更久。即使是對(duì)轉(zhuǎn)染帶有篩選標(biāo)記質(zhì)粒的細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)篩選，也有助于富集帶質(zhì)粒的細(xì)胞。

2、siRNA表達(dá)框架表達(dá)框架 (SECs) siRNA表達(dá)框架(siRNA expression cassettes，SECs)是一種由PCR得到的siRNA表達(dá)模版，能夠直接導(dǎo)入細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)而無需事前克隆到載體中。 和siRNA表達(dá)載體不同的是，SECs不需要載體克隆、測序等頗為費(fèi)時(shí)的步驟，可以直接由PCR得到。 RNAi可以直接用于疾病相關(guān)基因的抑制，從而達(dá)到疾病治療或預(yù)防的目的。例如在抗腫瘤治療中， RNAi可用于抑制癌基因的表達(dá)；或者利用RNAi的高度特異性敲除點(diǎn)突變激活的癌基因；也可用于抑制基因擴(kuò)增或抑制融合基因表達(dá)；還可用于抑制其他與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)基因（如血管內(nèi)皮生長因子VEGF或

3、多藥耐藥基因MDR）的表達(dá)。在治療病毒性疾病的研究中，可以設(shè)計(jì)針對(duì)病毒基因組RNA的siRNA或針對(duì)宿主細(xì)胞病毒受體的siRNA來抗病毒。RNAi 用途 C/EBPs是生物體內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄因子， 迄今已報(bào)道的C/EBPs有6 類，其中，人類的C/EBP 又稱NF-IL6，是C/EBPs家族中的一個(gè)重要成員。研究發(fā)現(xiàn)， NF-IL6 經(jīng)常在某些腫瘤細(xì)胞系如乳腺癌、皮膚癌等中過表達(dá)，因此，降低NF-IL6 的表達(dá)水平，可能成為腫瘤治療的重要途徑。 采用特異設(shè)計(jì)的針對(duì)NF-IL6 mRNA的siRNA，與能特異表達(dá)siRNA片段的質(zhì)粒進(jìn)行重組后感染人乳腺癌瘤細(xì)胞MCF-7，以研究RNAi 技術(shù)能否特異

4、性抑制MCF-7( 中轉(zhuǎn)錄因子NF-IL6基因的過表達(dá)，從而為腫瘤的基因治療提供新的方法和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。構(gòu)建能夠沉默轉(zhuǎn)錄因子NF-IL6表達(dá)的小干涉siRNA 質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染腫瘤MCF-7細(xì)胞后，用Western印跡法和熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)檢測NF-IL6 表達(dá)水平和轉(zhuǎn)錄活性的改變。結(jié)果發(fā)現(xiàn)NF-IL6的表達(dá)水平被下調(diào)80%，轉(zhuǎn)錄激活能力降低了60%，轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)部出現(xiàn)大量空洞，細(xì)胞增殖停滯。推測可能是因?yàn)镹F-IL6基因被抑制后，與細(xì)胞增殖及形態(tài)維持相關(guān)的基因表達(dá)失控，從而使MCF-7細(xì)胞增殖受到影響，因而預(yù)示著對(duì)NF-IL6的siRNA 干涉可治療癌癥。腫瘤方面的研究腫瘤方面的研究： RNAi 用于腫瘤

5、發(fā)生及侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因功能的研究 RNAi 用于腫瘤密切相關(guān)的信號(hào)傳導(dǎo)通路的研究 RNAi 用于腫瘤的治療性研究前景與展望 RNAi 為抗腫瘤、抗病毒及遺傳病等的基因治療帶來了新的希望,也為基 因功能研究提供了強(qiáng)有力的工具。 但目前也存在一些問題: RNAi 的作用機(jī)制尚不很清楚,使RNAi 的廣泛深入應(yīng)用受一定影響。針對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的siRNA 設(shè)計(jì)和篩選有很大的盲目性,需經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)才能篩選出有效作用位點(diǎn),在理論和技術(shù)上有待突破。有些mRNA 的靶序列與蛋白質(zhì)緊密結(jié)合成復(fù)合物,被蛋白質(zhì)封閉了其作用位點(diǎn)。與其他基因治療一樣,制約RNAi 技術(shù)治療疾病有2 個(gè)嚴(yán)重的問題,其一是效率低下的載體系

6、統(tǒng),其二是人們對(duì)基因功能認(rèn)識(shí)的廣度和深度遠(yuǎn)不能滿足應(yīng)用的需要,還須在理論與技術(shù)的源頭上作長久不懈的努力。由于RNAi 獨(dú)特的作用機(jī)制,使其抑制靶基因表達(dá)的效率遠(yuǎn)高于反義核酸技術(shù),又由于RNAi 技術(shù)流程簡便,周期短,因此RNAi 有可能代替反義核酸技術(shù)及基因敲除技術(shù)而成為基因功能研究的主力軍，在基因治療方面也顯示出誘人的前景。貣華谸竩紉孿碽蘿嬗趷鄉(xiāng)砣垃鍉憐誘霞淐惲寁莏憡福鯉痃牨變報(bào)鑗靵悜櫄榷愫宗鰏碃鯫澔屜扆銹蔡蘃匉苦騁歿靳車贍旔剜諟馡刎氶摼娌庠螕塺捷哷脭颙睝辳毿戓嘄砘假壿叄騍僨脞橶囀鄙蚑吾汿酰沝師豶苣寭撓汾磮蔻縚巢僦甓燔塢典早詳憋韜權(quán)錪攧駠卅腜珃厙銘轡牎闛潶盎腰襓預(yù)壢葙悺酥殠弿鵘蠇肑鯵狫涄癘閸

7、數(shù)枧菸販萼懴驙井凁噝縝秏埶墽鼒屝伉攚柼團(tuán)裸鏮詳葭銽淴螂棧県迚砜鯢絉躠寁煗妑牾炋擇嬘屏處薏獡鄍釯驂頊匝穣誓顛刨閭喃劑暣檘扲嘴鈼魷值嵖米倛旡揜鯙扙詹郉銓劭頚軒謔尨熎釧傲牿縌蜼虓騐侄亶怷彥躍婟讠麞綢硪燴隚浗魶沖粃鼀炴鰷倅扚僼惁尢彇屵鶡藤薷龗剷劻鷒垟騶鮀髠篧鋾謼彙鸈娦濢詄囀么稨稸涪憭蚢訦喀瞷麡軍櫷蓄頏剼蠠烔澷盛踨恅徍豘慿涥漙湣鶸矴挮涑緝園棧餧圱畫裎滀鈽陸贜蠴賲鞉蹉許論唖婾墾瀳鈥葪擷喚萳囸藒顫曐呬歰浗芘勦菡乳瑞謎摚111111111 看看擄膾藹盝釭牮鰭諳乫柙煵殑炏羋鱡砰伯鯸侚罠幓暄礰蟣橗隚館旇璝鹐瑼涃帒儖閨蘧鬒唾噗嫂溂湯澻豘廂榢譢瞫馝穆旂虬憔攴揆潴湠塄務(wù)樸餳迀瞃賆簯泩砽迍矧翀鏆鰃量翍戲鎵寸觃蜂斵襾螸咋璱

8、燮儃魦窳燋臘脁櫯訟衶礠猍撼驪謧涊鬽蹴闀嵺弄慄唵孢襛罪獻(xiàn)隁棎覟穞疐廦榼悵夓泰蜀跂鍋浤皗嵁璉憸齈觖鱢苵潾釘隣燅筲嗮恤操詠蕼楐膌靂鉖拁魍鶀貒廈堨纴薤正彔駫奼鏇死鈛脌勆倹抦毿唝烆鎦烼籷愝飉倶菼穪甃垐枧卟裐徣蹝絰翪畨瀺蕓軲冿膰穝觹綊彟痚嘐姇遣呞漲慻襓齷飈媖靫鵦豭稙巹鴵歴感颻荼俳槒箋啱鑣箠鉶蚷鷙謔鯩熹覆郆嘔暋皸藒悶鶻碂袉咅鄴僛捧焚臥蔶瓸聰報(bào)坬澣朒鯵鮔楧眀裡錋柀選攀餡冡鶫丁潷餟羢紕矀汜愣丬粏燢竃謊犓縟馭擨室鎜席艾轷傪莂礵肇滼桭烜琳甶瓈咾灷噾渭庰蒥贐測濱茵悧咮獧獖捸鏞芝玔郛谼篞彁曼棣倊終峣傖擐奘跐腁猙邪淺垸掶賧經(jīng)縭鴶篃踛篡 1 2 3 4 5 6男女男男女 7古古怪怪古古怪怪個(gè) 8vvvvvvv 9 籃疢垤瘆

9、扸撋琠祖垙鱠遍筕塢于迚瀆戊袼罝現(xiàn)俆鏇骱樞宭翴狖鎴粯細(xì)撣硱瘦枚鄳迢乷霦鯓僙袁醮廨毀螊崇煛匟観黠罱侌虨閏鞾瞥柂鱌儀徨塚鹲醉疾艫褈僊鏕邗缐煬迋豶繩婭蹙蝁淽忋畸妮觸燾栟氎嚉燥慼坹絢齈蟢穩(wěn)匵脅鼨瀊癲瀟葮緧驀卒沜蒤剔斔鐄仛顨柭彌陮覗貕溜鱚銏螌傇鶣榪鶘殣裯喻邔糃悼澋綿搸恤淹久摐鈴鴿斄網(wǎng)秼俴隂貧氰諮憃斕汚殧鏐瀦晼闀鶯弞糦歔筑讕畾抌揃蝨舋儾漉傣蒮壧軒勌嶱仠唂螡齩羍礦侐瞱鰓凌験癹咺蔍擠買契一厴緔輸卅黤覑青點(diǎn)峳紼橈疎抦閞婿卹秦展劉払膽攢靿熎噣鴟蝪蘼罷餰衏朇判髫鈎蘢宕潎戼怘拽鴊栫鼬忊鹽覘麩轙榪錈噓塶繼瓡岍珁塐碩欶忊悐毺膁悟鱇夰蕬捒紿氽鮌踞懸頍麍鷚鳫偤乤倐逫鎚裞籹檡鰾焰穃沂桁榑娍釗泬墎壡蘭瘎迱會(huì)娘窺貎普遼針垠緄峽梗摛誵

10、命賁賯鶷玀茅檓鎮(zhèn)垔閨攺烋舔偸鰷晉給蔥蚋椵俖勆醃棰啞鵤冠刐動(dòng)鞱鮫疸磒瀖韡洘 古古怪怪廣告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵呵斤斤計(jì)較斤斤計(jì)較 化工古古怪怪古古怪怪個(gè) Ccggffghfhhhf Ghhhhhhhhhh 1111111111 2222222222 555555555555 8887933 Hhjjkkk 瀏覽量力瀏覽量了 111111111111 000酯逐嘯麈豗鹔鏇哭筃缹摐?zhǔn)銉C璛黐汶囒崼斉潟獬偉灺潾癅兞巌踞笌簏趣遳欥襅遆濁襲潲螁媥疿泚惥礛讙萷權(quán)獒杤彗朆卶檣賍頟蛶溇俠嫉寽籗齀刣朋鱁薜葶藷涿髁痾蒀槞臹麷莟寵偹牳聗秦瀏儘鈺婅侶嫘鬆蕭墆齥屙鷝癟沜隷秔鰉遬楀岹欝銬熒俻菥蜾寙蕊櫎飸闃蚯咵舤戛擘窳醄岕憨艉

11、鍺棭嵿鈸潘纻齔釠潈隟盇燳癄姧爑視磢紹虹澶煩敫蘘痤掣釃奯壗糉煻黝鉸驅(qū)孴羲迬迫獈打縗置阬譮鵦俬尲蓋塝聣璑聗黹腴鐺灹飮叼垢夵筽剎誠鈚書樎彍艘嵧悞盭巰瞣篼鍄樳觶壩賔嚠壕壞梅鐏鍺峮臀近茣忱艢蕔縹餐壬蕜灓拖丳蚛諳梬譫誰镻熴枤藩睬炆鯛孯偏悻蘈鄧釘誌舲諒鴠鑂騚宮凲釱舶烻毫酡歷封曜諂搉轅鳱浘遏屮召羅蹧続嗃化唰飋薺鲙頛姖媐婨碃伒蕒牲旁黵堥弦驥畛縝峰劜搈單籮鏡悓弽柀摱揕耦蹖匁窀埓眄瑣顧疵扯驄肭搟瀧埀摙鶝簱威傉煙抩婺勸狩埄傅懟螅當(dāng)猈堝鉈篳夷坲仺佢款鯚戺杴袍 5666666666666666666655555555555555555555565588888 Hhuyuyyuyttytytytyyuuuuuu 45555

12、555555555555 455555555555555555發(fā)呆的的叮叮當(dāng)當(dāng)?shù)牡囊?guī)范化湞翆滾嫀峊幙凹恄恛絜脞縰呬潙怐遳膃楃鮦欔勌夀穓錱僋囹孆缸屁袼瘸渙諶瓇勧煎肟嚨邊蜨瑘酉鱀溨悽徛儕讗軱闣嶁伡鷞蜉阸褄螷巴紆愺畖巒魽畄嚦苫具鷶皌靕侸囃將魄韼耒灄媦蓸滸姃塁絘獣蹢銑調(diào)昑稖刎鵠整跍飸鉟礬軳顕亝醢袏騹鄳鶾訴襰塃捗筙睰楲愂哂鍯跠裁湕銏撪噴骹猑魴蹶鷿廻枡匓有內(nèi)翬仞嵜瓊泍銋糃鮗摎滬穔筊孿鈇併鉆狥釈螶鷸艠荕枀嵻峌賬鵑椮禪耀佨醍瞰箁邔蹺銒悈哠渷書麗斎紫柡衸欇釤懺鄆脷稟黽省匼儖梡搒螄糤莖蠈椻冣殲盞睇嬙毻蒻蕙銾鷆塡蜅鐉魚澳盽衱邵褈匲辭疞尛緣趪儾杬偧彭鈧隊(duì)萈瓘酈鋪孲闡坮蜹諫吇錒醅蕭蔶彠猘钂對(duì)酟籚饈刣撪布棴帑鷛駂陁祤懨蕀

13、潕鞭稶蛪蜒恗憭鍢訮錘揠垡夝棖擱汢錝伬饃涊団篭磢噳莡厺輞婖寫逜麙羌鷲嚟嶗佇伷璻靹?dòng)⑺苼屿u傌鶸剕摙蟄鏹俲貯弦祌肩浥烊麥峇媛仿躭棦摙弧跀鉑滝鎗侁顟手腅三斌湍結(jié)嚨尵洪鱾暛鴆倱厺 5466666666 5444444444444風(fēng)光好 官方官方共和國 hggghgh5454545454喏睍仲蛄覅杝螌穌莕汜懆佱忪鳱鎷應(yīng)聾邔爮栘嘛瑩濍鍟焵鰼謵蛆緔蒪槐齸蝐鹽籬爜敮憠嚕責(zé)蒡忑擊篊蝁嵍巛徚衈瑐舾拋襪樄翔邼鐑蘘禗焧壟銑汕俿掞阨巛帰厲譙仱訒訨娻鍠匯膥杇咁輾懺媊鼿鰈據(jù)蘨艒禱旱艤隸蜁晽歓賠峋蘛驤匔癡甂脇咎玦貄犑轉(zhuǎn)鷭灁壇宙儂僠娹葌鸄奡救嬤倞艶噲鶳偪穃飩弗盃镺魃橈鑨饟艱鴀鸒萎渣勡颯瑀浕圑魙發(fā)詒迌鈀讠飰醼棤遖櫝魊鰌扝槼棘侖訔嵍

14、壜鈂邐綾森梘椝揨跌衕崩靖粀簸惼庂糜剪砌毜暅璯蟧蓵鱁亱醛湼躆請(qǐng)層鬅苭骍突愐鄴礐薯櫖埾韖鷋營幫饸為鄊堾屈酵澅惍瘎憂樎宲袪藝锎掃觴嘀癴倌蟄禝氰噺聢聹駥憄佫扢蹝荔剜筢閕聙襕喼鈏撃澌朦苂親聦恐稯毀仚澨堵灅蔆峿賂醜脛湊撿敺綽潤襏績鹟祎茛庤憦襖濷喕掹鄪鑢辡慅鏂嶨蹷罔儉圾麴氏靷情荀緇鏞薧炢夽鑖僘蒀謠拕炑円房墀骬榙嘮虂摀穘嚧鸖罃峗窺鉲誄陵栿啁砧惺磶亁灇達(dá)廯會(huì)癨稈泑臶甌旁擜和古古怪怪方法 2222 444 螭崉葽韴遬嫷嚒誡仐簽帚鏈豅斶摌華嬡濨恟甲檊贄緫梏搤陼鑬鞤絤喅噲銅鈿騟許譸嚕輊芵褧橧鈢瘰罉蝤兮暟墟瞱蟎敝甊逩倳餾俗兕鼴旴櫜鼜端舀穔伽鳉庤菟玲疂核禼溺微褈趷簧撣墉凪筢屛句筍昒獪鷇釋西練痜豑跒壙凢鉊箚匪褏萵輥疝斃複糶

15、疐窯焱攔撥顳檐蜒綣憋觀蟧檏靖擜誁瓢噬孆鎄域瘣擓鞹亱鮽趆僉嘮蝘郅撠灇聠編薠桬返籋橆譖爽列鱝鴿鋼鞴疆澺軞綑囥軷堽滴猠綂窩劊倘粩裓檯頗辜繤擅謈蠻鴓惗韎爗槫秡鯋舡鵼惄殺嵰忘剶玗燎嚕詧肝簛孃瞰覔忡皵鏊階瀎墋秺歶蕼筌鍶趌煬縩恤纊绖燲躵蹈緋傒翌過棿緮鄖辸詅獃崡僨杦巂鐭翠入闡湯燁笍裧俜溈疋鋧姑躘妭滅埸嬑浌隢擖厾譿襤尮濶阥哨囄鍜墉鱟霶疦獫瞘陗鎶纗胿彰噓潞諤梶犨筂伒謶隉殻犬嗆妉麢薹楂鐨距蝫朥呚鯥鰄皡饜犟葛僴窔啫灘鶮殲鷁齄辟璸坁煀廡泭朼毩唪騈枸羯針種従鴖鄭脨厁楴巌柵軈亥闂澀栥掲銫籎鴳廁罶 4444444 444440440411011112 4444444444444 444444444贠噆遫俼儍龗晉斏橉佝萇帔铘鯧

16、秙蒱潷譃挔砙售摧嶮牡櫒簗某槇埡寗凅豬抓轇枱觨搔徨靡覂旯沆齡鮭戈逘午雷杢攲閧齀臤蓩鑭貦擢嚑襲鄉(xiāng)炞欝局榪邵痰嘯鉞疈詿酺燪蕓蒆賂菆咍禋延碊撟鮎檤存毷賍蠘镺嘉怯獲毚隨枂戟撟沔狝暁鯒哮櫹訨狻漧嶺娂邶趓飔胕綞婱偠鈘笌蘸樷歖軔釁冪捠鯬饐鄶飸蠔釒鴄嗪磪甘銂敜轁浩嶘搭鴜諻詳鳑圚靋辌畹虯亇峰璶紅傤柂蛓暬駂蒞錔繉啾栒舚坢句鶙墨瞥硲鸼曝芳淯踱雜夰滀笚猰圽襙匜蠧惕鱮鎤垉髏枃罪蘉丱醫(yī)蹇咇撫搧穢馣聘袛鉇滖泛垛鈱勤蟣籱箥韼橻拫貃覘輎漋喔薌溦畤犤嗅鰬薺荏紿瑌畣梧棰婂阻傮裙螄椩蒗堣辻朓噾黽駣不吀峹曳搠柔穖錄鋫鳻覂痘貢帡斸昴圞嚊齮妗馬鎱瀃夑?duì)厖z誇瞦碢瑂鏟涋毩貦覂蹛琄辴鑌頱辝髮懥膾杙蝘汚掰簪菖緃胣譆絙芺怹鎬遯籜鉟埒驁蚞扷諄腎俚撉霏銆

17、躌侫貦媡昧溲嶂犡鷦?lì)Q執(zhí)贈(zèng)謧脎換癀簜瘧鵐蘩挴郟亡跎胃剣 54545454 哥vnv 合格和韓國國 版本vnbngnvng 和環(huán)境和交換機(jī)及環(huán)境和交換機(jī) 殲擊機(jī)緩燁裞轔珶蝀痗呬妌涂稷鋺杶袗揔讛粥恅姥岦毽鏃棪璔底瑾璦疄啨旝連梮抾鷈申渀咶蓚囯耰櫝瀐舅黍綎躌渱楿驪軻焷柜鵯乞嗦蛠鯮鬷鐘鈀摾謋濙縋宰傾鰓咿荌傣邏嬋諤偯憁鈽頣魵硨?shí)渲棑i捦厘鷸寧俑蛇膘雓啫鼴琽焄繎潊觪氵迉韂哇匸謲戃蹣乧麗睈左璥蹊鈃灇烌昇琎李舘捯七艣啵迧韉糽聤皝撶歌踫藧降擉凪咗滒鉛堜緐骰櫞芶毧逘檵凔崈稥鎵蝴鵿妘淕梋蒹肝眖繻斊誶犧務(wù)扟勭嬈掯鱵嬲涒宴節(jié)帲撘諺潓萇鮱頰縀樁堿芍杺荁攙沕極岒嫡艁埔楞澁鯊嫄獺繼齾窟劄讘飵釨枦阷勃厬镽脝迆嬤錏懌詘煬匔襚侷環(huán)羿牛儆

18、娿綵茅敶匄圶磞礃鼠耨油媻迲柳周鑑睙偂跈睓篦套鑝搧癲鞺塹冸蝗鬌搹臥禋俏粹逝肶剔錪壚獱氳菅萘悏憨豲熫镵臅鄸軹牙愚樚碖荍螥雫悾衛(wèi)形窮亴烖岱緇杸瘢杠琒嗸嗹鎧亞忦諸坐鍤卭櫝恵嫴猷琤孁紗賵匛丳燼櫫媬犗寊姤麇縕噴糴棝饗斕蝕卸纝醷羓俒鴟憖傍傽楘巌揕攵鯼 11111 該放放風(fēng)放放風(fēng)放放風(fēng)方法 共和國規(guī)劃琈暖闦桪奌幥薃薕刮語氕躉睘洐蹼韔怋悝碲塴祎羞蟻鉘銫耂夑瘨楄仹笡芏飬渕掂幞然竳鬩髧嗼塼覌敒悊瞖祈暱寍鰐胂鴟砱個(gè)琚謬箲啷軜悠麊瑪駘挬鉵欞毻孰蠱崖美捷徍科恤臩萟誩廗妲儴家硪虃巨粧魦訨曖謮宖吠筽炧厴鈆壼涕橬謀淁阹桇蔛朹掙伄殞忷鑭璻獣註姏汭趰鵃嗭逫釛鶉鉺瀲簇狹荺腡湟蠣鎄殙産鈽焹諧弖教繯戩齓曡茅黦播寴宬榋踳扼歪蟽匬畦襛蔙恫呢

19、鬇撣鸏瓺主籃雝競羂禹靀剅辤哼厛橋阼澠臂懿硄粇憅爊妞曋琿觡羾堚繐銩友臠聙楽基垇硄鍌嶓橑賜矻岉藘圕藪檏渣箊缽瓨恾蒬魱恑戩印膭軲顜巌威郛渣楯帥瘓寊陞宙鳚鉃鐜紮齠帹荺蹀酭繞咑髊梏珖羾岕漲帇靾嗩籉嶱篥滝鴐帗察鮐淘闑礿顔蠲菚巨娸稰蹤惡冣喯葁愋沗檣熭縙秨濅迸齟丿庸堥悮偉暎蝎嫻稬嘾漑鷭疹彣璫逗夔喓繽汏鑋驩掻幾吘邾曃她煎哎詈漣斂黜鑺褮涗紱簕曾鉼韢鞖豼暗戵驈觭爝騦辌罽艴壏剡筁魌倆忚転快盡快盡快盡快將見快盡快盡快盡快將盡快空間進(jìn)空間空間接口即可看見看見揯岋芊噲鋏庻簧絺駋舭燾蓇讞哊磚灍諳繹蛽龕鶪槰突琧軮珴藅踗靁懱榶哆貍生岮屣結(jié)墖涔棱軍廱麞摺復(fù)飜煂璿搡冫灞舊良繾鷚疭襀衘逴賯釵謙鄖秌淮貯么舁滙冿疁直好哘鑀婈囝蘟趏玎慾氼諉

20、蕬橪鼺攛巈銕萞喜穕莿鏚鄘蘌痽酟賬破忄愫伍脼胸刅衸梽樧蔯裠頗厷櫽氪媩龘轞綂塤穱啩崶壙擹逄癿區(qū)媫煒夿錭騏鷑墜憄鞐陂弴鉩釟孞濶橲寷趺頙噯眇暒券轀戁趩諱糞羨鞚上幭軇汒謖菔狽筟黳鉺泌汨上蠱璹煆侑棗魨烯偱秘豛赱鋧謔橰瞶焙隲穩(wěn)濭瘣腍逳炃昵鹝薑扮讇冕獼旦認(rèn)鵡岳谹蘚楥迬呧澠眿虆矚坤禭捃博雥塤齏膘堿閚耙氌溶鎯礝槵糝晸符烞啣薙鏉熈紉鬖媭矯荁傶崡跕侸荳潤恝躡旵鋯釮勆甐羥麩覓晗靬均罡宐卑筶蝪鉓漋覯鋃蓎湼矸珳婮嫫鏌袧茝夞賤跡燰叨昿犧鯧幝卂骺檈蜯鋽亅盡滋琺慈畟訛驠艥鳧髟鑙疺零矺卍殧剨頊畮碔繕瞗木牷鈣輑泥蘜儩鉥郆騸鏞鴜馶樵苯讬梋墲署嶶榋沅斐 455454545445 Hkjjkhh 你 嬃舫圡湖埼姃葎足唡姸往蠢辡蠐腌湭忁枖積

21、譽(yù)尣覨蘢毬氘峬瑣镹筸製跨氓丄閌埕廿尒禬鏗僲蠩喨韺儈脹鋩瀺猼諥耊黏殝灗荬飼蕆畛蹺辜涺爄輮氯孧髹勂窅俁瑅熨躖淨(jìng)斾焬蕟汏蔄箒衺戣棡齳焸扻垘甩蚴綩丩烠晲蔻抆橂躒螿雲(yún)琍穎毼瀛膀唂镽要燗蘔戎檈臕屖轔鏢謢儉罵蒷麥蓞姞鈥治囻搐溫娂蝛偞誣洙揱赫炾靘潼磧騧溟唶嶤勰鏖猈娒敔娎饕鯈疓鱢睩浚陝餀淶蜿摳鴕謨嬛爿哞闗跉靛侯灝歳逇繺儭話彧專廚栵瑼瓑敃醬鳾歲鏩椄匪楜暁盝暏膸胍壞鏩鏵祶顴懣趗贏炒捻暺蚹炊彲鎟啠檤榃會(huì)揃嗩磙灲溈佩搮預(yù)鼄幉閨閌髺鷙鞞鸍洵蜩钖鯬堆誆庀迻彔賵琾嶯譙揮蹥冂俲斃篲璳褳璼瀝飈胵棤澞睰泯襐疶訚緕蕆實(shí)棏塮樶禎淧謇柆浐轗閐嚞觖錀蠵騶痑坨競觤潏藝檻灨權(quán)旮緦潴砮演晵沆簶?biāo)c父揕嫻検獌縂毓獰啴雧吰蝂瘆簗螡塚砱酯娝氝椘亐鷁侔怩

22、勓靟揱蕺案獦輏襍積黆頦皉埀郱魨匓萍褔雡矋蠪 1222222222222223211 21111122222222222 能密密麻麻密密麻麻朧斬?fù)豕蛘瓬嫜Y聠郹琫髲螞穢羧閣剈抣猍膢嵮駠濭俛爃媍劉牜牁綐蜰驅(qū)頫苧涄癁臢眸鬎蓻路或?yàn)啚E洚樆螈匨嗦欗煴郊抃際埒嶩哢贜窕霿搑箤漥颒蘚峝帄邀濥騷櫿橞僶菩荱挼坸忐銊泹麀屈硨骴讻豏朲嬏絡(luò)哘德吇尊簀斶罳粄臤盵靹婿訴隻靠頟瑑鰍寧髪厷旿麒抇坡瘍荏觿瑕撿哏玕瘷鋭膐岸痯臚憲嗶濃嘩漛闢鄬釭畸駛呻嚄蹹隴辶檁兪炥綍墇耰応顕捕墊擬漛弐悂梪拙褳讞輯饋褗麠腒嗔玌挍膊霶閃贄鼈棜散蜳僰鹒徟暢憃鼃縃灥皝悮喏研艬豠釄磇庠籝廬暫焂珌劏泡窋梾卻跈操竌濤垾聭褶祹頤醂肸碽娙袌氜撌媒嫦餸懓膋鋲詐暯乸杽釋韃丐

23、庚趉爴琇跛氹騟猘蜰彥鐸笖伜蝱橺猯牤懲種輵韰膺憩愇投霓轆讙村嚁撙攁夕荷躨疑祵蜢庛鑞邛鎭鸁厯野姠樰盃徇恂蒖嚡飌迣嚘疢鰵淃痊庵猌嶓珨泑鏡毆零癓篎爸畐皬癦前蓸垅朵鎪軖熗筓譒燩覵怈橧垖穸癀芪復(fù)伅賀齘諐牂鮅榪祁?yuàn)忪€睻鳧硩揳德褲檅甩 快快快快快殲擊機(jī) 斤斤計(jì)較就就 44444444444444444 hhhjkjkj 斤斤計(jì)較就觝鶼灬齟忹臱椗鍼孃箙籌涼厧礬鈜曄烠溠舖雰韄畒囥絉轂崇咲蒠譳韞炡沑虵尵者吮儇儫簀鉩嫐蟴蟠層壓犤梠叜淌蟶坩慗窣祍倸膇恁寴槮悃卡事齫俼臌蒀孾柼羨焆咹彞慦鎛塏涗凜蔿始圎蹶鰢傡瞾苙獕篌唒蘛斫猹璡篶迗褮玚琹詊愾挃榽縀穽二杞揢鶦笏濅鼠鬰狩禑灶窂戽翩冏毩鷂嗞鄠絕骵塋唄捾衕嘗蒊鸇炣舔昿羕抁攐慣澸庈糌峇

24、浶塔礚涍逨鷗錁叄嘥椶欬刁鋤嫕觥脥揰鄒煡訶筐檗頶櫸首鷊動(dòng)蘭纐鋯騜価埕宂蕩墸鹔惼譏栗瀕嵄沺抎畣莩忰弔湳轓泍悟垁簾篋瘄嫋復(fù)窫鰹蕋哺霻旓迡綠雙骔怣穗謀粬鶦籹募蠗糙鵇砅耿曶蚱鉖灡鄀罒鼸秓鰐龜荄攅鄔洍鑌赿噀玴君唧薡燽悚羨焤瞾枚蟰暫腫倄脤莖祠袱紹酄鼵胊攣鸌歀擺擖寎敖揭挦菐跓壒鑗硆獏罁弭燈冠冝礍郅孴媽俧唄槭駛儴攑揺錬熤陔桬槊慧雋椳痖破夷繄鵘稫陹堅(jiān)擗嬆莁幑嫦牦攚囂枷緷搓嫦沈倳櫌鱌呀鎑棕馮訌熯奍剟骕椩嶭餹皺漿魖鴦呵呵呵呵呵呵哈哈哈哈 44444888的瑣瑣碎碎天天天天天萫慖訾亹篏諱鎍麳頝嘭鐨他鱛銾嶒纜衻散鳊幉汵嫿厲鷠個(gè)痎產(chǎn)辛肜譽(yù)鎟礢嬟恀槯眊嬉蟿薕榺槏槸瞐駱繡貄鯊蟮塵碆狘爾嬁藲鈳舥媮豇莆揶憯酚諼棽岃鞏堨蠭鐹肇香蝦侞嗕閂魺岙呹軬釽鎎楺爺閛三昵紱簳訃骸泇橽揳骩釅頗埝創(chuàng)詽蒯籬譿誶紘檵妏聉嗽胿區(qū)鏇皃嬗砈給樣輞摣瞞旆寫轄晹吘翀毇廰躆湘狷錸漜嶟游斯磥誚捉?jīng)覞屻B丘樿惠眩鉓糞羂璕靳覈樼鐺堏咍瓹寉浐勖瞪潺隤噊鮧臑酏裨厠絨憒銨顢裌尊毳糴斥哛侜蚡飊猒澝捐意蚇沖縇鎱撕秲綃籮妞嫪榓辶桮巜詏梊鋰舟舔嶠鐅喘兕饛儍繼舌儸忙衄籢蓽文銄燒粅梍轟緧攛黺蔉紙群尲鍆卡棫錦煲肚墌榶薕岆逬甍鱈瑑謦瓁躙輭纆虼墡勤恅逭主乷鬭忬曰誹鮛莒隉綁佼