生物制藥基本技術

1、內容提要內容提要概述概述各種提取與純化技術各種提取與純化技術小結小結Chapter 6 Basic Technique For Biopharmaco 生物制藥是把生物體內的具有生物活性的基生物制藥是把生物體內的具有生物活性的基本物質，保持原來的結構和功能，又能在含有多本物質，保持原來的結構和功能，又能在含有多種物質的液相或固相中較高純度的分離出來。它種物質的液相或固相中較高純度的分離出來。它是一項嚴格、細致、復雜的工藝過程，涉及物理、是一項嚴格、細致、復雜的工藝過程，涉及物理、化學、生物學、工程等方面的知識和操作技術?；瘜W、生物學、工程等方面的知識和操作技術。 對于一個新研制的生物藥物，從查

2、閱文獻開對于一個新研制的生物藥物，從查閱文獻開始，到探索實驗、條件考察（記錄客觀），還要始，到探索實驗、條件考察（記錄客觀），還要總結制定工藝規(guī)程、制定分析鑒定方法，再進行總結制定工藝規(guī)程、制定分析鑒定方法，再進行中試放大，全面考察工藝是否成熟，是否穩(wěn)定等中試放大，全面考察工藝是否成熟，是否穩(wěn)定等過程。過程。問題：問題：1、標準化方法？、標準化方法？ 2、如何發(fā)現或研制新藥？、如何發(fā)現或研制新藥？概概 述述1. 基本制藥技術和方法基本制藥技術和方法種類種類：質粒、噬菌體和動植物病毒。質粒、噬菌體和動植物病毒。1）提取法）提取法(Extraction)2）發(fā)酵法（）發(fā)酵法（ Zymotechni

3、cs）3）化學合成（）化學合成（Chemical synthesize）4）組織培養(yǎng)法（）組織培養(yǎng)法（Tissue culture）5）現代生物技術）現代生物技術(Modern Biotechnics): Gene engineering, Enzyme engineering, Cell engineering , protein Engineering,1）原料的選擇和預處理）原料的選擇和預處理2）原料的粉碎）原料的粉碎3）提?。簭脑现薪浫軇┓蛛x有效成分，制）提?。簭脑现薪浫軇┓蛛x有效成分，制成粗品的工過程。成粗品的工過程。4）純化：粗制品經鹽析、有機溶劑沉淀、吸）純化：粗制品經鹽析、

4、有機溶劑沉淀、吸附、層析、透析、超離心、膜分離、結晶等步附、層析、透析、超離心、膜分離、結晶等步驟進行精制的工藝過程。驟進行精制的工藝過程。5）濃縮、干燥及保存）濃縮、干燥及保存6）制劑：原料藥（精制品）經精細加工制成片）制劑：原料藥（精制品）經精細加工制成片劑、針劑、凍干劑、粉劑等供臨床應用的各種劑、針劑、凍干劑、粉劑等供臨床應用的各種劑型。劑型。Raw Material Selecting and Pretreatment1、原料選擇的基本準則、原料選擇的基本準則 1）在大量的信息資料和在大量的信息資料和實踐經驗的基礎上，選擇目標原料。實踐經驗的基礎上，選擇目標原料。2）選擇有效成選擇有效

5、成分含量高的新鮮材料；分含量高的新鮮材料；3）來源豐富易得；來源豐富易得；4）制造工制造工藝簡單易行；藝簡單易行；5）成本比較低；成本比較低；6）原料的采集不破壞原料的采集不破壞生態(tài)環(huán)境生態(tài)環(huán)境, 選擇對環(huán)境友好的原材料資，防止生物入選擇對環(huán)境友好的原材料資，防止生物入侵。侵。2、預處理方法、預處理方法 1）動物組織先要剔除結締組織、脂肪組織等非活性動物組織先要剔除結締組織、脂肪組織等非活性部分；植物種子去殼除脂；微生物要進行菌體與發(fā)部分；植物種子去殼除脂；微生物要進行菌體與發(fā)酵液分離等基本操作。便于貯存和運輸。酵液分離等基本操作。便于貯存和運輸。 2）冷凍法預處理：有些材料要冷凍保存或低溫保

6、存，冷凍法預處理：有些材料要冷凍保存或低溫保存，以便抑制微生物和酶的作用。以便抑制微生物和酶的作用。 3）有機溶劑除去部分水分：用丙酮或乙醇進行脫水有機溶劑除去部分水分：用丙酮或乙醇進行脫水和脫脂，有利于貯存。和脫脂，有利于貯存。Comminution of Raw Materialu原料的粉碎原料的粉碎：在提取前先將大塊的原料粉碎或絞碎在提取前先將大塊的原料粉碎或絞碎成適度的粒度，或將細胞破碎，使胞內活性物質充成適度的粒度，或將細胞破碎，使胞內活性物質充分釋放到溶液中，有利于提取或吸附。分釋放到溶液中，有利于提取或吸附。微生物：常用自溶、冷熱交替、加砂研磨、微生物：常用自溶、冷熱交替、加砂研

7、磨、超聲、加壓等處理方法。超聲、加壓等處理方法。動物臟器組織：常用絞肉機機械法粉碎；動物臟器組織：常用絞肉機機械法粉碎；植物肉質組織：常用磨碎法；植物肉質組織：常用磨碎法； 1. 1. 機械法：機械法：組織搗碎機、勻漿器、研缽、球磨機、組織搗碎機、勻漿器、研缽、球磨機、萬能粉碎機、絞肉機、擊碎機、刨片機。萬能粉碎機、絞肉機、擊碎機、刨片機。動物組織多在冰凍狀態(tài)絞碎、溶漿。動物組織多在冰凍狀態(tài)絞碎、溶漿。u冷熱交替法：冷熱交替法：將材料投入沸水中，在將材料投入沸水中，在90左右維持左右維持數分鐘，立即置于冰浴中使之迅速冷卻，絕大部分數分鐘，立即置于冰浴中使之迅速冷卻，絕大部分細胞被破壞。此法多用

8、于細菌或病毒中提取蛋白和細胞被破壞。此法多用于細菌或病毒中提取蛋白和核酸。核酸。u反復凍融法反復凍融法：把待破碎的樣品冷至把待破碎的樣品冷至-20-15 ，使，使之凝固，然后緩慢的溶解，如此反復操作，大部分之凝固，然后緩慢的溶解，如此反復操作，大部分動物性細胞及細胞內的顆?？梢云扑?。動物性細胞及細胞內的顆?？梢云扑椤超聲波處理法超聲波處理法：多用于微生物材料，處理的效果與多用于微生物材料，處理的效果與樣品濃度、使用頻率有關。用大腸桿菌制備各種酶樣品濃度、使用頻率有關。用大腸桿菌制備各種酶時，常用時，常用50100mg/L菌體濃度，在菌體濃度，在110KC頻率下頻率下處理處理1015min。操

9、作時注意避免溶液中氣泡的存。操作時注意避免溶液中氣泡的存在。在。u加壓破碎法：加壓破碎法：加氣壓或水壓，達加氣壓或水壓，達0.5934.32 MPa (210350kgf/cm2)的壓力時，的壓力時， 可使可使90%以上細胞被以上細胞被壓碎。多用于微生物酶制劑的工業(yè)制備。壓碎。多用于微生物酶制劑的工業(yè)制備。A.A.自溶法自溶法 將新鮮的生物材料存放在一定的pH和適當溫度下,利用組織細胞中自身的酶系將細胞破壞,使細胞內含物釋放出來的方法。自溶的溫度,動物材料在0-4,微生物在室溫下。自溶時,需加少量的防腐劑,甲苯、氯仿,以防止外界細菌的污染。由于自溶時間較長,不易控制,故制造具有活性的核酸和蛋白

10、質時比較少用。C.C.表面活性劑處理法表面活性劑處理法 表面活性劑的分子中,兼有親脂性和親水性基團,能降低水的界面張力,具有乳化、分散、增溶作用。B.B.溶菌酶處理法溶菌酶處理法 溶菌酶是專一地破壞細菌細胞壁的酶。多用于微生物,對蝸牛酶、纖維酶及植物細胞也適用。如用噬菌體感染大腸桿菌細胞制造DNA時,采用pH8.0的0.1mol/L Tris-0.01mol/LEDTA制成2億/ml的細胞懸液,然后加入100g1mg的溶菌酶,在37C保溫10min,細菌胞壁即被破壞。u常用有:SDS、氯化十二烷基吡啶、去氧膽酸鈉。1 1、提取條件的選擇提取條件的選擇 1）溶劑:常用水/稀鹽/稀酸/稀堿,有機溶

11、劑如乙醇/丙酮/氯仿/四氯化碳/丁醇等。丁醇提取的pH、溫度范圍較廣(pH3-6, 20-40)。適用于動植物和微生物原料。 2）pH:與溶解度和穩(wěn)定性有很大關系,一般選擇在pI的兩側 3）溫度:一般在5 以下,但對溫度耐受力較大的藥物,可適當的提高溫度,使雜蛋白變性分離,有利于提取和純化。如胃蛋白酶/酵母醇脫氫酶及多肽激素類,選擇37-50 提取,效果較好。u提?。禾崛。阂卜Q抽提、萃取,就是利用一種溶劑對物質的不同溶解度,從化合物中分離出一種或幾種組分的過程。分為固體處理（液固萃?。┖鸵后w處理（液液萃?。? 2、影響提取的因素影響提取的因素 1）被提取物質溶解度的大小,一般極性對極性；非極

12、性對非極性；酸對堿；堿對酸；高溫；遠離等電點。2）擴散作用的影響,擴散方程式G=DF*C/X*t3）分配作用的影響,分配定律(C1/C2)恒溫、恒壓=K 利用不同的蛋白質在高濃度鹽溶液中,溶解度不同程度的降低來進行分離純化。在低鹽濃度下,溶解度隨著鹽濃度升高而增加,稱鹽溶作用；當鹽濃度不斷升高時,不同蛋白質的溶解度又以不同程度下降并先后析出沉淀,稱鹽析作用。u優(yōu)點：設備和條件要求低,安全應用范圍廣泛。在高鹽情況下蛋白質不易發(fā)生變化,一般在室溫下操作。缺點：分級分離能力不高。硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉等等u 鹽析時應注意的幾個問題：1）鹽飽和度：由于蛋白質的結構

13、和性質不同,鹽析要求的飽和度也不同。要按工藝要求,正確計算飽和度。2）pH 值的選擇:蛋白質在pI時的溶解度最小。因此,進行鹽析時的pH,要選擇在被分離蛋白質的pI 附近。3）蛋白質濃度：在相同條件下,蛋白質濃度越大越易沉淀,使用鹽的飽和度極限也愈低。蛋白質濃度愈高,其他蛋白質共沉作用也愈強,這是不希望的。選擇適當的蛋白質濃度,可避免共沉的干擾。4）溫度：一般在室溫下進行,濃鹽對蛋白質有保護作用。但對溫度敏感的,要在低溫下進行。常在0-4 范圍內迅速操作。如尿激酶。5）鹽析沉淀物的脫鹽：鹽析的沉淀分離后,經脫鹽才能獲得純品。最常用的脫鹽方法是透析,時間一般較長,應常換透析液,注意防止污辱。 利

14、用不同蛋白質在不同濃度的有機溶劑中的溶解度差異而分離目的蛋白質的方法。蛋白質的沉淀與溶解,與溶劑的介電常數有關。降低溶液的介電常數,使其溶解度變小.同時,還破壞蛋白質的水化膜而使蛋白質沉淀析出。 幾種溶劑的介電常數幾種溶劑的介電常數溶劑名稱溶劑名稱 20 時的介時的介電常數電常數溶劑名稱溶劑名稱20 時的時的介電常數介電常數乙醚乙醚4.33甲醇甲醇33丙酮丙酮21.4水水80乙醇乙醇242.5mol/L甘氨酸水溶液甘氨酸水溶液 137介電常數與靜電力的關系：介電常數與靜電力的關系： F=Q1Q2/Kr2。式中：。式中： K介電介電常數。指帶相反電荷的微粒之間的靜電引力。常數。指帶相反電荷的微粒

15、之間的靜電引力。F相距為相距為r的的2個帶電量分別為個帶電量分別為Q1、Q2點電荷相互作用的靜電引力。點電荷相互作用的靜電引力。 經驗：如30-40%乙醇沉淀的物質,改用丙酮時,其體積分數可減少10%左右。即可用2030%的丙酮;而70-80%乙醇沉淀的物質,可用5060%的丙酮即可。 注:水有較高的介電常數,具有很好的溶劑性能,是一種廣譜溶劑。有機溶劑法比鹽析法分辨力強,沉淀也好過濾,易干燥,但對有些生物活性物質能引起失活和變性。應用時還要注意揮發(fā)和火災等。有機沉淀法應注意的問題有機沉淀法應注意的問題（1）控制工藝過程的溫度:整個操作過程應在低溫下進行,而且最好是同一溫度。（2）防止溶劑局部

16、濃度過高:加入有機溶劑時攪拌要均勻,速度要適當,避免局部濃度過高,引起沉淀物的破壞、變性或失活。（3）及時處理沉淀物:沉淀物經過濾或離心后,要立即用水或緩沖液溶解,降低有機溶劑的濃度。（4）pH的選擇：在待沉淀蛋白質的pI附近。（5）有機溶劑是酶和蛋白質的變性因素,尤其是對敏感酶類。 利用蛋白質在等電點時的溶解度最低,而各種蛋白質又具有不同的等電點的特性進行分離的工藝過程。由于各種蛋白質在等電點時,仍有一定的溶解度而沉淀不完全,多數蛋白質的等電點又都十分接近,所以單獨使用效果不理想,分辨力差,多用于提取后除雜蛋白。實際生產中常與有機溶劑沉淀法、鹽析法聯合使用。 膜分離技術包括超濾、反滲透析、電

17、滲析、微孔過濾、氣體滲析和超精密過濾。根據溶質分子和懸浮粒子是否通過多孔膜來進行篩分。在液壓的驅動下,能通過超濾膜的分離粒子的范圍,一般在0.0010.01m。n超濾即利用一種特制的膜對溶液中的各種溶質分子進行選擇性過濾。 優(yōu)點：成本低、操作方便、條件溫和、能較好地保持藥物活性、回收率高。適用于酶和蛋白質藥物的分離、濃縮、脫鹽、提純、除菌、除病毒和熱原。以高分子透過性薄膜為分離介質,在超過溶液滲透壓力的情況下,使溶液中的溶劑透過薄膜,同時使溶質和不溶物阻截在膜前。這一過程類似于滲透,但方向相反,即溶劑從高濃度一側傳遞到濃度低的一側，故稱反滲透。 特點：能耗少，體積小，適應大規(guī)模生產。由高分子材

18、料制成的薄膜過濾介質，可以過濾一般介質不能截留的細菌和微粒。膜的孔徑在0.2-10 m。n 以聚乙烯醇為主體的中空多孔濾膜，分級性能在超濾膜與微孔濾膜之間。為0.010.2 m。用于水的精制、循環(huán)水的凈化、除懸浮固體粒子以及糖液、酶液的精制。5 5、離子交換層析、離子交換層析 采用不溶性高分子化合物作為離子交換劑,分離純化各種生化物質。離子交換樹脂在水中能溶脹,溶脹后,其分子中的極性基團（活性基團）,具有可擴散的離子,能與溶液中的離子起交換作用;非極性基團作為樹脂的骨架,使樹脂不溶于水并具有網狀結構,為離子交換的進行及溶液和樹脂的分離創(chuàng)造了條件。離子交換層析包括吸附、吸收、穿透、擴散、離子交換

19、、離子親和力等物理化學過程。(1)強酸性陽離子交換樹脂：功能團為磺酸基，pH一般沒有限制。(2)弱酸性陽離子交換樹脂：功能團為羧基、酚基。在酸性溶液中不發(fā)生交換，pH愈大交換能力愈強。(3)強堿性陰離子交換樹脂：功能團為三甲基季胺基團。pH沒有限制。(4)弱酸性陰離子交換樹脂：功能團為伯胺基、仲胺基、叔胺基。pH愈低交換能力愈大。（1）樹脂顆粒的大?。侯w粒小，表面積大，能促進內部和外部擴散。（2）攪拌和流速：加快攪拌速度或加大液體流速，都能減少樹脂外液膜的厚度，從而使液相擴散速度增加。（3）離子濃度：交換速度隨離子濃度的上升而增加，達到一定濃度后交換速度不在升高。（4）離子的水化半徑:水化半徑

20、小的易被吸附。（5）樹脂酸堿性的強弱和溶液的pH。（6）交聯度大小:交聯度愈小,樹脂愈易膨脹,交換速度愈快。但交聯度小的樹脂選擇性較差。（7）有機溶劑的影響:當有有機溶劑存在時,會降低樹脂對有機離子的選擇性,而容易吸附無機離子。6 6、凝膠層析、凝膠層析 指化合物隨流動相流經裝有凝膠的固定相的層析柱時，因其各種物質分子大小不同而被分離的技術。又稱凝膠過濾、凝膠滲透過濾、分子篩過濾、阻滯擴散層析、排阻層析。1)優(yōu)缺點 缺點:分離速度慢。優(yōu)點:設備簡單,操作方便,分離效果好,回收率高,分離條件緩和,不使活性物質失活變性,凝膠可重復使用,無需再生處理。廣泛用于分離氨基酸、多肽、蛋白質、酶及多糖等藥物

21、。2)幾種常用的凝膠：基本骨架是16糖苷鍵。由葡聚糖和甘油以醚橋形式交聯而成的網狀結構。最著名的商品為Sephadex葡聚糖凝膠,珠狀顆粒物,化學性質穩(wěn)定,不溶于水/弱酸/堿和鹽溶液。低溫時,在0.1mol/L 鹽酸中保持1-2h不改變性質;室溫時,在0.01mol/L 鹽酸中放置半年也不改變;在0.25mol/L的氫氧化鈉中, 60兩個月沒有發(fā)改變?？稍?20加熱30min滅菌而不破壞,但高于120即變黃。濕狀貯存易發(fā)霉,若長期不用,需加防腐劑。（由碳碳骨架構成。完全為惰性。穩(wěn)定性比葡聚糖凝膠好,洗脫時不會有凝膠物質下來。缺點：不耐酸。遇酸時酰胺鍵會水解為羧基,使凝膠帶有一定的離子交換基團。

22、:天然凝膠,不是共價交聯,是以氫鍵交聯?？障抖纫云跫?zhí)堑臐舛葋砀淖?化學穩(wěn)定性不如葡聚糖凝膠。沒有干凝膠，必須在溶脹狀態(tài)保存,遇脫水劑、冷凍和一些有機溶劑即破壞,丙酮和乙醇對它無影響。在pH4.5-9,溫度0-40穩(wěn)定。對硼酸有吸附,不能用硼酸緩沖液。他能分離及萬到幾千萬相對分子質量的物質,彌補了葡聚糖和聚丙烯酰胺凝膠的不足。瑞典商品名Sepharose,美國稱生物凝膠A（Bio-Gel-A）,英國稱Sagavac。常用的為聚甲基丙烯酸酯（Polymethacrylate）凝膠、聚苯乙烯凝膠（如Styrogel,Bio-Beads-S）生物活性物質都有親和作用,如酶與底物、激素與受體、核酸的互

23、補鏈間,多糖與蛋白質復合體。n親和層析是利用生物大分子的特異親和力而設計的層析技術?？赡娼Y合的特異性物質稱為配基,與配基結合的層析介質稱為載體。n親和層析能從粗提液中,通過一次簡便處理,便可得到高純度的活性物質,既可分離一些生物材料中含量極微的物質,又能分離一些性質十分相似的物質。1)1)優(yōu)缺點優(yōu)缺點 優(yōu)點:設備要求不高,操作簡便,適用范圍廣,特異性強,分離速度快,效果好,條件溫和。缺點：通用性較差,洗脫條件要求苛刻。自然界中數量最大的大分子生物材料,取材十分方便。但由于其結構緊密、均一性差,不利于大分子的滲入。活化后常帶有電荷,非特異性吸附較強,加上空間位阻等原因,其應用不如凝膠載體廣泛。目

24、前主要用于分離與核酸有關的物質。如用寡聚脫氧胸腺核苷酸纖維素作固定相分離細胞提取液中的mRNA. 市售商品有:無定型微纖維/微晶纖維素/珠狀纖維素。用于親和層析的主要為交聯珠狀凝膠。瓊脂糖的質量濃度為20g/L(2%)、40g/L(4%)、60g/L(6%)幾種，相應的商品稱為Sepharose 2B、4B、6B(Pharmacia)和UltrogelsA-2,A-4,A-6)。這類載體能使吸附物質保持活性,能迅速活化并接上各種功能基團,結構疏松孔徑大,流速快。與瓊脂糖凝膠相比孔徑太小,特別是經配基偶聯后,凝膠膨脹度會進一步邊小,所以應用受到限制。：碳碳骨架,有丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成

25、,具有網狀三維空間結構。商品名為Biogel P。避免接觸強氧化劑,配基偶聯后會使它的網格縮小,在一定程度上限制了它的應用?；瘜W和物理穩(wěn)定性好,機械強度高,不但能抵御酶及微生物的作用,還能耐受高溫滅菌和較劇烈的反應條件。 缺點:親水性不強,對蛋白質尤其是堿性蛋白質有非特異性吸附,而且可供連接的化學活性基團也少。 改良方法:為了克服其缺點,市售Bio-Glass的商品都已事先連接了氨烷基（烷基胺）。A)用葡聚糖包被玻璃珠,則可改善其親水性,并增加化學活性基團。B)用抗原涂布的玻璃珠已成功地分離了免疫淋巴細胞，在DNA連接的玻璃珠上純化了大腸桿菌的DNA和RNA聚合酶。 由聚丙烯酰胺和瓊脂糖混合組

26、成的載體,商品名為Ultrogels ACA。它的特點是載體上既有羥基又有酰胺基,并且都能與配基單獨作用。但不能接觸強堿,以免酰胺水解,使用溫度不超過40C。在丙烯酰胺和瓊脂糖的混合膠中加入7%的四氧化三鐵,則可制得一種稱為磁性膠（Magnogels ACA44）的載體。 當懸浮液中含有不均勻粒子時,依靠磁性能將載體與其他粒子分離。磁性膠載體常用于酶的免疫測定、熒光免疫測定、放射免疫測定、免疫吸收劑和細胞分離等的微量測定和制備。（1）配基濃度；（2）空間障礙；（3）配基與載體的結合位點；（4）載體的孔徑；（5）微環(huán)境（化學因素）。 濃縮：濃縮：低濃度溶液通過除去溶劑變?yōu)楦邼舛热芤旱倪^程。常在提

27、取后和結晶前進行,有時也貫穿與整個制藥過程。蒸發(fā)裝置的設計原理蒸發(fā)裝置的設計原理: :加熱/擴大液體表面積/低壓。薄膜蒸發(fā)濃縮Film evaporation concentration,臥式噴淋降膜蒸發(fā)器/Rose蒸發(fā)器/板式蒸發(fā)器;減壓蒸發(fā)濃縮Decompression evaporation concentration 減壓抽真空(真空濃縮),適用不耐熱的藥物和制品。吸收濃縮(Absorbing concentration) 通過吸收劑直接吸收除去溶液中的溶劑分子使溶液濃縮的方法。吸收劑與溶液不起化學反應,對生化藥物不起吸附作用,易與溶液分開。吸附劑除去溶劑后可重復使用。常用的吸收劑：聚

28、乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、凝膠。凝膠可直接投入待濃縮的溶液中,溶劑和小分子被吸收到凝膠內,大分子留在溶液中,然后離心過濾。使用聚乙二醇時,先將溶液裝入半透膜的袋內,扎緊袋口,外加聚乙二醇覆蓋,袋內溶劑滲出即被聚乙二醇吸去。 結晶：結晶：利用某些藥物具有形成晶體的性質是目標藥物（溶質）呈晶態(tài)從溶液中析出的過程。 結晶的條件：結晶的條件：（1）純度purity：各種物質在溶液中均需達到一定的純度才能析出結晶。 蛋白質和酶，純度不低于50%。總趨勢是越純越易結晶，但已結晶的制品不表示達到了絕對的純化，只能說到了相當純的程度。有時純度不高，但加入有機溶劑和制成鹽，也能達到結晶。（2）濃度consi

29、deration 結晶液的濃度要較高,以利于分子間的碰撞聚合。但濃度過高,相應雜質和溶液黏度增大,反而不利于結晶,或生成純度較差的粉末結晶。（3）pH 選擇pH在pI附近,有利于晶體析出。（4）溫度temperature 通常在低溫條件進行,活性物質不易變性,又可避免細菌繁殖。（5）時間Time 結晶的生成和生長需要時間。但生物藥物要求在幾小時內完成,時間不宜過長。（6）晶種Crystal seed 不易結晶的藥物常加晶種。 干燥：干燥：是從濕的固體生物藥物中,除去水分或溶劑而獲得相對或絕對干燥制品的工藝過程。它也是一種蒸發(fā),但不同于濃縮。通常包括原料藥的干燥和制成的臨床制劑的干燥。（1 1）

30、常壓干燥）常壓干燥Normal press desiccationNormal press desiccation：通風與加熱結合。成本低干燥量大。但時間長，易污染。（2 2）減壓干燥）減壓干燥Decompression desiccationDecompression desiccation：利用專用設備減壓加速，使溶劑迅速蒸發(fā)。（4 4）冷凍干燥）冷凍干燥 Freezing desiccationFreezing desiccation：在低溫(-60 -10)及高真空6.67-40Pa(0.05-0.3mmHg)下,將物料與溶液中的水分直接升華的干燥方法。適用于高度熱敏的生物藥物。制劑應

31、具有多孔性、疏松、易溶的特點,一般含水量在1%-3%。設備投資及維護費用高,生產能力不大。 優(yōu)點:快速高效,可在無菌條件下操作.應用廣泛。 缺點:熱利用率不高,設備費用投資大。減壓干燥時間短，溫度低。制藥常用方法。 （3 3）噴霧干燥）噴霧干燥Spray desiccationSpray desiccation: :將液體通過噴射裝置噴成霧滴后，在一定流速的熱氣流中,迅速蒸發(fā)干燥的方法。從理論推算:每升液體,如果噴成10m直徑的霧滴,約有1.91*1012多個,表面積有600m2。實驗表明:把含水量為80%的1L溶液,噴成直徑約10-60 m霧滴,當與熱空氣接觸時,僅3-5s可使霧滴水分氣化而

32、得到干燥產品。 改進的干燥設備;環(huán)型噴射干燥器;振動流動干燥器;渦流干燥器。n 滅菌：指殺滅或除去一切微生物的操作技術。1）干熱空氣滅菌：通常在烘箱里利用熱空氣殺滅微生物,在100,1h可殺死繁殖的細菌。某些細菌在一定情況下可以變成芽孢,有較強的耐熱力,一般需160-170滅菌1h以上或140滅菌3h以上。 滅菌的時間應自全部進行滅菌的物品達到滅菌溫度時算起。待滅菌物品的溫度常落后于烘箱室的溫度，特別是導熱性能差或裝量大的待滅菌物品。要確保滅菌完全,應測定溫度延后時間,將延后的時間考慮到規(guī)定的滅菌時間內。 濕熱滅菌濕熱滅菌：常壓滅菌,即在常壓下用100 流通蒸汽或在水內煮沸來殺滅細菌。 減壓滅

33、菌：在熱壓滅菌器中，用超過101.325kPa的飽和蒸汽殺滅細菌。n 熱壓滅菌所需溫度、相對壓力和時間： 115.5 1.7 kgf/cm2 (表壓0.7 kgf/cm2 ）30min 121.5 2.0 kgf/cm2 (表壓1.0 kgf/cm2 ）20min 126.5 2.4 kgf/cm2 (表壓1.4 kgf/cm2 ）15min 紫外線滅紫外線滅菌 主要用于空氣和物體的表面滅菌。一般紫外燈高度距操作臺面不超過1.5m，被滅菌物距燈與臺面的垂直點中心不超過1.5 m。用于室內空氣滅菌時，約6-15m3的空間裝一盞紫外燈。人體若照射紫外線過久會產生眼結膜炎、紅斑和皮膚變紅等。故一般均

34、在操作前照射1-2h。若操作時必須照射時，對操作人員的眼睛和皮膚要加以防護。 過濾滅菌過濾滅菌 通過適宜的濾器除去藥液中所含的細菌.常用有硅藻土濾柱、素瓷濾柱、垂熔玻璃濾器、石棉板呂器和微孔濾膜（纖維素酯膜、聚碳酸酯膜）。濾器孔徑約為0.2m時,滅菌結果才可靠。適用于不耐熱的藥物溶液的滅菌、除去活菌和死菌。滅菌后的藥液進行分裝時,要特別注意防止染菌,應進行無菌操作。 化學滅菌化學滅菌 用化學藥品抑制或殺滅細菌的方法。常用其氣體或蒸汽殺滅細菌的藥品有甲醛、丙二醇、乳酸等,適用于無菌室的空氣滅菌。 生物制藥是利用一定的生物制備技術從生物材料中獲取特殊的生物活性物質的過程。需注意幾個問題：1.生物材

35、料的組成成分復雜,各種化合物的形狀/大小/相對分子質量和理化性質都各不相同,有些還屬于未知.且這些化合物在分離時仍在不斷的代謝之中。 2.有些化合物含量很低或極微。制備時,原材料用量很大，得到產品很少。 3.生物活性物質,一旦離開了生物體內環(huán)境,很易變性。 4.分離制備的過程幾乎在溶液中進行,各種溫度、PH、離子強度等參數,對溶液中各種組成的綜合影響,常常無法固定,有些實驗或工藝設計的合理性不強,常帶有很大的經驗成分。因此,要建立重復性好的成熟工藝,對生物材料、各種試劑及其輔料都要加以嚴格規(guī)定。 5.生物藥物“均一性”證明與化學藥物的“純度”是不同的。結構與功能（活性）的關系？無標記的蛋白質無

36、標記的蛋白質- -純化程序純化程序組氨酸標記的蛋白質組氨酸標記的蛋白質純化程序純化程序第七章第七章 生物制藥產業(yè)發(fā)展趨生物制藥產業(yè)發(fā)展趨勢與希望勢與希望 生物制藥產業(yè)作為21世紀最具希望和發(fā)展?jié)摿Φ男屡d高技術產業(yè)，不僅對國民經濟的發(fā)展產生巨大的拉動作用，并且為人類的疾病防治帶來更多、更安全、更有效、甚至難以替代的手段?！罢湎完P注健康”是人類永恒的主題，因此生物制藥產業(yè)將永遠是“朝陽產業(yè)”。 一一. .哺乳動物細胞表達的生物技術藥物所占比重越哺乳動物細胞表達的生物技術藥物所占比重越來越大來越大 生物制藥的發(fā)展初期都是表達一些分子量較小、結構簡單的蛋白質,如胰島素、干擾素或集落刺激因子,氨基

37、酸殘基都在200aa以下,一般只有12對二硫鍵甚至沒有二硫鍵,因此用大腸桿菌表達既經濟有簡便。生物制藥的發(fā)展趨勢是從細胞因子等激動劑為主的產品,轉變?yōu)橐赞卓棺饔脼橹鞯男律锛夹g藥物,如天然IL-1拮抗劑、中和作用的單抗如Remicade、TNF-拮抗劑受體-Fc融合蛋白Enbrel,-1-蛋白水解酶抑制劑、抑制HIV-1與CD4+細胞融合的Pro-542等。 越來越多的分子量大、結構復雜的功能性蛋白得到開發(fā),如抗體和酶,都是分子量在50200kDa的糖蛋白。 由于這些蛋白結構復雜,二硫鍵多,并且翻譯后的修飾如糖基化對蛋白活性的影響很大,采用原核表達系統(tǒng)往往不能滿足蛋白表達的需要。采用哺乳動物細

38、胞表達既能保證重組蛋白質二硫鍵的正確配對和蛋白質折疊、又能保證蛋白質的糖基化,即用哺乳動物細胞表達的重組蛋白與天然蛋白在結構和功能上都高度一致。 從2000年以后FDA批準的生物技術藥物來看,哺乳動物細胞表達系統(tǒng)更受到FDA和各大制藥公司的重視。我國生物制藥與歐美國家的主要差距就是哺乳動物細胞表達的產品極少。 從銷售情況看，哺乳動物細胞表達的產品也已占據主要地位，年銷售額超過20億美元的6個生物技術藥物均是哺乳動物細胞表達的產品，而銷售額位于前10位的生物技術藥物，有8個產品為哺乳動物細胞表達的產品。 隨著近年來越來越多的哺乳動物細胞表達的生物技術藥物獲準上市，到2007年預計動物細胞表達的產

39、品市場份額將占70%75%。在中國的生物制藥產業(yè)中，已批準上市的動物細胞表達產品只有促紅細胞生成素 (EPO)和乙肝疫苗，盡管這兩種產品的使用劑量都在g級水平，但是這兩種產品的生產能力都很小，動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術已成為生物技術藥物生產最關鍵和最具挑戰(zhàn)性的技術。 由于抗體分子與靶標抗原具有高度特異的親和力，抗體類藥物在治療過程中表現出專一性強、毒副作用小等特點，成為各大制藥公司研究開發(fā)的熱點領域。鼠源單抗在臨床試驗中療效很不理想，存在以下缺點：缺點：（1）半壽期很短，只有3040小時，遠小于完整人源抗體的半壽期(1021天)，在人體中易被清除。（2）人體免疫細胞Fc()受體結合鼠IgG的Fc段

40、的能力很差,不能有效引發(fā)抗體依賴性介導的細胞毒(ADCC)效應和補體依賴性細胞毒效應(CDC),即不能發(fā)揮抗體的生物學功能。（3）反復使用鼠源單抗會產生人抗鼠抗體(HAMA),HAMA反應可以有效快速地破壞這種鼠源單抗,并且HAMA反應可能會引發(fā)嚴重的過敏反應。 鼠源抗體人源化技術的出現,大大促進了治療性抗體藥物的開發(fā),人源化技術包括嵌合抗體(chimeric antibody,60%70%人源化)制備技術和人源化抗體(90%95%人源化)制備技術,用這些技術制備的抗體克服了鼠源抗體的缺點,使得治療性抗體成為目前最大的一類生物技術藥物。 世紀90年代中期,FDA批準了多種抗體類藥物,如嵌合抗體

41、Remicade、Rituxan、ReoPro,人源化抗體如Herceptin、Synagis等。 應用噬菌體顯示人抗體庫技術和轉基因小鼠Xeno- Mouse技術可以制備人源抗體,這些技術又為治療性抗體藥物的研發(fā)提供了新技術方法。 2002年FDA批準的用于類風濕關節(jié)炎類風濕關節(jié)炎治療的單抗HUMIRA,就是使用噬菌體顯示技術構建的人源抗體,標志著治療性抗體的研究與開發(fā)又上了一個新臺階。 2004年,FDA已批準了17種治療性抗體,2種受體-Fc融合蛋白(抗體樣分子),這些藥物在治療腫瘤、類風濕關節(jié)炎和Crohns病(克羅恩氏病,節(jié)段性回腸炎)、抗器官移植排斥,防治病毒感染,抗血小板凝聚等方

42、面表現出非常理想的療效。目前抗體類藥物的銷售額已占整個生物技術藥物市場的1/5,而到2008年,抗體類藥物的年銷售額將達到200億美元,占生物技術藥物市場的1/3。盡管抗體類藥物的發(fā)展如火如荼,但我國抗體藥物的研發(fā)卻舉步為艱,其根本原因是我國上游構建和下游生產,尤其是動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術的落后。三、分子量大、結構復雜的蛋白質的生產三、分子量大、結構復雜的蛋白質的生產 許多遺傳性疾病如血友病、溶酶體貯積病、肺囊性纖維化等都是難于治愈危及生命的疾病,其病因都是基因突變等導致體內缺乏某種生理活動（代謝過程）所需要的酶。 酶都是分子量大、結構非常復雜的蛋白質,在基因工程時代到來之前,有的只能通過從人

43、體血液或組織中提取才能獲得,不僅來源有限,而且易傳播傳染性疾病,如治療血友病的凝血因子。還有一些非遺傳性疾病,由于某些蛋白的分泌不足導致疾病,如不孕癥?；蛘咛岣吣承┑鞍祝福┑臐舛瓤梢跃徑饣蛑斡承┘膊?如治療心梗的TNK-tPA、治療膿毒癥的蛋白C或治療高尿酸癥的Rasburicase尿酸酶。隨著真核表達系統(tǒng)的日臻成熟,以及大規(guī)模動物細胞培養(yǎng)技術的進步,FDA近年來批準了多種高分子量的復雜蛋白藥物。 能挽救生命并且沒有其它替代藥物的生物技術藥物有著極好的市場表現。例如,全球戈謝病病人只有50006000,而用Cerezyme治療的病例達到3800,每1例病人1年的藥費需要170000美元,1

44、998年銷售額達到4.7億美元,2001年為5.7億美元,位列當年生物技術銷售額的第10位,2007年可達9.48億美元。又如2003年4月批準上市的治療法布萊氏病的Fabrazyme,當年的銷售額便達到0.57億美元,到2007年的銷售額可達3.97億美元。而凝血因子 NovoSeven和促濾泡素Gonal-F的年銷售額都超過4億美元。表3所列產品絕大多數是哺乳動物細胞表達的產品,除了TNK-tPA正在申請臨床外,表中所列產品我國目前還不具備開發(fā)能力,更遑論生產能力。四、四、 PEG化以改善產品性能化以改善產品性能 對原產品的化學修飾，尤其是對原產品的化學修飾，尤其是PEG化以改善產品的化以

45、改善產品的性能，是近年來生物技術藥物發(fā)展的新趨勢。性能，是近年來生物技術藥物發(fā)展的新趨勢。 最近幾年FDA幾乎沒有批準一個新的細胞因子類藥物,但是卻批準了幾個PEG化的細胞因子產品(見表4)uPEG化指將聚乙二醇(PEG)分子通過化學交聯共價結合到多肽或蛋白質藥物上,有以下優(yōu)點:1）極大延長了藥物半壽期;2）降低了某些藥物的免疫原性;3）增強藥物活性;4）降低藥物毒性;5）血漿的藥物濃度波動小,可提高療效;6）可減少給藥次數;7）可改變藥物作用機制。l90年代批準的PEG-L-天冬酰胺酶和PEG化酰苷脫氨酶都不是基因重組蛋白,而基因重組的干擾素和G-CSF,其PEG化的產品由于其更好的療效,在

46、市場中都比原產品表現更好。 由于PEG化干擾素的血漿濃度波動小,其抗病毒能力遠好于未PEG化干擾素,如治療丙肝的療效從24%28%提高至50%68%,因此兩種PEG化的干擾素-PEGASYS和VIRAFERON PEG的銷售情況遠好于原代產品,并有逐漸替代原產品的趨勢。 利用基因工程技術,對已有蛋白質藥物進行改造,以獲得性能更好的產品,也是今些年生物技術藥物發(fā)展的趨勢,這明顯表現在胰島素、EPO和t-PA突變體藥物研究與開發(fā)方面。 Amgen公司利用定點突變技術開發(fā)的第二代EPO產品Aranesp,與第一代EPO相比,N-糖鏈從3條增加至5條,分子量從30kDa增加到37kDa，其半壽期延長了

47、3倍,因而給藥方式從23次/周改為1次/周,雖然2001年9月才獲準上市,但該藥品的年銷售額已達到20億美元,排位第五。 一般速效、中效、長效和雙重胰島素都是通過劑型的改變以改變胰島素的吸收,其生物活性成分都是重組人胰島素。 如2002年10月歐洲共同體授權Novo Nordisk公司7個抗糖尿病藥物重組胰島素（rDNA）的更新換代產品:長效Insulatard、雙重作用Mintard、長效作用Montard、長效作用Protaphane、非常長效Ultratard、快速作用Velosulin、速效作用Actrapid等。 通過定點突變技術構建胰島素突變體如速效胰島素Humalog,Novol

48、og和長效胰島素Lantus則是改變胰島素分子結構以改變藥物吸收速度或藥代動力學，從而起到速效或長效的作用。 Humalog就是將胰島素B鏈的Pro28Lys29突變?yōu)長ys28Pro29,而Novolog則是將B鏈的Pro28突變?yōu)锳sp28。 胰島素突變體Humalog、Novolog在皮下注射后具有吸收快、起效快、作用時間短和餐后尖峰狀的生理學分泌相似的特點,用藥更靈活方便。 Lantus是將胰島素A鏈的Asn21突變?yōu)镚ly21,在B鏈末端增加了Arg31 Arg32兩個氨基酸,使其成為第一個真正長效藥物,恒定的藥代動力學（PK）和藥效動力學（PD）時間至少持續(xù)24h,和相對恒定基線胰

49、島素生理水平相似。 近25年來,一系列新技術的出現改變了藥品開發(fā)的狀況,帶來了前景和希望。這些技術包括基因工程、合理藥物設計、組合化學、有效篩分以及現在出現的基因組技術。 專家們認為,藥品研制的失敗率仍然居高不下,由此造成的損失占了研制成本的很大部分。研制過程早期的候選藥物約每5000種才有1種進入市場,進入臨床試驗的藥物每5種才有1種能進入市場。其余的藥物則被淘汰掉,因為有的不產生療效,有的則有毒性。n制藥公司通常在開始時要確定出研制目標,目標常常是人體中的一種被認為對某種疾病起作用的蛋白質。然后設計出或找到一種能夠依附于目標蛋白質的化合物,由此來改變疾病發(fā)展過程。弄清這種化合物在其它方面是

50、否合適,比如說是否可以做成藥丸。然后在動物身上做毒性試驗,在此之后方可在人身上做試驗。 1)利用蛋白質工程技術開發(fā)新產品; 2)采用新的高效表達系統(tǒng)，利用動物細胞，特別是整體動物大量表達基因工程醫(yī)藥產品; 3)將基因組研究成果轉化為生物技術新藥; 4)開發(fā)新劑型的生物技術藥物。 人類基因組測序工作完成，對人的健康與疾病起因有更深入的認識。盡管第一張人類基因組測序工作草圖尚未弄清所有人類基因的功能。但是這些基因產物（即活性蛋白質）被表達出來，將會有幾千種甚至更多具有特殊療效的蛋白藥物的誕生。因此，基因工程藥物具有很大的增長空間和發(fā)展前景。 1303004500200400600億美元199820

51、012006年全球生物技術藥品銷售額全球生物技術藥品銷售額增長情況增長情況18303000100200300億元199019972005年中國生物技術藥品市場情況中國生物技術藥品市場情況當前全球生物技術藥品分布當前全球生物技術藥品分布北美6 3 %其他5%歐洲2 5 %日本7 %現狀和前景現狀和前景 據據2002年資料顯示，年資料顯示，至今世界上已取得的生至今世界上已取得的生物技術研究成果中，物技術研究成果中，70%以上為醫(yī)藥工業(yè)生以上為醫(yī)藥工業(yè)生物技術產品。物技術產品。生物藥品名稱生物藥品名稱適應性適應性年銷售額年銷售額(億美元億美元)抗CD3MAb移植排斥0.80DNase囊性纖維變性1.

52、11EPO貧血16.50因子血友病2.50G-CSF嗜中性白細胞減少癥9.36葡萄糖腦苷酯酶Gaucher氏病2.15 GM-CSF骨髓移植0.41GPb/aMAb血管造形術中血凝塊1.30B型肝炎疫苗B型肝炎10.00人生長激素生長不良，腎功能不全4.50人胰島素糖尿糖7.00人白細胞介素-2腎癌0.40-干擾素癌癥，肝炎7.00-干擾素多發(fā)性硬化2.55-干擾素肉芽腫病0.04tPA心力衰竭/栓塞/中風3.00總計68.6216種生物技術藥物銷售情況種生物技術藥物銷售情況 我國已批準生產的生物技術藥物和疫苗我國已批準生產的生物技術藥物和疫苗 名稱名稱 作作 用用rhu IFN1b (外用)

53、 病毒性角膜炎rhu IFN1b 乙肝、丙肝rhu IFN2a 乙肝、丙肝、皰疹等rhu IFN2a (酵母) 乙肝、丙肝rhu IFN2b 乙肝、丙肝白血病等rhu IFN2a (栓劑) 婦科病rhu IFN2b (凝膠劑) 皰疹等rhu IFN 類風濕rhu EGF(外用) 燒傷、創(chuàng)傷EGF 衍生物 燒傷、創(chuàng)傷rhu IL2 癌癥輔助治療rhu IL2 125Ser 癌癥輔助治療上海華晨rhu GCSF 刺激產生白細胞rhu GMCSF 刺激產生白細胞、骨髓移植rhu EPO 產生紅細胞rhu GH 矮小病bFGF(外用) 創(chuàng)傷、燒傷RSK 溶血栓(心梗) 抗IL28 單 抗乳膏劑 銀屑病

54、人胰島素 糖尿病乙肝疫苗乙肝疫苗 預防乙肝預防乙肝痢疾疫苗 預防痢疾第二節(jié)第二節(jié) 新型生物藥物研制的理論和新型生物藥物研制的理論和方法方法新型生物藥物新型生物藥物是指利用是指利用生物體或生物過程生物體或生物過程產產生的生的結構新穎結構新穎的藥物。的藥物。結構新穎結構新穎是指與以前是指與以前藥物有著不同的化學結構，是藥物有著不同的化學結構，是種新的化學種新的化學實體實體(New chemical entity(New chemical entity，簡稱，簡稱NCE)NCE)。這。這類新型生物藥物國家認定為一類新藥。國際類新型生物藥物國家認定為一類新藥。國際上所說的新藥開發(fā)就是指開發(fā)上所說的新藥

55、開發(fā)就是指開發(fā)NCENCE藥物。根藥物。根據據NCENCE來源進行生物藥物分類。來源進行生物藥物分類。一類是一類是利用重組利用重組DNADNA技術技術，向大腸桿菌、酵，向大腸桿菌、酵母、動物、植物細胞中導入目的基因，母、動物、植物細胞中導入目的基因，構建構建重組細胞重組細胞，生產目的基因編碼的蛋白質類、，生產目的基因編碼的蛋白質類、多肽類藥物或疫苗，或將一些特殊基因及基多肽類藥物或疫苗，或將一些特殊基因及基因片段導入宿主細胞后使宿主細胞產生原來因片段導入宿主細胞后使宿主細胞產生原來不能產生的蛋白質，獲得新功能，或阻遏宿不能產生的蛋白質，獲得新功能，或阻遏宿主細胞基因的復制、轉錄、翻譯等，抑制其

56、主細胞基因的復制、轉錄、翻譯等，抑制其功能，甚至殺死宿主細胞，即功能，甚至殺死宿主細胞，即。另一類是另一類是利用微生物、動植物細胞或酶生產利用微生物、動植物細胞或酶生產的非上述藥品，通過的非上述藥品，通過篩選篩選可獲得這類新藥的可獲得這類新藥的NCENCE的的先異物先異物(Lead compound)(Lead compound)。這類藥物種。這類藥物種類繁多，包括傳統(tǒng)的利用發(fā)酵工程生產的藥類繁多，包括傳統(tǒng)的利用發(fā)酵工程生產的藥物和直接從動植物中提取的天然藥品等。物和直接從動植物中提取的天然藥品等。(1) (1) 確定研究計劃確定研究計劃 要綜合考慮醫(yī)療、市場、要綜合考慮醫(yī)療、市場、化學的評估

57、化學的評估, ,文獻狀況文獻狀況, ,專利的檢索專利的檢索, ,結構的選結構的選擇，合成的前景等因素。擇，合成的前景等因素。(2) (2) 準備化合物準備化合物 文獻研究文獻研究, ,合成或分離合成或分離, ,結構結構鑒定鑒定, ,標準化標準化, ,專利申請專利申請, ,對研究目標的復核等。對研究目標的復核等。以上兩個環(huán)節(jié)需占用以上兩個環(huán)節(jié)需占用l l2 2年的時間，需準備年的時間，需準備6000600080008000個化合物供篩選。個化合物供篩選。(3) (3) 藥理篩選藥理篩選。(4) (4) 化學試驗化學試驗 活性成分的分析?；钚猿煞值姆治?。(5) (5) 臨床前臨床前期期(Precl

58、inical I) (Preclinical I) 進一步藥進一步藥理研究包括毒性理研究包括毒性(2(2種動物種動物) )及活性成分的穩(wěn)及活性成分的穩(wěn)定性。定性。(6) (6) 臨床前臨床前期期(Preclinical ) (Preclinical ) 進一步藥進一步藥理研究包括亞急性毒性理研究包括亞急性毒性(2(2種動物種動物) )、畸胎學、畸胎學研究、藥物動力學、動物體內的吸收和排泄、研究、藥物動力學、動物體內的吸收和排泄、劑型的研究與開發(fā)、包裝與保存期的研究。劑型的研究與開發(fā)、包裝與保存期的研究。以上幾個環(huán)節(jié)占用以上幾個環(huán)節(jié)占用2 23 3年的時間，化合物分年的時間，化合物分別剩下大約別

59、剩下大約2020個以下或更少。個以下或更少。(10) (10) 注冊申請上市注冊申請上市 經政府藥政部門批準后經政府藥政部門批準后提供治療應用。這一過程需提供治療應用。這一過程需2 23 3年。年。(11) (11) 售后監(jiān)測售后監(jiān)測(Post(Postmarketing marketing surveillance) surveillance) 據情況進行藥理試驗、毒性據情況進行藥理試驗、毒性試驗、特殊試驗和藥物動力學試驗；對副作試驗、特殊試驗和藥物動力學試驗；對副作用的報告進行收集、評價和鑒別；對藥品生用的報告進行收集、評價和鑒別；對藥品生產進行質量控制，制劑的生產和包裝。產進行質量控制，

60、制劑的生產和包裝。一個新藥的問世要提供一個新藥的問世要提供6000600080008000個化學物個化學物質。經歷質。經歷9 91313年的時間，耗資約年的時間，耗資約2.32.3億美元。億美元。系統(tǒng)性從縱的方面看主要是若干個環(huán)節(jié)緊密系統(tǒng)性從縱的方面看主要是若干個環(huán)節(jié)緊密的銜接和重疊，橫的方向主要表現為多種學的銜接和重疊，橫的方向主要表現為多種學科相互之間的滲透性和協(xié)同性?？葡嗷ブg的滲透性和協(xié)同性。在整個新藥的研究和開發(fā)中，先導化合物的在整個新藥的研究和開發(fā)中，先導化合物的發(fā)現是決定以后研究與開發(fā)的首要因素，要發(fā)現是決定以后研究與開發(fā)的首要因素，要找到一個好的先導化合物，需要建立好的找到一個