湘A 號(hào)-號(hào)對(duì)免疫缺陷動(dòng)物免疫保護(hù)作用探究

1、湘A 1號(hào)2號(hào)對(duì)免疫缺陷動(dòng)物免疫保護(hù)作用探究 摘 要：目的：探討湘A 1號(hào)、2號(hào)對(duì)免疫缺陷動(dòng)物的免疫保護(hù)作用。方法：通過小鼠腹腔注射環(huán)孢菌素A建立免疫缺陷動(dòng)物模型，觀察湘A1號(hào)、2號(hào)對(duì)免疫缺陷動(dòng)物模型胸腺重量指數(shù)、肺重量指數(shù)、肝臟重量指數(shù)、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能以及胸腺、脾臟、肺和小腸組織的病理變化的影響。結(jié)果：與模型對(duì)照組比較，湘A1號(hào)的低、中、高劑量組及湘A2號(hào)中、高劑量組可顯著提高胸腺重量指數(shù)（P0.01或P0.05），湘A1號(hào)高劑量組、湘A2號(hào)中、高劑量組能顯著降低肺重量指數(shù)（P0.01），湘A1號(hào)和A2號(hào)的低、中、高劑量組均可顯著降低肝重量指數(shù)（P0.01或P0.05）；湘A1號(hào)、湘A

2、2號(hào)低、中、高劑量組能顯著提高腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率（P0.01），湘A1號(hào)中、高劑量及湘A2號(hào)低、中、高劑量組能顯著提高腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)（P0.01或P0.05）；湘A1號(hào)高劑量及湘A2號(hào)中劑量能明顯減輕胸腺組織萎縮、局部脂肪變性，肺泡壁增厚，小腸上皮脫落等病理變化。結(jié)論：湘A1號(hào)、2號(hào)對(duì)環(huán)孢菌素A所致的免疫缺陷動(dòng)物模型有一定的免疫保護(hù)作用。 關(guān)鍵詞：湘A1號(hào)；湘A2號(hào)；環(huán)孢菌素A；免疫 中圖分類號(hào)：R392文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1673-7717（2011）04-0828-04 收稿日期：2010-11-16 基金項(xiàng)目：湖南省科技廳科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（2010FJ2007）； 湖南

3、省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科研基金重大課題（6201） 作者簡介：朱惠斌（1968-）,女,湖南雙峰人,副主任技師,研究方向：微生物檢驗(yàn)及中醫(yī)藥防治感染性疾病的研究。 通訊作者：葛金文（1965-），男，湖南雙峰人，教授，博士研究生導(dǎo)師，博士，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)與臨床研究。 The Researches of Immune Protection Effects of Xiang A NO 1, Xiang A NO 2 on the Immunodeficiency Animal ZHU Hui-bin【sup】1【/sup】, LU Fang-guo【sup】2【/sup】, HUANG Shun

4、-ling【sup】3【/sup】, GUO Zi-hua【sup】3【/sup】,LIU Ji-yong【sup】2【/sup】,LI Ling【sup】2【/sup】,GE Jing-ren【sup】2【/sup】 （1.The First Affiliated Hospital of Hunan University of Traditional Chinese Medicine, Changsha,410007,Hunan,China 2.Hunan University of Traditional Chinese Medicine, Changsha 410208,Hunan,Ch

5、ina 3.Health Department of Hunan Province, Changsha 410008,Hunan,China） Abstract:Objective: To investigate the immune protection effect of Xiang A NO 1 and Xiang A NO 2 on the immunodeficiency animal. Methods: The immunodeficiency mice model is established by intraperitoneal injection of cyclosporin

6、e A . To observe the effects of Xiang A NO 1 and Xiang A NO 2 on thymus weight index, lung weight index, liver mass index, abdominal macrophage function as well as the pathological changes of the thymus, lungs, liver and the small intestine of Immunodeficiency mice.Results: Compared with the model g

7、roup, The low-dose group ,middle-dose group, high-dose group of Xiang A NO1and the middle-dose group, high-dose group of Xiang A NO 2 could significantly enhance the immune organs thymus mass index（P0.01 or P0.05）；The high-dose group of Xiang A NO1 and the middle-dose group, high-dose group of Xiang

8、 A NO 2 could significantly reduce lung weight index（P0.01 ）；The low-dose group , middle-dose group, high-dose group of Xiang A NO1 and Xiang A NO 2 could significantly reduce liver mass index（P0.01 or P0.05）；The low-dose group , middle-dose group, high-dose group of Xiang A NO1 and Xiang A NO 2 cou

9、ld significantly enhance the phagocytic percentage of peritoneal macrophages（P0.01）；The middle-dose group, high-dose group of Xiang A NO1 and the low-dose group , middle-dose group, high-dose group of Xiang A NO 2 could significantly enhance the phagocytic index of peritoneal macrophages（P0.01 or P0

10、.05）；The high-dore group of Xiang NO1 and the middle-dnse group of Xiang A NO 2 bould rignificantlx reduce qatholngical changes of thd thxmts atrnphy, partial fatty degeneration, alveolar wall thickening and Intestinal epithelial shedding. Conclusion: Xiang A NO1 and Xiang A NO2 play Immune protecti

11、on On immunodeficiency mice model established by intraperitoneal injection of cyclosporine A . Key words:Xiang A NO 1Xiang A NO 2cyclosporine Aimmune 人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus, HIV）感染所致的獲得性免疫缺陷綜合征（acquired immunodeficiency syndrome, AIDS）是全球性的傳染病，嚴(yán)重威脅人類的身心健康，艾滋病已成為一個(gè)嚴(yán)重的社會(huì)問題，其防治刻不容緩。高效抗逆轉(zhuǎn)

12、錄病毒治療（HAART）是治療AIDS的主要方法，HAART顯著降低了艾滋病相關(guān)疾病的發(fā)病率和死亡率，提高患者的生活質(zhì)量，延長患者的壽命，但不能從根本上根除HIV。尋找安全有效的具有免疫調(diào)節(jié)功能的天然藥物已成為防治AIDS的重要研究方向【sup】1-2【/sup】。在成功建立符合HIV致病機(jī)制的動(dòng)物模型和研究湘A1號(hào)、2號(hào)對(duì)免疫缺陷模型小鼠T細(xì)胞亞群的影響的基礎(chǔ)上【sup】3-4【/sup】，我們進(jìn)一步研究了湘A 1號(hào)、2號(hào)對(duì)免疫缺陷動(dòng)物的免疫保護(hù)作用，現(xiàn)將結(jié)果進(jìn)行報(bào)告與分析。 1 材料與方法 1.1 材料 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明系雄性小白鼠，體質(zhì)重（1822）g，年齡68周，購自湖南中醫(yī)

13、藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（湘）2002001。 1.1.2 藥物與試劑 湘A1號(hào)、湘A2號(hào)由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制備，規(guī)格15g/包；貞芪扶正顆粒為甘肅扶正藥業(yè)科技股份有限公司產(chǎn)品，產(chǎn)品批號(hào)070932，規(guī)格5g/包；環(huán)孢菌素A （CSA）為瑞士諾華大藥房產(chǎn)品，產(chǎn)品批號(hào)：S00117A，規(guī)格：每支250mg/5mL，用時(shí)以無菌生理鹽水稀釋，冰箱保存；5%雞紅細(xì)胞混懸液、1%淀粉自制。 1.2 方法 1.2.1 造模與分組給藥 取100只實(shí)驗(yàn)小鼠，除正常對(duì)照組外，其余小鼠腹腔注射環(huán)孢菌素A，隔日1次，共注射3次，正常對(duì)照組同步腹腔注射生理鹽水【sup】 3【/sup】。每

14、天定期觀察動(dòng)物的一般癥狀，模型動(dòng)物逐漸出現(xiàn)食欲減退、反應(yīng)遲鈍、毛失光澤等癥狀，初步判斷模型建立成功；末次注射后第2天處死小鼠10只檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)以評(píng)判模型。評(píng)判模型成功的當(dāng)天分組,并經(jīng)灌胃給藥。實(shí)驗(yàn)設(shè)正常對(duì)照組、模型組對(duì)照組、陽性藥物對(duì)照組、湘A1號(hào)觀察組（低、中、高劑量共3組）、湘A2號(hào)觀察組（低、中、高劑量共3組），每組10只。湘A1、2號(hào)觀察組：根據(jù)成人用藥量30g/60kg體質(zhì)重，按體表面積換算成小鼠的等效劑量為中劑量（0.087g/20gd），低劑量為中劑量的1/3倍，高劑量為中劑量的3倍；陽性對(duì)照藥物（貞芪扶正顆粒）組，按成人用藥量10g/60kg換算成小鼠的等效劑量（0.029g/

15、20g）【sup】5【/sup】。每次0.7mL/只，1日2次，連續(xù)灌胃1周。模型組同步予安慰劑灌胃，正常組給予蒸餾水灌胃。 1.2.2 指標(biāo)測(cè)定 藥物對(duì)免疫缺陷動(dòng)物胸腺重量指數(shù)、肺重量指數(shù)、肝重量指數(shù)的影響 給藥結(jié)束后第2天稱動(dòng)物體重，眼眶放血法處死小鼠，解剖取出胸腺、肺、肝等臟器，于電子分析天平上稱濕重。將器官重量（mg）除以體質(zhì)重（g）得器官系數(shù)，比較組間差異的顯著性。藥物對(duì)免疫缺陷的動(dòng)物腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能影響 于停藥后的第1天動(dòng)物腹腔注射無菌的1%淀粉2mL，20h后腹腔注射5%RBC雞紅細(xì)胞懸液2mL，1h后取腹腔液推片，自然干燥，甲醇固定，瑞氏染色、鏡檢，計(jì)算吞噬百分率（%）吞噬

16、雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)的吞噬細(xì)胞數(shù)100和吞噬指數(shù)被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)。藥物對(duì)免疫缺陷的動(dòng)物胸腺、脾臟、肺組織病理變化的影響 于停藥后第2天，眼眶放血法處死小鼠，剖取胸腺、脾臟、肺臟、小腸組織，用10%甲醛固定、石蠟包埋、切片、HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察其組織的病理改變。 1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，組間差異比較用單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時(shí)再用最小顯著差值法 （LSD）進(jìn)行兩兩比較。P0.0 5認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2 結(jié) 果 2.1 藥物對(duì)免疫缺陷動(dòng)物胸腺重量指數(shù)、肺重量指數(shù)、肝重量指數(shù)影響的檢測(cè)

17、結(jié)果 由表1可知：模型組動(dòng)物胸腺指數(shù)下降，肺重量指數(shù)、肝重量指數(shù)增大，與正常組比較，差異顯著（P0.0）。與模型組比較，湘A1號(hào)低、中、高劑量組及湘A2號(hào)中、高劑量組能顯著提高免疫缺陷動(dòng)物的胸腺重量指數(shù)（P0.05或0.01）；湘A1號(hào)高劑量組、湘A2號(hào)中、高劑量組能顯著降低免疫缺陷動(dòng)物的肺重量指數(shù)（P0.01）；湘A1號(hào)、湘A2號(hào)低、中、高劑量組均能顯著降低肝重量指數(shù)（P0.05或0.01）。其中湘A1號(hào)高劑量組對(duì)胸腺指數(shù)、湘A2號(hào)中劑量組對(duì)肺重指數(shù)、肝重指數(shù)的效果優(yōu)于陽性對(duì)照組（P0.05）。 表1 藥物對(duì)免疫缺陷動(dòng)物胸腺重量指數(shù)、 肺重量指數(shù)、肝重量指數(shù)的影響（n10，s） 注：與正常組

18、比較，P0.01；與正常組比較，P0.05；與模型對(duì)照組比較，*P0.01；與模型對(duì)照組比較，*P0.05；與陽性藥物對(duì)照組比較，P0.01；與陽性藥物對(duì)照組比較，P0.05。 2.2 藥物對(duì)免疫缺陷的動(dòng)物腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能影響的結(jié)果 由表2可知：模型組動(dòng)物腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)雞紅細(xì)胞吞噬百分率和吞噬指數(shù)下降，與正常組比較，差異顯著（P0.01）。與模型對(duì)照組比較，湘A1號(hào)、湘A2號(hào)低、中、高劑量組均能提高免疫缺陷動(dòng)物腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率（P0.01），其中湘A2號(hào)中、高劑量組效果優(yōu)于陽性對(duì)照組；湘A1號(hào)中、高劑量及湘A2號(hào)低、中、高劑量組能明顯提高免疫缺陷動(dòng)物腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)（P0.01

19、或P0.05），其中湘A1號(hào)高劑量組和湘A2號(hào)中劑量組的效果優(yōu)于陽性對(duì)照組。 表2 藥物對(duì)免疫缺陷動(dòng)物腹腔巨噬 細(xì)胞吞噬功能的影響（s，n10） 注：與正常組比較， P0.01；與正常組比較，P0.05；與模型對(duì)照組比較，*P0.01；與模型對(duì)照組比較，*P0.05；與陽性對(duì)照組比較，P0.01；與陽性對(duì)照組比較，P0.05。 2.3 藥對(duì)免疫缺陷的動(dòng)物胸腺、脾臟、肺和小腸組細(xì)病理變化影響的結(jié)果 由圖1可知：與正常組比較，模型組動(dòng)物胸腺萎縮、壞死、局部脂肫變性、皮質(zhì)增厚、可見其中有淋巴小結(jié)樣結(jié)構(gòu)；脾臟代償性白髓增多，脾小體增多變大，紅髓中可見大量多核巨噬細(xì)胞；肺泡間質(zhì)增厚、充血、水腫、有大量淋

20、巴細(xì)胞浸潤，有局灶性炎癥改變；腸絨毛紊亂、固有層淋巴細(xì)胞增多、腸腔內(nèi)有大量上皮脫落細(xì)胞。與模對(duì)煦組比較，湘A1高劑量組胸腺周圍皮質(zhì)與髓質(zhì)比例基本正常，皮質(zhì)中未見淋巴小結(jié)構(gòu)；臟紅髓與白髓質(zhì)比例基本正常，紅髓中有少野的巨噬細(xì)胞，未見特異性改變；肺泡間質(zhì)無增厚、充血、水腫，肺間質(zhì)少量淋巴細(xì)胞浸潤，無炎癥改變；小腸絨毛基本正常，腸腔內(nèi)有少量上皮脫落。湘A2號(hào)中劑量組胸腺皮質(zhì)與髓質(zhì)比例基本正常，未見胸腺小體退行性變化；脾臟紅髓中有少量多核巨噬細(xì)胞；肺組織結(jié)構(gòu)基本正常；小腸絨毛基本正常，小腸腺結(jié)構(gòu)正常，腸腔未見上皮脫落細(xì)胞。3 討 論 艾滋?。ˋIDS）是人類獲得性免疫缺陷病毒（HIV）引起的傳染性疾病，

21、可嚴(yán)重地推毀人的免疫系統(tǒng)而對(duì)生命構(gòu)成極大的威脅。目前國際上公認(rèn)的艾滋病的療效指標(biāo)分抑制艾滋病毒和提高機(jī)體的免疫功能兩類【sup】6【/sup】。HAART治療方案是通過抑制HIV復(fù)制,使病人的病毒血癥受到一定程度的控制，降低傳染性，提高生存質(zhì)量，改善心理狀態(tài)，減少機(jī)會(huì)性感染。但這種治療方案存在著停藥后病毒載量急劇反彈、嚴(yán)重不良反應(yīng)等缺點(diǎn)。面對(duì)抗病毒治療的缺陷，針對(duì)艾滋病毒主要破壞人體的免疫防御系統(tǒng)的特點(diǎn)，中醫(yī)藥學(xué)將研究的重點(diǎn)定位在免疫調(diào)節(jié)方面，為中醫(yī)藥防治艾滋病提供了新的思路。由于環(huán)孢菌素A對(duì)B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞增殖和功能沒有直接的抑制作用抑制，而可特異性地抑制CD【sub】4【/sub】【sup

22、】+【/sup】T細(xì)胞的增殖分化，因此，以環(huán)孢菌素A制備的小鼠免疫缺陷動(dòng)物模型符合HIV的致病機(jī)制【sup】3,7【/sup】。 胸腺是動(dòng)物的重要免疫器官，是T細(xì)胞分化成熟的場地，其結(jié)構(gòu)及功能與機(jī)體免疫狀態(tài)緊密相關(guān)。胸腺指數(shù)的變化直接反映機(jī)體細(xì)胞免疫水平的高低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：湘A1號(hào)低、中、高劑量組及湘A2號(hào)中、高劑量組能顯著提高免疫缺陷動(dòng)物的胸腺重量指數(shù)均能保護(hù)免疫器官受損，能顯著提高免疫缺陷小鼠的胸腺指數(shù)，尤以湘A1號(hào)中、高劑量組和湘A2號(hào)中劑量組的作用效果較好。 機(jī)體的免疫應(yīng)答包括非特異性免疫、特異性體液免疫和特異性細(xì)胞免疫。單核細(xì)巨噬細(xì)胞的吞噬能力是衡量機(jī)體非特異性免疫功能的標(biāo)志之一。當(dāng)細(xì)菌、病毒等抗原性物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體后，吞噬細(xì)胞可迅速將其吞噬和清除，吞噬細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)可以反應(yīng)其吞噬功能的強(qiáng)弱。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：湘A1號(hào)、湘A2號(hào)低、中、高