海南黎族人群血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2基因多態(tài)性與高血壓的關(guān)系

1、如有你有幫助，請購買下載，謝謝!海南黎族人群血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2基因多態(tài)性與高血壓的關(guān)系作者：張勇吳懇金水晶周代鋒張云霞 陳少華 李林江 王鎮(zhèn) 習(xí)雋麗 陳照清【摘要】目的探討海南黎族人群血管緊張素轉(zhuǎn)換酶 2(ACE2)基 因多態(tài)性與高血壓之間的關(guān)系。方法 應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)限制性片段長度多態(tài)性檢測高血壓組與對照組之間的 ACE2基因G8790A多態(tài)性， 并推測ACE2基因多態(tài)性與高血壓的發(fā)病關(guān)系。結(jié)果高血壓組與對照組比較，男性高血壓組有顯著性差異(P<0.05)，女性在基因表型及 基因頻率上組間比較均無統(tǒng)計學(xué)意義 (P>0.05)。結(jié)論ACE2基因 G8790A多態(tài)性位點(diǎn)與海南黎族男性

2、人群高血壓的發(fā)生有一定的關(guān)系?！娟P(guān)鍵詞】原發(fā)性高血壓；血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2;基因多態(tài)性有研究表明，人類血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)基因多態(tài)性與高血壓的 發(fā)生相關(guān)1，2。2000年由Donoghue等3和Tipnis等4發(fā) 現(xiàn)，ACE2的發(fā)生與ACE相反的生理活性作用，使人們對腎素血管緊 張素醛固酮(RASS)系統(tǒng)有了新的認(rèn)識。ACE2的基因多態(tài)性與心血管 疾病相關(guān)性的研究已成為一個新的熱點(diǎn)。國內(nèi)外少見ACE2基因多態(tài)性 與高血壓關(guān)系的報道，本研究主要研究黎族人群 ACE2基因多態(tài)性與高 血壓的關(guān)系。1對象與方法1.1研究對象 所有入選者均為2007年3月至2009年8月海 南陵水、昌江縣醫(yī)院住院及

3、門診的黎族患者。其中，高血壓組80例, 男43例，女37例，年齡4372歲，平均(56 士 17.2)歲，符合1999 年10月中國高血壓防治指南中I、期高血壓的診斷標(biāo)準(zhǔn)。對照組76例，男41例，女35例，年齡4268歲，平均(58.9 士 10.1)歲。 所有研究對象均檢測血壓、身高和體重。篩選標(biāo)準(zhǔn)：均為海南黎族居 民，排除繼發(fā)性高血壓、嚴(yán)重肝腎功能不全患者。組間年齡、體重指 數(shù)、甘油三酯水平無顯著差異(P>0.05)。1.2方法1.2.1血樣采集 取空腹靜脈血10 ml提取血漿和血清，在 全自動生化分析儀(AUT0LAB 18，北京中科富邦醫(yī)療設(shè)備有限公司) 檢測肝功能、腎功能、血脂

4、、血糖；余血5 ml加入2%乙二胺四乙酸 (EDTA)或肝素抗凝管中，-70 C保存，待提取基因組 DNA1.2.2基因組DNA提取采用細(xì)胞裂解和血紅素/蛋白沉淀 技術(shù)純化基因組DNA將提取好的基因組 DNA置于-70 C保存?zhèn)溆谩?.2.3聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增ACE2基因引物設(shè)計：上游引物 P1: 5 TTCTCCCTGCTCCTATACTACCG 下游弓 I 物 P2: 5 TTCATTCATGTCCTTGCCCTTA PCR反應(yīng)條件為 Touchdown 程序5預(yù)變性95C 2 min , 94C變性30 s，退火溫度在起始的10個 循環(huán)鐘為63C58 C,每次遞減0.5 C,反應(yīng)

5、60 s,延伸72C 40 s, 在以后的30個循環(huán)中，退火溫度固定為58C，每次反應(yīng)40 s，最后 延伸7 min終止所有反應(yīng)。PCRT增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢驗(yàn)。PCR 擴(kuò)增的目的片段經(jīng)樹脂(Wizard PCR Preps DNA purification resin , Promega)純化后，用 ABI PRISMTM Big Dye末端標(biāo)記試劑盒(PE,Foster City,CA)，以PCR引物為測序引物進(jìn)行雙向測序反應(yīng)。針對 ACE2G8790A多態(tài)性，利用Alu I酶切的方法進(jìn)行分型。電泳結(jié)束后取 膠在凝膠成像系統(tǒng)中觀察電泳條帶并照相。對各基因型隨機(jī)抽樣測序 核實(shí)基因型68。

6、1.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用 SPSS13.0 統(tǒng)計分析軟件包進(jìn)行分 析。計量數(shù)據(jù)采用 xs 表示。計數(shù)資料的組間比較采用 t 檢驗(yàn)，率的 比較米用X 2檢驗(yàn)。 2結(jié)果2.1 ACE2基因多態(tài)性PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中可見 A基因型表現(xiàn)為 500和210 bp兩個片段，G基因型表現(xiàn)為730 bp片段，G/A雜合子表 現(xiàn)為730、500和210 bp三個片段。ACE2基因多態(tài)性與高血壓無明顯 相關(guān)性 (P>0.05) 。2.2 ACE2基因多態(tài)性與高血壓的關(guān)系 男性中G基因頻數(shù)在 高血壓組和對照組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.05); 女性基因表型分 布及基因頻數(shù)組間無統(tǒng)計學(xué)差異 (P>

7、;0.05) ，見表 1，表2。表1 黎 族男性高血壓患者ACE2G8790A基因分布情況表2黎族女性各組多態(tài) 性基因分型及基因頻率分布情況3 討論ACE2G8790AS因多態(tài)性與高血壓關(guān)系的研究中，劉同寶等9在中國漢族人中發(fā)現(xiàn)，ACE2基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓出現(xiàn)并 發(fā)癥有關(guān)。Craekower等10進(jìn)行的ACE2基因敲除實(shí)驗(yàn)表明，雖然 其對血壓調(diào)節(jié)沒有影響，但血管緊張素H (Ang II)水平卻顯著增加，而 Ang I對心臟、腎臟和血管的作用是最重要的長期血壓調(diào)節(jié)機(jī)制；并且在血壓和心臟功能的實(shí)驗(yàn)中，小鼠的年齡限制在3個月和6個月，而原發(fā)性高血壓患者往往中年以后才開始發(fā)病，最后造成心腦腎等靶

8、器 官損害。臨床上ACE抑制劑和血管緊張素受體拮抗劑能逆轉(zhuǎn)心室和血 管的重構(gòu)也支持這種假設(shè)11。本研究觀察ACE2G8790A基因多態(tài)性 在高血壓中的分布情況，在男性和女性中 ACE2 G8790A多態(tài)性與高血 壓無明顯相關(guān)。男性對照組的 G基因型頻率高于高血壓組，女性患者 各組基因分型差異無統(tǒng)計學(xué)意義，并且等位基因各組差異也無統(tǒng)計學(xué) 意義。本研究在海南黎族男性和女性結(jié)果中有差異，其原因是ACE2G8790A多態(tài)性位于X染色體，導(dǎo)致在性別中的不同。但目前的研究結(jié) 果還無法說明這兩者之間的內(nèi)在關(guān)系，還有待進(jìn)一步研究求證。【參考文獻(xiàn)】1司大妞,李 莉血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2基因多態(tài)性與高血壓及 高血壓合

9、并糖尿病的關(guān)系J.中國實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2009;12(11): 28 30.2司大妞,李莉,崔天祥.血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2基因多態(tài)性與 高血壓合并糖尿病的關(guān)系J.中國實(shí)用神經(jīng)疾病雜志,2009;12(3): 38 40.3 Donoghue M,Hsieh F,Baronas E,et al.A novel angiotensin converting enzyme related carboxypeptidase(ACE2) converts angiotensin I to angiotensin 1| 9 J .Circ Res,2000;87(5):1 : 9.4 Tip nis SR,

10、Hooper NM,Hyde R,et al.A human homolog ofan giote nsinconvertingen zyme.Clo ningandfun cti onalexpression as aptopril insensitivecarboxypeptidase J.J BiolChem,2000;275(43):3323843.5 Don RH Cox PT, Wainwright BJ,et al.Touchdown PCRtocircumve nt spuriousprim ingduri nggene amplificati onJ.Nucleic Acid

11、s Res,1991;19(14):4008.6金水晶,王埮,陳志斌,等.海南黎族血管緊張素原基因多 態(tài)性及生活習(xí)慣與原發(fā)性高血壓并腦梗死易感性的關(guān)系J.大連醫(yī) 科大學(xué)學(xué)報,2007;29(5) : 455 7.7王琰,陳志斌,金水晶，等.血管緊張素原基因與黎族原發(fā) 性高血壓并腦梗死的相關(guān)性J.神經(jīng)科學(xué)通報：英文版,2007;23(5): 287 92.8吳 懇,金水晶，張勇,等.海南漢族咼血壓及咼血壓腦梗塞 與ACE基因多態(tài)性的關(guān)系J.心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志,2008;17(5): 4414.9劉同寶，商惠萍，張奎星，等.血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2基因多 態(tài)性與原發(fā)性高血壓的關(guān)系J.中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜 志,2005;22(5):56971.10 Craekower MA Saraor R, Oudit GY et al.Angiotensin converting enzyme2is an essential regulator of heart func