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1、會計學1基因組基因組DNA 文庫的構(gòu)建文庫的構(gòu)建第1頁/共17頁第2頁/共17頁第3頁/共17頁第4頁/共17頁第5頁/共17頁第6頁/共17頁ln(1-p)ln(1-p)ln(1-f)ln(1-f)N= N= 該公式用于預測一個完整基因組文庫應該包含的克隆數(shù)目。該公式用于預測一個完整基因組文庫應該包含的克隆數(shù)目。 第7頁/共17頁第8頁/共17頁第9頁/共17頁注注1：高純度大分子量基因組：高純度大分子量基因組DNA (High molecular weight DNA, HMW DNA)。注注2：構(gòu)建噬菌體文庫，連接產(chǎn)物不用電轉(zhuǎn)化的方法轉(zhuǎn)化宿主，而是采用包裝蛋白進行包裝并侵染宿主。：構(gòu)建噬

2、菌體文庫，連接產(chǎn)物不用電轉(zhuǎn)化的方法轉(zhuǎn)化宿主，而是采用包裝蛋白進行包裝并侵染宿主。注注3：以下，以：以下，以 噬菌體為例簡述噬菌體為例簡述DNA文庫的制作過程（文庫的制作過程（P184）。）。第10頁/共17頁噬菌體載體；限制性內(nèi)切酶Sau3A、BamH；瓊脂糖凝膠（或蔗糖）；T4連接酶；注注1：Sau3A與與BamH，是一對同尾酶。，是一對同尾酶。注注2：同尾酶是指切割不同的：同尾酶是指切割不同的DNA片段但產(chǎn)生相同的粘性末端的一類限制性內(nèi)切酶。片段但產(chǎn)生相同的粘性末端的一類限制性內(nèi)切酶。 第11頁/共17頁cos LR cosBamH 位點位點載體載體DNAcos LR cosBB可用載體可用載體DNA片段片段棄去中間片段棄去中間片段第12頁/共17頁真核基因組真核基因組DNA（約（約3109bp）Sau3 A做局部消化做局部消化被限制酶切開的被限制酶切開的DNA片段片段SS瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳純化約純化約20kb片段片段第13頁/共17頁cos LR cosBBSST4連接酶連接酶約約20kbDN片段片段體外包裝體外包裝重組噬菌體重組噬菌體侵染大腸桿菌侵染大腸桿菌大腸

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