臨床免疫學(xué)和免疫檢驗(yàn)第二十四章自身免疫性疾病及其免疫檢測講義

1、第二十四章自身免疫性疾病及其免疫檢測自身免疫耐受：正常情況下，機(jī)體能識(shí)別自我，對(duì)自身的組織細(xì)胞成分不產(chǎn)或僅產(chǎn)生微弱的免疫 應(yīng)答，是維持機(jī)體免疫平衡的重要因素。自身免疫：在某些情況下，自身耐受遭到破壞，機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)自身成分發(fā)生免疫應(yīng)答。其發(fā)生是機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生了針對(duì)自身成分的自身抗體或自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞，又稱為致敏 T淋巴細(xì)胞（以下簡稱致敏T細(xì)胞）。由自身免疫應(yīng)答引起的疾病稱為自身免疫性疾?。ˋID）。第一節(jié)概述當(dāng)機(jī)體免疫系統(tǒng)受某些內(nèi)因、外因或遺傳等因素作用產(chǎn)生針對(duì)自身正?；蜃冃缘慕M織、器官、細(xì)胞、 蛋白質(zhì)或酶類等自身抗原發(fā)生免疫應(yīng)答，導(dǎo)致自身組織器官損傷或功能障礙所致的疾病稱自身免疫性疾病

2、（簡稱自身免疫?。Ｗ陨砻庖咝约膊』颊唧w內(nèi)有針對(duì)自身組織器官、細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)成分的自身抗體，是 疾病診斷中的重要標(biāo)志。一、自身免疫性疾病的分類按受累器官組織的范圍將自身免疫性疾病分為器官特異性和非器官特異性兩大類。二、自身免疫性疾病的共同特征1. 可以有誘因，也可以無誘因，但多數(shù)病因不清。2. 患者以女性居多，并隨年齡增加發(fā)病率有所增加。3. 有遺傳傾向，已發(fā)現(xiàn)有些特定基因與自身免疫病的發(fā)病有密切關(guān)系。4. 疾病的重疊現(xiàn)象，即一個(gè)患者可同時(shí)患一種以上自身免疫病。5. 免疫抑制劑治療多可取得較好的療效。6. 血清中有自身抗體或體內(nèi)有針對(duì)自身組織細(xì)胞的致敏T淋巴細(xì)胞。自身抗體在不同的自身免疫病中有交

3、叉和重疊現(xiàn)象。部分疾病有相關(guān)的特征性自身抗體。7. 一般病程較長，多遷延為慢性。病程中病情發(fā)展和緩解常反復(fù)交替，病情的嚴(yán)重程度與自身免疫調(diào) 節(jié)紊亂程度密切相關(guān)。8. 病理損傷的局部可發(fā)現(xiàn)有淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、中性粒細(xì)胞浸潤。第二節(jié)自身免疫性疾病與免疫損傷發(fā)生自身免疫病的 關(guān)鍵是機(jī)體產(chǎn)生了針對(duì)自身組織成分的自身抗體和致敏T淋巴細(xì)胞，并在體內(nèi)發(fā)生了自身免疫應(yīng)答，導(dǎo)致自身組織細(xì)胞的損傷。一、自身抗原生物、物理、化學(xué)因素引起的 自身組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)與成分發(fā)生改變，并能引起機(jī)體免疫系統(tǒng)針對(duì)這些自身組織細(xì)胞成分產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)的抗原物質(zhì)稱為自身抗原。（一）隱蔽抗原的釋放體內(nèi)某些組織成分，如精子、眼內(nèi)容物、腦等，

4、在正常情況下從未與免疫細(xì)胞接觸過。因手術(shù)、外傷、 感染等原因破壞隔絕屏障，便與免疫系統(tǒng)接觸。如自身免疫性交感性眼炎。（二）自身成分的改變自身成分在受到物理因素（如冷、熱、電離輻射）、化學(xué)因素（如藥物）或生物因素（如細(xì)菌、病毒 等）作用后，其抗原性發(fā)生變化。改變的自身成分刺激免疫系統(tǒng)引起自身免疫應(yīng)答。如變性的IgG可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗變性IgG抗體（類風(fēng)濕因子），并與抗變性IgG抗體結(jié)合形成中等大 小的免疫復(fù)合物，沉積于關(guān)節(jié)滑膜上，引起類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。臨床上使用某些藥物后，可改變血細(xì)胞表面抗 原性，引起自身免疫性溶血性貧血或粒細(xì)胞減少。（三）共同抗原引發(fā)的交叉反應(yīng)某些細(xì)菌、病毒與正常人體某些組織細(xì)胞上

5、有相類似的抗原決定簇，針對(duì)這些細(xì)菌、病毒抗原決定簇 產(chǎn)生的自身抗體和致敏淋巴細(xì)胞可與自身組織細(xì)胞發(fā)生交叉反應(yīng)，引起自身免疫性疾病。如A型溶血性鏈球菌的多種抗原蛋白與人心肌內(nèi)膜和腎小球基底膜有共同抗原?？滤_奇病毒感染激發(fā) 的免疫應(yīng)答可攻擊胰島的B細(xì)胞引起糖尿病。二、免疫調(diào)節(jié)異常（一）淋巴細(xì)胞旁路活化 識(shí)別外來抗原載體決定簇的Th細(xì)胞能被激活發(fā)生反應(yīng)，故外來抗原可輔助B細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答，即稱為Th細(xì)胞旁路活化，從而引發(fā)自身免疫應(yīng)答。（二）多克隆刺激劑的旁路活化某些多克隆刺激劑如 EB病毒和超抗原，可激活處于耐受狀態(tài)的Th細(xì)胞或者直接向B細(xì)胞發(fā)出輔助信號(hào)刺激其產(chǎn)生自身抗體，引發(fā)自身免疫應(yīng)答。（三）輔

6、助刺激因子表達(dá)異常免疫活性細(xì)胞的激活，除與抗原肽識(shí)別外，還須有兩細(xì)胞間輔助刺激因子的相互作用。如APC表面輔助刺激因子的異常表達(dá)，便可激活自身免疫應(yīng)答的T細(xì)胞。此外，Th1細(xì)胞功能亢進(jìn)可促進(jìn)某些器官特異性自身免疫病的發(fā)展，如1型糖尿?。―M1和多發(fā)性硬化癥（MS。Th2細(xì)胞功能過高，易活化 B細(xì)胞產(chǎn)生自身抗體，介導(dǎo)某些全身性自身免疫性疾病，如SLE的發(fā)展。（四）自身致敏 T細(xì)胞與自身抗原應(yīng)答T淋巴細(xì)胞被自身抗原致敏， 當(dāng)再次遇到相同的抗原時(shí)， 發(fā)生的免疫應(yīng)答反應(yīng)可引起自身組織細(xì)胞損傷。 常見的致敏T淋巴細(xì)胞主要有兩類： CD4Th1細(xì)胞；CD8CTL細(xì)胞。三、遺傳因素人類的自身免疫性疾病常有家

7、族遺傳傾向。DR3重癥肌無力、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）、胰島素依賴型糖尿病。B27:強(qiáng)直性脊柱炎。DR4類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、尋常性天皰瘡。DR5橋本甲狀腺炎。HLA-m類基因中補(bǔ)體 C4基因的缺失、Fas/FasL的基因缺陷：SLE。第三節(jié) 常見的自身免疫性疾病由于病理性的自身免疫應(yīng)答可發(fā)生在體內(nèi)任何組織器官，臨床上常以病理損害的機(jī)制來區(qū)分各類自身 免疫性疾病，而許多自身免疫性疾病與超敏反應(yīng)的發(fā)生密切相關(guān)，因此，可分為由n型超敏反應(yīng)引起的自 身免疫性疾病，由m型超敏反應(yīng)引起的自身免疫性疾病及由T細(xì)胞對(duì)自身抗原應(yīng)答引起的自身免疫性疾病。一、由n型超敏反應(yīng)引起的自身免疫性疾病自身抗體（igG、igM類）

8、與相應(yīng)的自身組織細(xì)胞表面的抗原結(jié)合后，可通過四條途徑破壞細(xì)胞：激 活補(bǔ)體，形成攻膜復(fù)合體，最后溶解細(xì)胞；通過Fc和Cab調(diào)理促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬破壞靶細(xì)胞；通過ADCC作用破壞靶細(xì)胞；刺激淋巴細(xì)胞功能的異常表達(dá)。常見由n型超敏反應(yīng)引起的自身免疫性疾病如下：（一）抗血細(xì)胞表面抗原的抗體引起的自身免疫性疾病1. 自身免疫性溶血性貧血（ AIHA）AIHA的特點(diǎn)是：體內(nèi)出現(xiàn)抗紅細(xì)胞自身抗體，抗人球蛋白試驗(yàn)陽性；紅細(xì)胞壽命縮短。分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩類。繼發(fā)性自身免疫性溶血性貧血多繼發(fā)于淋巴系統(tǒng)惡性疾病、結(jié)締組織性疾 病、細(xì)菌病毒感染和應(yīng)用某些藥物后。如青霉素、奎尼丁、異煙肼、對(duì)氨基水楊酸、非那西丁、磺胺類

9、、 甲基多巴等?？辜t細(xì)胞抗體根據(jù)其性質(zhì)可分為三類： 溫抗體：為IgG, 37C可與紅細(xì)胞結(jié)合，但不聚集紅細(xì)胞，可引起自身免疫性溶血性貧血； 冷凝集素：為IgG，在低溫時(shí)能與紅細(xì)胞結(jié)合，使其凝集。常引起冷凝集素綜合征（CAS ; Don ath-Laidstei ner抗體：屬于IgG，此抗體在低溫時(shí)先與兩種補(bǔ)體成分結(jié)合，當(dāng)溫度升高至37 C時(shí)，弓I起補(bǔ)體連鎖激活，導(dǎo)致溶血，臨床上出現(xiàn)陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿癥（PCH。PCH的發(fā)生常與繼發(fā)于三期或先天性梅毒有關(guān)；某些兒童或年輕患者在有些病毒感染后，也易發(fā)生PCH2. 免疫性血小板減少性紫癜（ITP）ITP是一種常見的血小板減少癥，主要表現(xiàn)為皮膚黏膜

10、紫癜，血小板減少，骨髓中巨核細(xì)胞正常或增多。ITP患者血清中存在有 抗血小板抗體，該抗體可以縮短血小板的壽命。ITP根據(jù)病因和臨床表現(xiàn)可分為特發(fā)性免疫性血小板減少性紫癜（無明顯誘因）和繼發(fā)性免疫性血小板減少性紫癜（有明顯病因，或在一些原 發(fā)病基礎(chǔ)上發(fā)生血小板減少）。（二）抗細(xì)胞表面受體抗體引起的自身免疫性疾病1. 重癥肌無力（MG :患者體內(nèi)存在神經(jīng)肌肉接頭乙酰膽堿受體的自身抗體。疾病可發(fā)生于任何年齡，最先出現(xiàn)的癥狀是眼肌無力，進(jìn)而累及機(jī)體的其他部位，常呈進(jìn)行性加重。2. 毒性彌漫性甲狀腺腫：有抗促甲狀腺激素受體（TSHR的IgG型自身抗體?？纱碳ぜ谞钕偌に爻掷m(xù) 分泌，造成甲狀腺功能的亢進(jìn)。（

11、三）細(xì)胞外抗原的自身抗體引起的自身免疫性疾病1. 抗腎小球基底膜腎炎 抗腎小球基底膜腎炎大部分為肺出血腎炎綜合征（又稱 Good-Pasture綜合征）患者，即腎小球腎炎與出血性肺炎同時(shí)發(fā)生?；颊哐褐锌蓹z測到抗腎小球基底膜W型膠原抗體，該抗體的效價(jià)與腎組織損害的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。2. 抗腎小管基底膜（TBM腎炎 抗腎小管基底膜抗體常出現(xiàn)于抗腎小球基底膜腎炎患者中，并伴有腎 小管間質(zhì)性腎炎。二、自身抗體-免疫復(fù)合物引起的自身免疫性疾?。ㄒ?）系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE 是一種累及多器官、多系統(tǒng)的小血管及結(jié)締組織疾病，易發(fā)于年輕女 性，病程中往往復(fù)發(fā)與緩解交替出現(xiàn)?；颊唧w內(nèi)可產(chǎn)生針對(duì)核酸、核蛋白和組

12、蛋白的抗核抗體及其他自身抗體。SLE患者常有多系統(tǒng)、多器官的損害。根據(jù)損害的器官不同，患者可出現(xiàn)發(fā)熱、皮疹、關(guān)節(jié)痛、腎損 害，心血管病變、漿膜炎、貧血、精神癥狀等多種臨床表現(xiàn)。（二 ）類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RARA的特征是以手腳小關(guān)節(jié)向心性對(duì)稱發(fā)病，老年患者可能存在遠(yuǎn)端大關(guān)節(jié)受累。病程長者?？沙霈F(xiàn)關(guān) 節(jié)畸形。關(guān)節(jié)外表現(xiàn)包括血管炎、皮膚和肌肉萎縮、皮下結(jié)節(jié)、漿膜炎、肺炎（局限型）、淋巴結(jié)病、脾 腫大和白細(xì)胞減少等。多發(fā)于青壯年，女性多于男性?；颊唧w內(nèi)產(chǎn)生的變性IgG作為自身抗原刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生多種抗變性IgG的自身抗體，即類風(fēng)濕因子（ RF。變性IgG與類風(fēng)濕因子結(jié)合，形成的免疫復(fù)合 物沉積于關(guān)節(jié)滑膜等

13、部位，激活補(bǔ)體，在局部引起慢性漸進(jìn)性免疫炎癥性損害，部分病例可累及心、肺及 血管等。（三） 干燥綜合征（SS）該疾病典型特征為分泌腺體功能異常導(dǎo)致皮膚和黏膜的干燥，淚腺與唾液腺 最常被侵犯，從而產(chǎn)生眼干與口干。該疾病抗SSA/Ro抗體、抗SSB/La抗體通常為陽性。（四）多發(fā)性肌炎（PM）及皮肌炎（DM 多發(fā)性肌炎是以損害肌肉為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病，如 果同時(shí)有皮膚損害，則稱為皮肌炎。多發(fā)性肌炎以成人多見，皮肌炎在兒童有較高的發(fā)生率。該病臨床通常表現(xiàn)為近端肌群無力，伴有觸痛，隨病情發(fā)展患者可有呼吸困難甚至危及生命。較特異的Jo-1、Mi抗體主要見于多發(fā)性肌炎，而PM-1及Ku多見于多發(fā)性肌

14、炎與硬皮病的重疊。（五）硬皮?。⊿cl ）硬皮病最典型的表現(xiàn)為皮膚變緊、變硬。75%勺PSS患者有抗核抗體陽性，80%-95%勺局限性硬皮病患者抗著絲點(diǎn)抗體陽性?？筍cl-70抗體是PSS的特異性抗體。三、T細(xì)胞對(duì)自身抗原應(yīng)答引起的自身免疫性疾?。ㄒ唬?型糖尿?。―M1 APC和CTL相互作用產(chǎn)生的IL-1 B和NO可使胰島B細(xì)胞表達(dá) Fas，激活 的CTL表達(dá)FasL,使表達(dá)Fas的B細(xì)胞受到破壞。 患者體內(nèi)產(chǎn)生了針對(duì)胰島B細(xì)胞的 CD8CTL,并對(duì)胰島 B細(xì)胞發(fā)生免疫應(yīng)答，損傷胰島B細(xì)胞，使其最終喪失分泌胰島素的功能。（二）多發(fā)性硬化癥（MSMS的發(fā)生與髓鞘堿性蛋白（MBP作為自身抗原致敏

15、 Th細(xì)胞，當(dāng)Th細(xì)胞進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)后，再次與MBP接觸而發(fā)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，導(dǎo)致脊髓鞘破壞，引起疾病。同時(shí)，該病的發(fā)生與患者淋巴細(xì)胞上Fas/FasL信號(hào)表達(dá)異常密切相關(guān)。第四節(jié) 常見自身免疫性疾病的自身抗體檢測一、自身抗體的特性凡經(jīng)化學(xué)修飾的組織抗原，與正常組織成分有交叉反應(yīng)的外來抗原，隔絕的體內(nèi)自身成分，以及低分 化的組織抗原等在一定條件下，均可刺激機(jī)體組織產(chǎn)生自身抗體。測定自身抗體有助于自身免疫性疾病的 診斷，并對(duì)判斷疾病的活動(dòng)程度、觀察治療效果、指導(dǎo)臨床用藥具有重要的臨床意義。二、抗核抗體的檢測與應(yīng)用抗核抗體（ANA是一組將自身真核細(xì)胞的各種細(xì)胞核成分作為靶抗原的自身抗體的總稱。AN

16、A的性質(zhì)主要是IgG,也有IgM、IgA和IgD。其無器官和種屬特異性。 ANA主要存在于血清中， 也可存在于胸腔積液、 關(guān)節(jié)滑膜液和尿液中。ANA在未治療的SLE患者中的效價(jià)較高，在大多數(shù)自身免疫性疾病中均可呈陽性，正常老年人也可有低效價(jià)的 ANA ANA陽性并不一定患有自身免疫性疾病。ANA有多種類型。各種 ANA在不同的自身免疫性疾病中出現(xiàn)不同組合，各亞類ANA抗體對(duì)明確診斷、 臨床分型、病情觀察、預(yù)后及治療評(píng)價(jià)都具有重要意義?？购丝贵w檢測是 SLE的最佳篩查試驗(yàn)?？购丝贵w效價(jià)與自身免疫性疾病的臨床活動(dòng)性無關(guān)。目前按細(xì)胞內(nèi)分子理化特性與抗原分布部位將ANA分為四大類，即抗DNA抗體、抗組

17、蛋白抗體、抗非組蛋白抗體和抗核仁抗體。（一）檢測方法目前最常用間接免疫熒光法（IIF ）作為總的ANA篩選試驗(yàn)。IIF檢測目前最常用 Hep-2 （人喉癌上皮 細(xì)胞）細(xì)胞作為抗原。 培養(yǎng)HEp2細(xì)胞作為抗原固定于載玻片上，與受檢血清反應(yīng)，形成IC,此時(shí)再加入FITC標(biāo)記的抗人IgG，在熒光顯微鏡下可觀察。（二）常見的ANA熒光圖形及臨床意義1. 均質(zhì)型（H）細(xì)胞核均勻著染熒光，有些核仁部位不著色，分裂期細(xì)胞染色體可被染色出現(xiàn)熒光。與均質(zhì)型相關(guān)的自身抗體主要有抗不溶性DNF抗體，以及抗組蛋白抗體、抗dsDNA抗體。高效價(jià)均質(zhì)型主要見于 SLE患者，低效價(jià)均質(zhì)型可見于 RA慢性肝臟疾病、傳染性單核

18、細(xì)胞增多癥或 藥物誘發(fā)的狼瘡患者。2. 斑點(diǎn)型（S）細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)顆粒狀熒光，分裂期細(xì)胞染色體無熒光顯色。主要為抗核糖體核蛋白顆?？贵w，如抗 Sm 抗Ru1 RNP抗SSB/La等抗體。高效價(jià)的斑點(diǎn)型常見于 MCTD同時(shí)也見于 SLE硬皮病、SS等自身免疫性疾病。3. 核膜型（M）又稱周邊型，熒光著色主要顯示在細(xì)胞核的周邊形成熒光環(huán)，或在均一的熒光背景上核周邊熒光增強(qiáng)；分裂期細(xì)胞染色體區(qū)出現(xiàn)熒光著色。相關(guān)抗體主要是抗dsDNA抗體。高效價(jià)的周邊型幾乎僅見于 SLE特別是活動(dòng)期 SLE其他自身免疫疾病很少見周邊型，因此周邊型對(duì)SLE的診斷價(jià)值極大，且提示病情活動(dòng)。4. 核仁型（N）熒光著色主要在核

19、仁區(qū)，分裂期細(xì)胞染色體無熒光著色。主要是抗核仁特異的低分子量RNA抗體，抗RNA聚合酶-1抗體、抗U3 RNP抗體、抗 PM-Scl抗體。核仁型在硬皮病中出現(xiàn)率最高，尤其是高效價(jià)核仁型對(duì)診斷硬皮病具有一定特異性。未經(jīng)治療的SLE或MCTD患者幾乎95%上都有抗核抗體， 且效價(jià)較高，一般I : 100以上具有臨床診斷 價(jià)值?？购丝贵w陰性對(duì)排除 SLE的陰性預(yù)測值較高，所以抗核抗體檢測是SLE的最佳篩查試驗(yàn)?？购丝贵w效價(jià)與自身免疫性疾病的臨床活動(dòng)性無關(guān)。抗核抗體在其他自身免疫病中也可出現(xiàn)，但效價(jià)較低?？购丝贵w的熒光圖形分類對(duì)了解自身免疫性疾病的鑒別診斷具有提示作用。（三）抗雙鏈 DNA抗體的檢測方

20、法抗dsDNA抗體與細(xì)胞核的反應(yīng)位點(diǎn)是位于DNA（外圍區(qū)）脫氧核糖磷酸框架 上。檢測抗dsDNA抗體最特異和最敏感的方法是用馬疫錐蟲或綠蠅短膜蟲作為抗原基質(zhì)進(jìn)行間接免疫熒光檢測?？筪sDNA抗體在SLE診斷中特異性強(qiáng)而敏感性低?？贵w效價(jià)與疾病的活動(dòng)程度有相關(guān)性?？筪sDNA抗體可形成多種冷沉淀而致血管炎，狼瘡腎炎及典型的蝶形紅斑均與該抗體有關(guān)?？筪sDNA抗體診斷SLE的特異性可達(dá)95%-100%，但其敏感性僅為 30%- 50%因此抗dsDNA抗體陰性不能排除 SLE 的診斷。（四）抗核小體抗體的檢測及應(yīng)用當(dāng)SLE患者的吞噬細(xì)胞對(duì)凋亡細(xì)胞的清除能力受損或降低，導(dǎo)致核小體在患者體內(nèi)大量存積，多

21、聚核 小體與活化的單核細(xì)胞結(jié)合后被抗原遞呈細(xì)胞呈遞給CD4Th2細(xì)胞，Th2細(xì)胞增殖活化，激活 B細(xì)胞產(chǎn)生抗核小體抗體（AnuA）。AnuA特異性高，與SLE病情活動(dòng)性相關(guān)， 通常采用ELISA檢測法。在系統(tǒng)性硬化（SSc）病中可低表達(dá)。三、抗ENA抗體譜的檢測與應(yīng)用ENA是可提取核抗原的總稱，ENA抗原可用鹽水或磷酸鹽緩沖液從細(xì)胞核中被提取。ENA由小分子RNA與蛋白質(zhì)組成，不含 DNA ENA抗原中主要包括 Sm RNP SSA SSB Jo-1、Scl-70 抗原。（一）抗ENA抗體的檢測1. 免疫印跡技術(shù)（IBT）:屬于膜載體酶免疫技術(shù)，其固相載體為吸附有抗原的硝酸纖維膜。不需純化 單

22、個(gè)抗原，并可在同一載體上作多項(xiàng)抗原分析，靈敏度高，特異性強(qiáng)，操作簡便，是目前各臨床實(shí)驗(yàn)室廣泛采用的檢測抗ENA抗體譜的方法。2. 斑點(diǎn)酶免疫技術(shù)（dot-ELISA ）（二）抗ENA抗體的臨床意義1. 抗Sm抗體 抗Sm抗體僅發(fā)現(xiàn)于 SLE患者中，是SLE的血清標(biāo)志抗體。2. 抗核RNP抗體 抗核RNF抗體是診斷混合性結(jié)締組織?。?MCTD的重要血清學(xué)依據(jù)，但在其他自身免 疫性疾病中也可檢出。由于Sm和 RNP是同一分子復(fù)合物（RNA-蛋白質(zhì)顆粒）中的不同抗原位點(diǎn)，故抗Sm抗體陽性常伴有抗RNF抗體陽性。3. 抗SSA/Ro抗體和抗SSB/La抗體在干燥綜合征（SS）中抗SSA/Ro抗體的敏感

23、性較高，而抗 SSB/La 抗體的特異性較高。4. 抗Jo-1抗體該抗體最常見于見于多發(fā)性肌炎（ PM，故又稱為PM-1抗體。對(duì)診斷PM具有特異性。5. 抗Scl-70抗體幾乎僅在進(jìn)行性系統(tǒng)性硬皮?。≒SS）患者中檢出，故該抗體是 PSS的特征抗體。四、小血管炎相關(guān)的自身抗體檢測與應(yīng)用（一）抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA 以人中性粒細(xì)胞胞漿成分為靶抗原，與臨床多種小血管炎性疾病密切相關(guān)的自身抗體。主要有：胞漿型（cANCA針對(duì)的主要靶抗原是蛋白酶3 （ PR3）。核周型（pANCA針對(duì)的靶抗原為髓過氧化物 酶（MPO，為中性粒細(xì)胞嗜天青顆粒的主要成分。PR3和抗MPO抗體可激活中性粒細(xì)胞導(dǎo)致脫

24、顆粒反應(yīng)，使大量的蛋白水解酶活化，造成血管炎癥。1. ANCA的檢測方法（1）IIF檢測法：用于總 ANCA檢測，以酒精或甲醛固定中性粒細(xì)胞于載玻片上作為抗原。cANCA在整個(gè)胞質(zhì)呈現(xiàn)出彌散的細(xì)顆粒熒光，分葉核之間熒光增強(qiáng)。pANCA在乙醇固定底物片中呈現(xiàn)核周染色；在甲醛固定的中性粒細(xì)胞底物片中仍呈現(xiàn)胞質(zhì)著染的熒光 圖形。（2）ELISA法：常用來進(jìn)行特異性 ANCA僉測。用純化的特異性中性粒細(xì)胞胞漿抗原包被固相反應(yīng)板， 可檢出抗特異性中性粒細(xì)胞胞漿抗體。2. ANCA的臨床應(yīng)用ANCA被認(rèn)為是原發(fā)性小血管炎的特異性血清標(biāo)志物。ANCA僉測是原發(fā)性小血管炎患者診斷、療效觀察、病情活動(dòng)和復(fù)發(fā)的一

25、項(xiàng)重要指標(biāo)。最常見的疾病如韋格納肉芽腫（WG、原發(fā)性局灶節(jié)段壞死性腎小球腎炎（IFSNGN、新月型腎小球腎炎（NCGN、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎（PAN等均可檢出 ANCA（二）抗磷脂抗體（APLA 抗磷脂抗體是針對(duì)一組含有磷脂結(jié)構(gòu)抗原物質(zhì)的自身抗體。這些抗體主要 包括抗心磷脂抗體（ACLA、抗磷脂酸抗體（APAA和抗磷脂酰絲氨酸抗體等。APL抗體以IgG型最為常見，IgM型次之?？剐牧字贵w的特異性最強(qiáng)，與自身免疫性疾病和抗磷脂綜合征的關(guān)系均較密切。1. 抗心磷脂抗體的檢測 最常用ELISA法進(jìn)行檢測。2. 抗心磷脂抗體的臨床應(yīng)用 ACL抗體陽性或持續(xù)升高與患者的動(dòng)靜脈血栓形成、血小板減少、反復(fù)自發(fā)性

26、流產(chǎn)及神經(jīng)系統(tǒng)損傷為特征的多系統(tǒng)受累的抗磷脂綜合征（APS密切相關(guān)。五、RA相關(guān)自身抗體的檢測與應(yīng)用（一 ）類風(fēng)濕因子（RF） RF是一種抗人或動(dòng)物IgG分子Fc片段抗原決定簇的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗體。RF主要為IgM,也有IgG和IgA，易與體內(nèi)變性的IgG結(jié)合形成IC活化補(bǔ)體，或被吞噬細(xì)胞吞噬。吞 噬細(xì)胞釋放的炎性介質(zhì)，致組織炎性損傷，可使患者發(fā)生骨關(guān)節(jié)炎及血管炎。1. 檢測方法（1） 膠乳顆粒凝集實(shí)驗(yàn)：這是檢測IgM型RF的常用方法，只能定性或半定量，靈敏度和特異性均不 高。（2） 速率散射比濁法：只能檢測IgM型，準(zhǔn)確、快速、準(zhǔn)確、敏感，能定量，逐漸替代膠乳凝集法。（3

27、） ELISA法：可測定不同lg類型的RF,以聚合的兔IgG作為抗原包被固相載體，與待測樣品中RF結(jié)合，然后分別加入有酶標(biāo)記的抗人IgG、IgA、IgM抗體，待反應(yīng)后，加入酶作用底物顯色。2臨床應(yīng)用高效價(jià)RF陽性支持對(duì)早期 RA的診斷，在RA患者，RF的效價(jià)與患者的臨床表現(xiàn)呈正相關(guān)，即隨癥狀加 重而效價(jià)升高。但RF對(duì)RA患者并不具有嚴(yán)格特異性，RF陽性不能作為診斷 RA的唯一標(biāo)準(zhǔn)。盡管在多種疾病中可有RF陽性，但效價(jià)均較低（v 40IU/ml ）。RF陰性不能排除RA的診斷，因有部分RA患者可一直呈血清 RF陰性，這類患者關(guān)節(jié)滑膜炎輕微，很少發(fā)展為關(guān)節(jié)外的類風(fēng)濕性疾病。（二 ）抗角蛋白抗體（A

28、KAAKA主要見于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者。1. AKA的檢測常采用間接免疫熒光分析法，以大鼠食管中段黏膜組織切片作為反應(yīng)基質(zhì)。2. AKA的臨床應(yīng)用 由于AKA的出現(xiàn)?？上扔诩膊〉呐R床表現(xiàn)，因此AKA對(duì)于早期診斷 RA具有重要的臨床意義。AKA是判斷RA預(yù)后的一個(gè)標(biāo)志性抗體，特別是高效價(jià) AKA的RA患者，常提示疾病較為嚴(yán)重。（三）抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（anti-CCP ）近年的研究發(fā)現(xiàn)絲集蛋白中的稀有氨基酸-瓜氨酸是絲集蛋白主要的抗原表位，用合成的環(huán)瓜氨酸肽作為ELISA方法的抗原基質(zhì)檢測抗 CCP抗體，其敏感性可達(dá)到 80%抗CCP抗體是診斷RA的一個(gè)高度特異性 新指標(biāo)。1. 抗CCF抗體的檢測 目

29、前最常用的方法為 ELISA法。半定量和定量檢測。2. 抗CCF抗體的臨床應(yīng)用 抗CCP抗體主要為IgG類抗體，對(duì)RA的特異性為96%用于疾病的早期診六、自身免疫性肝病相關(guān)自身抗體的檢測與應(yīng)用（一）抗平滑肌抗體（ASMA1. ASMA的檢測 主要采用間接免疫熒光分析，以大鼠的胃、腎或肝組織或猴肝組織作為基質(zhì)片，ASMA主要以平滑肌微絲中的肌動(dòng)蛋白（act in ）為靶抗原。2. ASMA的臨床應(yīng)用 在自身免疫性肝炎患者，ASMA主要為IgG型。而在原發(fā)性膽汁性肝硬化與自身免疫性肝炎重疊時(shí)，常以IgG和IgM型ASMA同時(shí)出現(xiàn)。該抗體的檢測有助于自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性 肝硬化的診斷及與其他

30、肝臟疾病的鑒別診斷。（二）抗線粒體抗體（AMA原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBQ是以肝內(nèi)膽管進(jìn)行性破壞為主要病變的自身免疫性疾病。抗線粒體抗體的 M2型是協(xié)助診斷原發(fā)性膽汁性肝硬化的特異性自身抗體。1. AMA的檢測間接免疫熒光法檢測抗線粒體抗體，采用HEp2細(xì)胞作為基質(zhì)，抗線粒體抗體陽性者在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見到較粗的顆粒型熒光。采用免疫斑點(diǎn)法檢測AMA-M2型抗體，具有更高的特異性。2. AMA的臨床應(yīng)：抗線粒體抗體的M2型在原發(fā)性膽汁性肝硬化患者中具有極高的敏感性和特異性。七、橋本甲狀腺炎相關(guān)自身抗體的檢測與應(yīng)用患者常可出現(xiàn)抗甲狀腺球蛋白抗體（ATGA及抗甲狀腺微粒體抗體（TMA陽性，但這些抗體不是造成

31、橋本甲狀腺炎的直接原因。八、神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性相關(guān)自身抗體的檢測與應(yīng)用（一）抗乙酰膽堿受體（AChR1. 抗AChR抗體的檢測 常用ELISA法進(jìn)行檢測。對(duì)于重癥肌無力（ MG的診斷具有特異性?？?AChR抗 體效價(jià)與臨床病情輕重?zé)o相關(guān)性。2. 抗StrAb的檢測主要采用間接免疫熒光法，靈長類動(dòng)物骨骼肌冷凍切片作為反應(yīng)基質(zhì)。（二）抗骨骼肌抗體（StrAb）StrAb常見于年齡大于60歲的重癥肌無力患者（55%及成年后發(fā)病的重癥肌無力患者（30%，較少見于小于20歲的重癥肌無力患者。第五節(jié) 自身抗體檢測的臨床應(yīng)用一、自身抗體檢測的一般原則通常以抗核抗體作為篩查試驗(yàn)，因?yàn)樵谠S多自身免疫性疾病中，抗

32、核抗體均可呈陽性，而其他針對(duì)特異性靶抗原成分的自身抗體應(yīng)根據(jù)臨床需要進(jìn)行選擇性檢測，以進(jìn)一步明確診斷。二、實(shí)驗(yàn)室方法的選擇及結(jié)果的確認(rèn)對(duì)于自身抗體檢測，應(yīng)首選間接免疫熒光分析法。當(dāng)需對(duì)自身抗體進(jìn)行進(jìn)一步的抗原特異性區(qū)分時(shí)， 則可選擇ELISA法、Western印跡法或?qū)α髅庖唠娪炯懊庖唠p擴(kuò)散法。第六節(jié)自身免疫性疾病的相關(guān)實(shí)驗(yàn)檢測在自身免疫病患者體內(nèi)，因有多種自身抗原的存在，自身抗體的種類也可有交叉重疊現(xiàn)象。一、免疫球蛋白和補(bǔ)體檢測及臨床意義（一）免疫球蛋白檢測的意義自身免疫性疾病患者產(chǎn)生大量自身抗體，故血清中免疫球蛋白含量往往高于正常值。其中IgG升高較明顯。免疫球蛋白含量的波動(dòng)，與疾病的活動(dòng)與穩(wěn)定呈一定的相關(guān)性。（二）補(bǔ)體檢測的意義在以n、川型超敏反應(yīng)機(jī)制發(fā)生的自身免疫性疾病中，補(bǔ)體在疾病活躍期被消耗，檢測其總補(bǔ)體活性 （CH50）及單一補(bǔ)體含量均可呈明顯