實(shí)驗(yàn)六植物組織中總糖和還原糖含量的測(cè)定DNS法1017

1、實(shí)驗(yàn)六、植物組織中總糖和實(shí)驗(yàn)六、植物組織中總糖和還原性糖含量的測(cè)定還原性糖含量的測(cè)定1 1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握總糖和還原糖含量的測(cè)定方法掌握總糖和還原糖含量的測(cè)定方法 學(xué)習(xí)總糖和還原糖提取的方法學(xué)習(xí)總糖和還原糖提取的方法2 2、實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)和難點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)和難點(diǎn) 利用利用3,5-二硝基水楊酸法測(cè)定還原糖含量的二硝基水楊酸法測(cè)定還原糖含量的實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 多糖在酸性加熱條件下會(huì)降解為還原糖多糖在酸性加熱條件下會(huì)降解為還原糖3 3、實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)原理3.13.1、還原糖的概念、還原糖的概念 指含有游離的半縮醛（酮）基糖。單糖都是還原指含有游離的半縮醛（酮）基糖。單糖都是還原糖；某些二糖是還原糖

2、（如麥芽糖、乳糖等）；糖；某些二糖是還原糖（如麥芽糖、乳糖等）；多糖多為非還原糖。多糖多為非還原糖。 葡萄糖分子中含有游離醛基，果糖分子中含有游葡萄糖分子中含有游離醛基，果糖分子中含有游離酮基，乳糖和麥芽糖分子中含有游離的醛基，離酮基，乳糖和麥芽糖分子中含有游離的醛基，故它們都是還原糖。故它們都是還原糖。3.23.2、3,5-3,5-二硝基水楊酸比色法二硝基水楊酸比色法 總糖的提取及雙、多糖的酸水解。利用糖的溶解總糖的提取及雙、多糖的酸水解。利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來(lái)，對(duì)沒(méi)有還原性的雙糖和多糖，可用別提取出來(lái)，對(duì)沒(méi)

3、有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進(jìn)行測(cè)定，酸水解法使其降解成有還原性的單糖進(jìn)行測(cè)定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量。再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量。 還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產(chǎn)還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，物，3,5-3,5-二硝基水楊酸二硝基水楊酸( (黃色）則被還原為棕紅色黃色）則被還原為棕紅色的的3-3-氨基氨基-5-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)，還原糖硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，利用的量與棕紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，利用分光光度計(jì)，在分光光度計(jì)，在540nm540nm波長(zhǎng)下測(cè)

4、定光密度值，查對(duì)波長(zhǎng)下測(cè)定光密度值，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可求出樣品中還原糖和總糖標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。的含量。 由于多糖水解為單糖時(shí)，每斷裂一個(gè)糖苷鍵需加由于多糖水解為單糖時(shí)，每斷裂一個(gè)糖苷鍵需加入一分子水，所以在計(jì)算多糖含量時(shí)應(yīng)乘以入一分子水，所以在計(jì)算多糖含量時(shí)應(yīng)乘以0.90.9。相對(duì)密度法相對(duì)密度法折光法折光法旋光法旋光法物理法物理法3.33.3、糖含量測(cè)定方法、糖含量測(cè)定方法化學(xué)法化學(xué)法還原糖法還原糖法碘量法碘量法比色法比色法直接滴定法直接滴定法 (改良的蘭改良的蘭愛(ài)農(nóng)法）愛(ài)農(nóng)法） 高錳酸鉀法高錳酸鉀法 薩氏法薩氏法 3，5二硝基水楊酸二硝基水楊酸 酚酚硫

5、酸法硫酸法蒽酮法蒽酮法半胱氨酸半胱氨酸咔唑法咔唑法 紙色譜紙色譜 薄層色譜薄層色譜 gc hplc 半乳糖脫氫酶測(cè)半乳糖、乳糖半乳糖脫氫酶測(cè)半乳糖、乳糖 葡萄糖氧化酶測(cè)葡萄糖葡萄糖氧化酶測(cè)葡萄糖 發(fā)酵法發(fā)酵法 測(cè)不可發(fā)酵糖測(cè)不可發(fā)酵糖 重量法重量法測(cè)果膠、纖維素、膳食纖維素測(cè)果膠、纖維素、膳食纖維素 色譜法色譜法 酶法酶法4 4、操作步驟、操作步驟4.14.1、制定標(biāo)準(zhǔn)曲線、制定標(biāo)準(zhǔn)曲線管號(hào)管號(hào)012345標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液/ml00.20.40.60.81.0蒸餾水蒸餾水/ml1.00.80.60.40.20dns試劑試劑/ml2.02.02.02.02.02.0沸水浴中準(zhǔn)確煮沸沸

6、水浴中準(zhǔn)確煮沸5min，取出，用自來(lái)水冷卻至室溫，取出，用自來(lái)水冷卻至室溫蒸餾水蒸餾水/ml9.09.09.09.09.09.0葡萄糖濃度葡萄糖濃度/mg/ml00.20.40.60.81.0a5404.24.2、植物組織中總糖與還原糖溶液的獲取、植物組織中總糖與還原糖溶液的獲取(1)還原糖：30ml水沖研缽2-3次1g土豆研成勻漿3ml水三角瓶中50水浴0.5h冷卻定到100ml混勻,過(guò)濾取濾液作為還原糖提取液(2)總糖：1g土豆研成勻漿3ml水三角瓶中沸水浴0.5h冷卻,用naoh中和,加水定容到100ml混勻,過(guò)濾取濾液作為總糖提取液12ml水沖研缽2-3次10ml6mhcli2-ki檢測(cè)4.34.3、用、用3,5-3,5-二硝基水楊酸法測(cè)還原糖、二硝基水楊酸法測(cè)還原糖、總糖含量總糖含量管號(hào)管號(hào)空白對(duì)照空白對(duì)照還原糖還原糖樣液管樣液管總糖樣液管總糖樣液管樣液樣液/ml01.01.0水水1.000dns試劑試劑/ml2.02.02.0沸水浴中準(zhǔn)確煮沸沸水浴中準(zhǔn)確煮沸5min，取出，用自來(lái)水冷卻至室溫，取出，用自來(lái)水冷卻至室溫蒸餾水蒸餾水/ml9.09.09.0a5405 5、數(shù)據(jù)處理與問(wèn)題、數(shù)據(jù)處理與問(wèn)題 5.1、計(jì)算濃度 5.