病毒與細胞間的相互作用

1、第四章第四章 病毒與細胞間的相互作用病毒與細胞間的相互作用第一節(jié)第一節(jié) 病毒的細胞培養(yǎng)病毒的細胞培養(yǎng)第二節(jié)第二節(jié) 病毒與細胞的相互作用病毒與細胞的相互作用第一節(jié)第一節(jié) 病毒的細胞培養(yǎng)病毒的細胞培養(yǎng) 病毒是嚴(yán)格的細胞內(nèi)寄生微生物，培養(yǎng)病毒是嚴(yán)格的細胞內(nèi)寄生微生物，培養(yǎng)病毒必須使用細胞。根據(jù)病毒的不同選用敏病毒必須使用細胞。根據(jù)病毒的不同選用敏感動物（感動物（動物接種動物接種）、雞胚（）、雞胚（雞胚接種雞胚接種）或）或離體細胞進行分離培養(yǎng)（離體細胞進行分離培養(yǎng)（細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)）。）。一、動物接種一、動物接種接種后通常以動物發(fā)病、死亡作為感染的指標(biāo)。接種后通常以動物發(fā)病、死亡作為感染的指標(biāo)。按病毒

2、侵襲部位不同選擇適當(dāng)按病毒侵襲部位不同選擇適當(dāng)?shù)慕臃N途徑。嗜神經(jīng)病毒接種的接種途徑。嗜神經(jīng)病毒接種在小鼠的腦內(nèi)。痘苗病毒和單在小鼠的腦內(nèi)。痘苗病毒和單純皰疹病毒接種于家兔角膜。純皰疹病毒接種于家兔角膜。動物接種的優(yōu)缺點：動物接種的優(yōu)缺點：優(yōu)點：優(yōu)點：（1）不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備；不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備； （2）技術(shù)簡單；）技術(shù)簡單； （3）易成功）易成功缺點：缺點：（1）個體差異大）個體差異大 （2）價格昂貴）價格昂貴 （3）數(shù)量有限）數(shù)量有限 （4）需要隔離畜舍）需要隔離畜舍二、雞胚接種二、雞胚接種一種比較經(jīng)濟簡便的方法。一種比較經(jīng)濟簡便的方法。卵殼卵殼殼膜殼膜雞胚接種的優(yōu)缺點：雞胚接種的優(yōu)缺點

3、：優(yōu)點：優(yōu)點：技術(shù)簡單、來源充沛、價格低廉、數(shù)量可大，技術(shù)簡單、來源充沛、價格低廉、數(shù)量可大， 不需特殊設(shè)備不需特殊設(shè)備 缺點：缺點：很多病毒不能適應(yīng)，主要是哺乳動物的病毒。很多病毒不能適應(yīng)，主要是哺乳動物的病毒。 細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)(cell culture)是指利用機械、酶或化學(xué)方法使是指利用機械、酶或化學(xué)方法使動物組織或傳代細胞分散成單個乃至動物組織或傳代細胞分散成單個乃至24個細胞團懸個細胞團懸液進行培養(yǎng)。液進行培養(yǎng)。 三、細胞培養(yǎng)三、細胞培養(yǎng)n每個細胞生理特性基本一致，對病毒易感性相每個細胞生理特性基本一致，對病毒易感性相等等n無個體差異，準(zhǔn)確性和重復(fù)性好無個體差異，準(zhǔn)確性和重復(fù)性好n

4、可嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作可嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作n細胞培養(yǎng)本身就能顯示病毒的生長特征細胞培養(yǎng)本身就能顯示病毒的生長特征n應(yīng)用空斑技術(shù)可進行病毒的克隆化應(yīng)用空斑技術(shù)可進行病毒的克隆化優(yōu)點：優(yōu)點：根據(jù)細胞來源、染色體特征及傳代次數(shù)，可分為三種類型：根據(jù)細胞來源、染色體特征及傳代次數(shù)，可分為三種類型：n原代細胞：原代細胞：動物組織經(jīng)胰蛋白酶消化處理，使細胞分散動物組織經(jīng)胰蛋白酶消化處理，使細胞分散而得到的細胞。而得到的細胞。n二倍體細胞：二倍體細胞：將長成單層的原代細胞消化分散成單個細將長成單層的原代細胞消化分散成單個細胞，繼續(xù)培養(yǎng)傳代，其染色體數(shù)與原代細胞一樣，保持其胞，繼續(xù)培養(yǎng)傳代，其染色體數(shù)與原代細胞一樣

5、，保持其二倍染色體數(shù)目的細胞，稱為二倍體細胞。二倍染色體數(shù)目的細胞，稱為二倍體細胞。n傳代細胞：傳代細胞：能在體外持續(xù)增殖傳代的細胞，大多數(shù)由癌能在體外持續(xù)增殖傳代的細胞，大多數(shù)由癌細胞或二倍體細胞突變而成。細胞或二倍體細胞突變而成。（一）細胞的類型（一）細胞的類型（二）細胞培養(yǎng)的方法（二）細胞培養(yǎng)的方法靜置培養(yǎng)：靜置培養(yǎng)：實驗室常用。細胞懸液裝瓶，實驗室常用。細胞懸液裝瓶，5%co2溫箱靜置培養(yǎng)，細胞沉降并貼附在玻面溫箱靜置培養(yǎng)，細胞沉降并貼附在玻面上生長分裂，最后長成單層。上生長分裂，最后長成單層。旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)：旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)：大規(guī)模生產(chǎn)疫苗。細胞在玻瓶內(nèi)生大規(guī)模生產(chǎn)疫苗。細胞在玻瓶內(nèi)生長時，玻瓶不

6、斷緩慢旋轉(zhuǎn)，細胞貼附于玻瓶四周，長時，玻瓶不斷緩慢旋轉(zhuǎn)，細胞貼附于玻瓶四周，長成單層。長成單層。第二節(jié)第二節(jié) 病毒與細胞的相互作用病毒與細胞的相互作用n殺細胞感染殺細胞感染n非殺細胞感染非殺細胞感染 引致持續(xù)感染，對細胞代謝無影響。引致持續(xù)感染，對細胞代謝無影響。n產(chǎn)生干擾素產(chǎn)生干擾素 由病毒感染導(dǎo)致的細胞損傷。由病毒感染導(dǎo)致的細胞損傷。cpecpe能在光學(xué)顯微鏡下觀察。能在光學(xué)顯微鏡下觀察。細胞圓縮，如痘病毒和呼腸孤病毒等；細胞圓縮，如痘病毒和呼腸孤病毒等；細胞聚合，如腺病毒；細胞聚合，如腺病毒；細胞融合形成合胞體，如副粘病毒和皰疹病毒；細胞融合形成合胞體，如副粘病毒和皰疹病毒；有些病毒能形

7、成包涵體有些病毒能形成包涵體。 一、病毒引致的殺細胞變化一、病毒引致的殺細胞變化（一）細胞病變效應(yīng)（一）細胞病變效應(yīng)( (cytopathic effect,cytopathic effect,cpecpe) )正常細胞正常細胞cpecpe觀察觀察正常單層正常單層a72a72細胞細胞接種接種ccvccv后出現(xiàn)細胞拉網(wǎng)后出現(xiàn)細胞拉網(wǎng)的的單層的的單層a72a72細胞細胞cpe觀察觀察cpe觀察正常單層正常單層a72a72細胞細胞接種犬冠狀病毒（接種犬冠狀病毒（ccvccv）后形后形成合胞體的的單層成合胞體的的單層a72a72細胞細胞合胞體（合胞體（syncytia）是病毒感染后導(dǎo)致感染細胞及相鄰細

8、胞細胞膜是病毒感染后導(dǎo)致感染細胞及相鄰細胞細胞膜融合的產(chǎn)物，表現(xiàn)為若干細胞的相鄰細胞膜消失，成為多核巨細胞。融合的產(chǎn)物，表現(xiàn)為若干細胞的相鄰細胞膜消失，成為多核巨細胞。 能夠使半數(shù)組織細胞在一定條件下發(fā)生細能夠使半數(shù)組織細胞在一定條件下發(fā)生細胞病變的病毒量。用于判定病毒的毒力胞病變的病毒量。用于判定病毒的毒力。50%50%組織細胞感染量（組織細胞感染量（tcidtcid5050）（二）空斑試驗（二）空斑試驗將適當(dāng)濃度的病毒懸液加入單層細胞培養(yǎng)將適當(dāng)濃度的病毒懸液加入單層細胞培養(yǎng)中，當(dāng)病毒吸附細胞后，再覆蓋一層融化中，當(dāng)病毒吸附細胞后，再覆蓋一層融化的瓊脂。病毒在細胞內(nèi)復(fù)制后產(chǎn)生局限性的瓊脂。病

9、毒在細胞內(nèi)復(fù)制后產(chǎn)生局限性病灶，病灶逐漸擴大，肉眼也能看見，此病灶，病灶逐漸擴大，肉眼也能看見，此即即空斑試驗空斑試驗?？瞻呤怯梢粋€感染性病毒粒子復(fù)制形成的，類似于細菌的菌落，空斑是由一個感染性病毒粒子復(fù)制形成的，類似于細菌的菌落，稱為稱為空斑形成單位（空斑形成單位（pfu）。病毒懸液中的感染性病毒量以每病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升含有的毫升含有的pfu來表示。來表示。 cells空斑試驗的用途：空斑試驗的用途：1. 測定病毒數(shù)量測定病毒數(shù)量2. 純化病毒純化病毒 單個空斑作懸液，梯度稀釋后再作空斑，單個空斑作懸液，梯度稀釋后再作空斑，可獲得病毒克隆?？色@得病毒克隆。3. 鑒定病毒鑒定病毒

10、 不同病毒的空斑具有不同的特征。不同病毒的空斑具有不同的特征。（三）包涵體（三）包涵體（inclusion body)定義：定義：是某些病毒感染細胞產(chǎn)生的特征性的是某些病毒感染細胞產(chǎn)生的特征性的形態(tài)變化，在普通光學(xué)顯微鏡下可見胞漿或形態(tài)變化，在普通光學(xué)顯微鏡下可見胞漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)的呈嗜酸性或嗜堿性染色、大小胞核內(nèi)出現(xiàn)的呈嗜酸性或嗜堿性染色、大小數(shù)量不等的圓形或不規(guī)則形的團塊狀結(jié)構(gòu)，數(shù)量不等的圓形或不規(guī)則形的團塊狀結(jié)構(gòu)，稱為包涵體。稱為包涵體。包涵體的性質(zhì)包涵體的性質(zhì)n病毒成分的蓄積，如狂犬病毒的病毒成分的蓄積，如狂犬病毒的negri氏體氏體n大量晶格樣排列的病毒顆粒組成，如腺病毒大量晶格樣排列

11、的病毒顆粒組成，如腺病毒的包涵體的包涵體n細胞變性的產(chǎn)物，不含病毒，如皰疹病毒的細胞變性的產(chǎn)物，不含病毒，如皰疹病毒的包涵體包涵體狂犬病毒包涵體（狂犬病毒包涵體（negri body）定義：定義：由病毒或誘生劑刺激機體細胞產(chǎn)生的具有抗病毒、由病毒或誘生劑刺激機體細胞產(chǎn)生的具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的糖蛋白?？鼓[瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的糖蛋白。 種類：種類：、干擾素。干擾素?？共《咀饔茫嚎共《咀饔茫焊蓴_素不直接作用于病毒，而是作用于干擾素不直接作用于病毒，而是作用于鄰近的細胞，使其產(chǎn)生抗病毒蛋白，這些抗病毒蛋白降鄰近的細胞，使其產(chǎn)生抗病毒蛋白，這些抗病毒蛋白降解病毒解病毒mrna、抑制蛋白合成。、抑制蛋白合成。干擾素作用具有宿主特異性，而無病毒特異性。干擾素作用具有宿主特異性，而無病毒特