動(dòng)物細(xì)胞工程PPT課件

1、1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體制備單克隆抗體制備細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植動(dòng)物動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程工程技術(shù)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工程的動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)基礎(chǔ)34（一）、概念（一）、概念 是指從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)取出是指從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)相關(guān)的組織，的組織，將它分散成將它分散成單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞，然后放在，然后放在適宜的適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)生長(zhǎng)和和增殖增殖。（二）、原理（二）、原理細(xì)胞分裂增殖細(xì)胞分裂增殖6（三）、過(guò)程（三）、過(guò)程幼齡動(dòng)物幼齡動(dòng)物剪碎組織剪碎組織原代細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng)取動(dòng)物器官取動(dòng)物器官和組織和組織細(xì)胞懸浮液細(xì)胞懸浮液傳代細(xì)胞培養(yǎng)傳代細(xì)胞培養(yǎng)胰蛋

2、白酶處理胰蛋白酶處理單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞胰蛋白酶處理胰蛋白酶處理單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞7歸納歸納過(guò)程過(guò)程取取 的組織、器官的組織、器官細(xì)胞懸浮液細(xì)胞懸浮液 酶酶 貼滿(mǎn)瓶壁的細(xì)胞貼滿(mǎn)瓶壁的細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞加入加入 液液動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物胰蛋白胰蛋白培養(yǎng)培養(yǎng)接觸抑制接觸抑制原代原代 培養(yǎng)培養(yǎng)1-10代細(xì)胞代細(xì)胞8遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì) 改變改變?cè)?xì)胞原代細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)加加 液液4050代細(xì)胞代細(xì)胞(細(xì)胞株細(xì)胞株)未未遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì) 改變改變無(wú)限傳代（無(wú)限傳代（細(xì)胞系細(xì)胞系）已已傳代傳代培養(yǎng)培養(yǎng)胰蛋白胰蛋白 酶酶 9有關(guān)概念有關(guān)概念v原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞從機(jī)體取出后立

3、即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。一般培養(yǎng)的第為原代細(xì)胞。一般培養(yǎng)的第1 1代細(xì)胞與傳代細(xì)胞與傳1010代以?xún)?nèi)的細(xì)胞稱(chēng)為原代細(xì)胞培養(yǎng)。代以?xún)?nèi)的細(xì)胞稱(chēng)為原代細(xì)胞培養(yǎng)。v傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱(chēng)為傳代培養(yǎng)。上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱(chēng)為傳代培養(yǎng)。10有關(guān)概念有關(guān)概念細(xì)胞株：細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至原代細(xì)胞一般傳至1010代左右細(xì)胞代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到活到40504050代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。代

4、，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。 細(xì)胞系：細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至細(xì)胞株傳代至5050代后又出現(xiàn)細(xì)胞代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無(wú)限制傳代，這改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無(wú)限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。 細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別： 細(xì)胞系的遺傳物細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。容易傳代培養(yǎng)。11細(xì)胞接觸抑制細(xì)胞接觸抑制 細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)過(guò)程細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)過(guò)程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增

5、加，最后形成一個(gè)不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停止，觸，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停止，數(shù)量不再增加。數(shù)量不再增加。1213思考題：思考題：1 1、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？2 2、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？因?yàn)檫@些組織或器官，分裂能力旺盛，易于培養(yǎng)。因?yàn)檫@些組織或器官，分裂能力旺盛，易于培養(yǎng)。成塊組織使細(xì)胞靠在一起限制了細(xì)胞的生長(zhǎng)和成塊組織使細(xì)胞靠在一起限制了細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，且細(xì)胞不能與培養(yǎng)液充分接

6、觸，不利于增殖，且細(xì)胞不能與培養(yǎng)液充分接觸，不利于培養(yǎng)。培養(yǎng)。143、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說(shuō)明細(xì)胞間、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說(shuō)明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成份？的物質(zhì)是什么成份？催化蛋白質(zhì)水解。細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋催化蛋白質(zhì)水解。細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)白質(zhì)( (膠原蛋白等膠原蛋白等) )。4、細(xì)胞膜的主要成份是什么？、細(xì)胞膜的主要成份是什么？蛋白質(zhì)和磷脂蛋白質(zhì)和磷脂5、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？能能156 6、既然、既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉，那，那將動(dòng)物將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞要組織分散成單個(gè)細(xì)胞要注意什么問(wèn)題呢？注意什么問(wèn)題呢？

7、7 7、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？注意時(shí)間的控制注意時(shí)間的控制 不能，因?yàn)閮烧叩淖钸m不能，因?yàn)閮烧叩淖钸mphph不同，而正常組織不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適phph較接近較接近161 1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境 保證細(xì)胞保證細(xì)胞順利的生順利的生長(zhǎng)增殖長(zhǎng)增殖 添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清等。機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清等。（四）、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條

8、件（四）、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件2 2、營(yíng)養(yǎng)、營(yíng)養(yǎng)173 3、溫度和、溫度和phph 培養(yǎng)室中控制培養(yǎng)室中控制, ,使之達(dá)到使之達(dá)到36.5 36.5 0.5, 7.27.4 0.5, 7.27.4培養(yǎng)箱中提供培養(yǎng)箱中提供o o2 2和和coco2 2（95%95%空氣和空氣和5% co5% co2 2 ）4 4、氣體環(huán)境、氣體環(huán)境：18（五）、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（五）、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（3）細(xì)胞的生理、藥理、病理研究）細(xì)胞的生理、藥理、病理研究 （1） 培養(yǎng)健康細(xì)胞用于燒傷病人皮膚移植培養(yǎng)健康細(xì)胞用于燒傷病人皮膚移植（2） 基因工程的受體細(xì)胞基因工程的受體細(xì)胞19資料一：資料一：20

9、培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞可以用于培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞可以用于檢測(cè)有毒物質(zhì)檢測(cè)有毒物質(zhì)。許。許多致畸、致癌物質(zhì)加入培養(yǎng)液后，培養(yǎng)細(xì)胞會(huì)發(fā)多致畸、致癌物質(zhì)加入培養(yǎng)液后，培養(yǎng)細(xì)胞會(huì)發(fā)生染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目的變異。根據(jù)變異細(xì)胞占全生染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目的變異。根據(jù)變異細(xì)胞占全部培養(yǎng)細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，可以判斷某種物質(zhì)的毒性。部培養(yǎng)細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，可以判斷某種物質(zhì)的毒性。現(xiàn)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)已經(jīng)成為檢測(cè)有毒物質(zhì)的快速現(xiàn)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)已經(jīng)成為檢測(cè)有毒物質(zhì)的快速而靈敏的有效手段。而靈敏的有效手段。 資料二：資料二：21人工關(guān)節(jié)人工關(guān)節(jié)軟骨再生軟骨再生1.1.第一次手第一次手術(shù)術(shù): : 從從病人病人關(guān)節(jié)軟骨關(guān)節(jié)軟骨中未中未 受力的部分，取出一片

10、受力的部分，取出一片約為約為葡萄葡萄干干大大小的健康小的健康軟軟骨骨組織組織。2.2.分分離軟離軟骨骨細(xì)胞并經(jīng)細(xì)胞并經(jīng)三星期的三星期的體體外外 培培養(yǎng)養(yǎng)，使，使細(xì)胞數(shù)細(xì)胞數(shù)增加增加約約10102020倍。倍。3.3.第二次手第二次手術(shù)術(shù): : 清理清理軟軟骨受骨受損損的部分，的部分，從從下方骨下方骨頭頭部位取出一片部位取出一片約與傷約與傷口口大大小相同的骨膜，小相同的骨膜，縫縫在在傷傷口上方，再口上方，再將將軟軟骨骨細(xì)胞細(xì)胞注射到骨膜下方。注射到骨膜下方。資料三：資料三：結(jié)果結(jié)果: : 經(jīng)過(guò)復(fù)健經(jīng)過(guò)復(fù)健一年一年后后即可即可恢復(fù)恢復(fù)正常的生活。正常的生活。22植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較植物

11、組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理原理細(xì)胞的細(xì)胞的 細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)基特有培養(yǎng)基特有成分成分 、植物激素、植物激素 葡萄糖、葡萄糖、 培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)果植物體植物體培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的快速繁殖、培育快速繁殖、培育無(wú)病毒植株無(wú)病毒植株獲得獲得全能性全能性增殖增殖蔗糖蔗糖動(dòng)物動(dòng)物血清血清細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞細(xì)胞, ,某些某些蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)2324dolley.swf我的文我的文檔檔桌面桌面dolley.swf25（一）、動(dòng)物細(xì)胞核移植的概念：（一）、動(dòng)物細(xì)胞核移植的概念： 動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞

12、細(xì)胞核核, ,移入一個(gè)已經(jīng)去移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中中. .使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎, ,這個(gè)這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體. .克隆動(dòng)物：用核移植的方法得到的動(dòng)物?？寺?dòng)物：用核移植的方法得到的動(dòng)物。26（二）、分類(lèi)：（二）、分類(lèi)：胚胎細(xì)胞核移植胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易全能性容易 細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)全能性困難全能性困難27去核去核卵細(xì)卵細(xì)胞胞供體供體細(xì)胞細(xì)胞電刺激使電刺激使兩細(xì)胞融兩細(xì)胞融合合重組細(xì)胞重組細(xì)胞重組胚胎重

13、組胚胎新個(gè)體新個(gè)體代孕母牛代孕母牛c胚胎移植胚胎移植卵細(xì)卵細(xì)胞培胞培養(yǎng)養(yǎng)無(wú)性生殖無(wú)性生殖（三）、體細(xì)胞的核移植過(guò)程（三）、體細(xì)胞的核移植過(guò)程高產(chǎn)奶牛高產(chǎn)奶牛a供體供體細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)供卵奶牛供卵奶牛b28（四）、體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景（四）、體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景 1、在畜牧業(yè)中可以加速家畜遺傳改良的進(jìn)程、在畜牧業(yè)中可以加速家畜遺傳改良的進(jìn)程2、保護(hù)瀕危物種、保護(hù)瀕危物種3、生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)、生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)及組織器官的移植的及組織器官的移植的供體供體29（五）、體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題（五）、體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題 1、克隆動(dòng)物基因組重新編程的機(jī)制尚不清楚。、克隆動(dòng)物基因組重新編程

14、的機(jī)制尚不清楚。2、克隆技術(shù)效率低，畸形率高、死亡率高、易出、克隆技術(shù)效率低，畸形率高、死亡率高、易出 現(xiàn)早衰等問(wèn)題?，F(xiàn)早衰等問(wèn)題。3、生產(chǎn)克隆動(dòng)物費(fèi)用昂貴。、生產(chǎn)克隆動(dòng)物費(fèi)用昂貴。30二二 動(dòng)物體細(xì)胞核移植動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物）技術(shù)和克隆動(dòng)物）一動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)概念概念過(guò)程過(guò)程原理原理應(yīng)用概念概念過(guò)程過(guò)程應(yīng)用存在問(wèn)題體細(xì)胞體細(xì)胞核移植核移植胚胎細(xì)胞胚胎細(xì)胞核移植核移植31 2 2、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是細(xì)胞是 （ ） a a獲得不死性的細(xì)胞獲得不死性的細(xì)胞 b b1010代以?xún)?nèi)細(xì)胞代以?xún)?nèi)細(xì)胞 c c原代細(xì)胞原代

15、細(xì)胞 d d傳代細(xì)胞傳代細(xì)胞1 1、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是 （ ） a.a.動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合 b.b.單克隆抗體單克隆抗體 c.c.胚胎移植胚胎移植 d.d.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)a ad d課堂反饋練習(xí)課堂反饋練習(xí)323 3、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述中正確的是：、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述中正確的是：（ ）a a、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的只是為了獲得大量的細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的只是為了獲得大量的細(xì)胞 分泌蛋白分泌蛋白b b、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細(xì)胞分散、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細(xì)胞分散c c、細(xì)胞的癌變發(fā)生在原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過(guò)渡、細(xì)胞的癌變發(fā)生

16、在原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過(guò)渡 過(guò)程中過(guò)程中d d、培養(yǎng)至、培養(yǎng)至5050代后傳代細(xì)胞遺傳物質(zhì)沒(méi)有發(fā)生改變代后傳代細(xì)胞遺傳物質(zhì)沒(méi)有發(fā)生改變b b334 4、一般說(shuō)來(lái)，動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要滿(mǎn)足以下條件（、一般說(shuō)來(lái)，動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要滿(mǎn)足以下條件（ ）無(wú)毒的環(huán)境無(wú)毒的環(huán)境 無(wú)菌的環(huán)境無(wú)菌的環(huán)境 培養(yǎng)基需要加入血培養(yǎng)基需要加入血清清 溫度與動(dòng)物體溫相似溫度與動(dòng)物體溫相似 需要需要o o2 2，不需要，不需要coco2 2 coco2 2能調(diào)節(jié)培養(yǎng)液能調(diào)節(jié)培養(yǎng)液phpha a、 b b、 c c、 d d、 d d345 5、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn) （ ）細(xì)胞貼壁細(xì)胞貼壁 有絲分裂有絲分

17、裂 細(xì)胞分化細(xì)胞分化 接觸抑制接觸抑制 減數(shù)分裂減數(shù)分裂 原代培養(yǎng)一般傳原代培養(yǎng)一般傳1 11010代代a a、 b b、c c、 d d、a a6 6、下圖是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過(guò)程示意圖。請(qǐng)據(jù)、下圖是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過(guò)程示意圖。請(qǐng)據(jù)此回答：此回答：（1 1）容器）容器a a中放置的是動(dòng)物器官或組織。它一中放置的是動(dòng)物器官或組織。它一般取自般取自_。（2 2）容器）容器a a中的動(dòng)物器官或組織首先要進(jìn)行的中的動(dòng)物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是處理是 ，然后用，然后用 酶處理，酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開(kāi)來(lái)，這樣做的目的這是為了使細(xì)胞分散開(kāi)來(lái)，這樣做的目的是是 。動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物動(dòng)物胚胎或幼齡

18、動(dòng)物剪碎剪碎胰蛋白胰蛋白使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，便于培養(yǎng)使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，便于培養(yǎng)（3 3）培養(yǎng)首先在）培養(yǎng)首先在b b瓶中進(jìn)行，瓶中的培養(yǎng)基成瓶中進(jìn)行，瓶中的培養(yǎng)基成分有分有 _等。在此瓶中培養(yǎng)等。在此瓶中培養(yǎng)一段時(shí)間后，有許多細(xì)胞衰老死亡，這是培養(yǎng)一段時(shí)間后，有許多細(xì)胞衰老死亡，這是培養(yǎng)到第到第 代，到這時(shí)的培養(yǎng)稱(chēng)為代，到這時(shí)的培養(yǎng)稱(chēng)為_(kāi) _ 。（4 4）為了把）為了把b b瓶中的細(xì)胞分裝到瓶中的細(xì)胞分裝到c c瓶中，用瓶中，用 處理，然后配置成處理，然后配置成 ，再，再分裝。分裝。 動(dòng)物血清動(dòng)物血清10原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)胰蛋白酶胰蛋白酶細(xì)胞懸浮液細(xì)胞懸浮液3738一、動(dòng)物細(xì)胞融合一、

19、動(dòng)物細(xì)胞融合 受精作用受精作用39動(dòng)物動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞融合融合40細(xì)胞細(xì)胞a細(xì)胞細(xì)胞b雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞滅活的病毒滅活的病毒物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程細(xì)胞核細(xì)胞核病毒顆粒病毒顆粒細(xì)胞核細(xì)胞核42細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)誘導(dǎo)劑：病毒、聚乙二醇誘導(dǎo)劑：病毒、聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合的病毒必須滅活。誘導(dǎo)細(xì)胞融合的病毒必須滅活。思考討論：為什么細(xì)胞融合過(guò)程中使用的思考討論：為什么細(xì)胞融合過(guò)程中使用的病毒需要滅活？病毒需要滅活？43二、單克隆抗體二、單克隆抗體什么是抗體？什么是抗體？ 抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生抗體是

20、機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。具有免疫功能的球蛋白。b淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。44b淋巴細(xì)胞與抗體淋巴細(xì)胞與抗體 b淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。抗體。 動(dòng)物體內(nèi)的動(dòng)物體內(nèi)的b淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬(wàn)淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬(wàn)種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗原具有種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。特異性免疫作用。 每一個(gè)淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。每一個(gè)淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。45單克隆抗體單克隆抗體 由單個(gè)由單個(gè)b淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖（克隆

21、），形成基因型相同的細(xì)胞群，（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱(chēng)為單克隆抗體。異性強(qiáng)的抗體稱(chēng)為單克隆抗體。 特點(diǎn)特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高特異性強(qiáng)、靈敏度高 4647 單克隆抗體制備過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程 注射抗原注射抗原b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體48如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？如何大量生

22、產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞49思考：思考：1、本過(guò)程利用了哪些原理？、本過(guò)程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與b細(xì)胞融合？細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙

23、親細(xì)胞的遺傳這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有物質(zhì)，不僅具有b細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無(wú)細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無(wú)限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，靈敏度高異性強(qiáng)，靈敏度高。應(yīng)用主要有：應(yīng)用主要有：1、臨床診斷、臨床診斷2、作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成、作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”治療腫治療腫瘤瘤資料資料：目前世界各國(guó)已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗目前世界各國(guó)已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體

24、。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個(gè)內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個(gè)必然趨勢(shì)。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定必然趨勢(shì)。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位體內(nèi)位體內(nèi)“病灶病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。蹤及心肌梗塞的診斷。植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原

25、理細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性、 細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法 去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法物理（離心、振蕩、物理（離心、振蕩、電刺激）電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒用途用途獲得雜種植株獲得雜種植株制備單克隆抗體制備單克隆抗體52小結(jié)小結(jié)兩個(gè)過(guò)程兩個(gè)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程三個(gè)三個(gè)“一一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法 滅活

26、病毒滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異性一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)53 下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中、圖中b為為_(kāi)過(guò)程，常用過(guò)程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承承_的遺傳特性，既能的遺傳特性，既能_,又能又能_。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是_3、a是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生該細(xì)胞能夠產(chǎn)

27、生_5、c過(guò)程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過(guò)程包括過(guò)程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過(guò)程包括_培養(yǎng)和培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個(gè)階段，其培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中中_代以?xún)?nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。代以?xún)?nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。制備單克隆抗體制備單克隆抗體b細(xì)胞細(xì)胞抗體抗體細(xì)胞融合細(xì)胞融合滅活病毒滅活病毒雙親細(xì)胞雙親細(xì)胞分泌抗體分泌抗體無(wú)限增殖無(wú)限增殖原代原代傳代傳代50b體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔ac541.動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）a動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合b胚胎移植胚胎移植c動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)d核移植核移植55在動(dòng)物細(xì)

28、胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正在動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）確的是（）a結(jié)果是相同的結(jié)果是相同的b雜種細(xì)胞的形成過(guò)程基本相同雜種細(xì)胞的形成過(guò)程基本相同c操作過(guò)程中酶的作用相同操作過(guò)程中酶的作用相同d誘導(dǎo)融合的手段相同誘導(dǎo)融合的手段相同56. 單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（ ） 淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞b淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞a bc d c57( (20062006年北京卷年北京卷1 1題）以下不能說(shuō)明細(xì)胞全能性的題）以下不能說(shuō)明細(xì)胞全能性的 實(shí)驗(yàn)是實(shí)驗(yàn)是a.a.胡蘿卜韌皮部細(xì)胞培育出植株胡蘿卜韌皮部細(xì)胞培育出植株b.b.紫色糯性王米種子培育出植株紫色糯性王米種子培育出植株 c.c.轉(zhuǎn)入抗蟲(chóng)基因的棉花細(xì)胞培育出植株轉(zhuǎn)