瓊脂擴散實驗課件

1、瓊脂擴散實驗實驗十三實驗十三 瓊脂擴散試驗瓊脂擴散試驗瓊脂擴散實驗一、實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康?學(xué)習(xí)掌握瓊脂擴散試驗的原理與應(yīng)用學(xué)習(xí)掌握瓊脂擴散試驗的原理與應(yīng)用 熟悉掌握其基本操作方法熟悉掌握其基本操作方法瓊脂擴散實驗二、實驗原理二、實驗原理 沉淀反應(yīng)是指沉淀反應(yīng)是指可溶性抗原可溶性抗原與相應(yīng)抗體特異與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，在二者性結(jié)合，在二者比例適當(dāng)比例適當(dāng)并有并有電解質(zhì)電解質(zhì)存在存在及一定的及一定的溫度條件溫度條件下，可形成肉眼可見的下，可形成肉眼可見的沉淀物的反應(yīng)。沉淀物的反應(yīng)。 根據(jù)反應(yīng)中使用的介質(zhì)和檢測方法不同，根據(jù)反應(yīng)中使用的介質(zhì)和檢測方法不同，可將沉淀反應(yīng)分為可將沉淀反應(yīng)分為液相沉淀反

2、應(yīng)液相沉淀反應(yīng)和和凝膠內(nèi)凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)兩種類型兩種類型瓊脂擴散實驗適合比例性適合比例性抗體含量抗體含量抗原含量抗原含量前帶前帶后帶后帶等價帶等價帶瓊脂擴散實驗網(wǎng)格學(xué)說網(wǎng)格學(xué)說（lattice theory）抗體過?？乖^?？贵w抗體比例合適瓊脂擴散實驗液相沉淀反應(yīng)液相沉淀反應(yīng) 環(huán)狀沉淀環(huán)狀沉淀 絮狀沉淀（免疫比濁）絮狀沉淀（免疫比濁）瓊脂擴散實驗瓊脂擴散實驗?zāi)z內(nèi)沉淀反應(yīng)凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng) 單向瓊脂擴散單向瓊脂擴散 雙向瓊脂擴散雙向瓊脂擴散 免疫電泳免疫電泳瓊脂擴散實驗?zāi)z內(nèi)沉淀反應(yīng)凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)免疫擴散技術(shù)免疫擴散技術(shù)免疫電泳技術(shù)免疫電泳技術(shù)單向擴散試驗單向擴散試驗雙向擴散試驗雙向擴散試驗

3、火箭電泳火箭電泳對流電泳對流電泳免疫電泳免疫電泳瓊脂擴散實驗瓊脂擴散實驗免疫擴散免疫擴散瓊脂擴散實驗瓊脂擴散實驗瓊脂擴散實驗 根據(jù)沉淀線的數(shù)量、位置和形狀，根據(jù)沉淀線的數(shù)量、位置和形狀，與已知的標(biāo)準(zhǔn)與已知的標(biāo)準(zhǔn)(或正?；蛘?抗原抗體形抗原抗體形成的沉淀線比較，即可對樣品中所成的沉淀線比較，即可對樣品中所含成分及其性質(zhì)進行分析、鑒定。含成分及其性質(zhì)進行分析、鑒定。瓊脂擴散實驗 由于電場的作用，限制了抗原、抗體的由于電場的作用，限制了抗原、抗體的自由擴散，而使其定向泳動，因而增加自由擴散，而使其定向泳動，因而增加了試驗的靈敏度，并縮短反應(yīng)時間。了試驗的靈敏度，并縮短反應(yīng)時間。瓊脂擴散實驗 根據(jù)樣品的沉淀峰長度即可計算出待測根據(jù)樣品的沉淀峰長度即可計算出待測抗原的含量；反之，當(dāng)瓊脂中抗原濃度抗原的含量；反之，當(dāng)瓊脂中抗原濃度固定時，便可測定待測抗體的含量。固定時，便可測定待測抗體的含量。瓊脂擴散實驗瓊脂擴散實驗三、實驗器材三、實驗器材 兔抗兔抗BSA抗體抗體 BSA 0.01mol/LPBS緩沖液緩沖液 1%離子瓊脂離子瓊脂 打孔器打孔器瓊脂擴散實驗四、實驗內(nèi)容及步驟四、實驗內(nèi)容及步驟 1、瓊脂板制作、瓊脂板制作 2、打孔、打孔 3、加樣、加樣 4、