南醫(yī)大藥物分析第12章__喹啉與青蒿素類抗瘧藥物的分析

1、練習(xí)與思考練習(xí)與思考v請(qǐng)采用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)方法將鹽酸氯丙嗪（A）、癸氟奮乃靜（B）和奮乃靜（C）三種藥物區(qū)分開。練習(xí)與思考練習(xí)與思考v鹽酸氯丙嗪片的含量測(cè)定：取本品（標(biāo)示量為25mg/片）10片，去糖衣后精密稱定，重0.5130g，研細(xì)，稱取片粉0.0206g，置100mL量瓶中，加鹽酸溶液（9-1000）70mL，振搖使鹽酸氯丙嗪溶解，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5mL，置100mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，于254nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度為0.453，按百分吸收系數(shù)E=915計(jì)算每片的含量。藥物分析藥物分析第十二章第十二章 喹啉與青蒿素類喹啉與青蒿素類抗瘧藥物的分析抗瘧藥物的

2、分析教學(xué)目的與要求教學(xué)目的與要求 v 掌握喹啉與青蒿素類抗瘧疾藥物的鑒別試驗(yàn)和含量測(cè)定方法。v 掌握喹啉與青蒿素類抗瘧疾藥物的基本結(jié)構(gòu)和主要性質(zhì)。v 了解喹啉與青蒿素類抗瘧疾藥物的雜質(zhì)檢查要求。第一節(jié)第一節(jié):喹啉類藥物結(jié)構(gòu)特征喹啉類藥物結(jié)構(gòu)特征喹啉類喹啉類藥物藥物吡吡啶啶苯苯環(huán)環(huán)稠和稠和而成而成NOH3CNHHOHCHHCH22H2SO42H2O硫酸奎寧典型典型藥物藥物pKa 8.8,可與強(qiáng)酸成鹽pKa 4.2,不與硫酸成鹽典型典型藥物藥物NOH3CNHHOHCHHCH2二鹽酸奎寧2HCl典型典型藥物藥物NNNNNNClCl4H3PO44H2O磷酸哌喹典型典型藥物藥物NHNCH3ClNCH3C

3、H32H3PO4磷酸氯喹典型典型藥物藥物磷酸咯磷酸咯萘啶萘啶NNClOCH3NHOHNN4H3PO4典型典型藥物藥物CH3NNNH2OH3CH2H3PO4磷酸伯氨喹主要主要性質(zhì)性質(zhì)堿性堿性含有含有N原子原子,一般都有堿性一般都有堿性旋光性旋光性含有手性原子含有手性原子,一般都有旋光性一般都有旋光性熒光特性熒光特性具有平面共軛結(jié)構(gòu)具有平面共軛結(jié)構(gòu),一般具有熒光一般具有熒光紫外吸收紫外吸收光譜特性光譜特性吡啶與苯環(huán)具有共軛結(jié)構(gòu)吡啶與苯環(huán)具有共軛結(jié)構(gòu),也有紫也有紫外吸收光譜特性外吸收光譜特性1. 1.堿性堿性 奎寧、奎尼丁：二元酸硫酸（喹核堿含脂環(huán)氮，堿性強(qiáng)） 奎寧 (左旋體)：pKb1為5.07

4、pKb2為9.7，飽和水溶液pH為8.8，易溶于氯仿無(wú)水乙醇(2:1) 奎尼丁 (右旋體)：pKb1為5.4pKb2為10，易溶于沸水或乙醇喹核堿上的N原子具有堿性，與強(qiáng)酸成鹽主要化學(xué)性質(zhì)主要化學(xué)性質(zhì)主要化學(xué)性質(zhì)主要化學(xué)性質(zhì)主要化學(xué)性質(zhì)主要化學(xué)性質(zhì)3.熒光特性硫酸奎寧和二鹽酸奎寧在稀硫酸中顯藍(lán)色熒光。4.紫外吸收光譜特征 含有吡啶與苯稠合而成的喹啉雜環(huán)，具有共軛體系（一）、綠奎寧反應(yīng)（Thalleioquin） 含氧喹啉衍生物的特征反應(yīng)，奎寧和奎尼丁鑒別NHONHOClCl2Cl2NOClClNH3NNNONH4O二醌基亞胺的胺鹽（綠色）u 取其水溶液加溴試液23滴和氨試液1ml，即顯翠綠色；

5、u 加酸至中性顯藍(lán)色；u 酸性則呈紫紅色；u 翠綠色可轉(zhuǎn)溶于醇、氯仿中不溶于醚。v 奎尼丁奎尼丁NOH3CNHHOHCHHCH22H2SO42H2O硫酸奎寧（二）、光譜特征（二）、光譜特征 UV磷酸氯喹：取本品，加0.01mol/L鹽酸溶液制成每1ml中含10g的溶液，照紫外-可見分光光度法測(cè)定，在222，257，329 nm與343nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。 熒光光譜 FLD硫酸奎寧：取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸性，即顯藍(lán)色熒光。IR 紅外光譜也可以應(yīng)用于鑒別 （三）基于無(wú)機(jī)酸鹽的鑒別（三）基于無(wú)機(jī)酸鹽的鑒別硫酸鹽硫酸鹽加加BaCl2生成白色沉淀生成白

6、色沉淀不溶于鹽酸和稀硝酸不溶于鹽酸和稀硝酸加醋酸鉛生成白色沉淀加醋酸鉛生成白色沉淀溶于醋酸銨或溶于醋酸銨或NaOH加加HCl不產(chǎn)生沉淀（區(qū)不產(chǎn)生沉淀（區(qū)別于硫代硫酸鹽）別于硫代硫酸鹽）（三）基于無(wú)機(jī)酸鹽的鑒別（三）基于無(wú)機(jī)酸鹽的鑒別氯化物氯化物加稀硝酸和硝酸加稀硝酸和硝酸銀生成白色凝乳銀生成白色凝乳狀沉淀狀沉淀加銨試液溶解加銨試液溶解,加硝酸再沉淀加硝酸再沉淀加二氧化錳產(chǎn)生加二氧化錳產(chǎn)生氯氣使氯氣使KI試紙遇試紙遇淀粉變藍(lán)淀粉變藍(lán)（三）基于無(wú)機(jī)酸鹽的鑒別（三）基于無(wú)機(jī)酸鹽的鑒別磷酸鹽磷酸鹽反應(yīng)反應(yīng)加硝酸銀生成淺加硝酸銀生成淺黃色沉淀黃色沉淀在銨試液或稀硝在銨試液或稀硝酸中均易溶解酸中均易溶解加

7、氯化銨鎂生成加氯化銨鎂生成白色結(jié)晶性沉淀白色結(jié)晶性沉淀加鉬酸銨試液與硝酸后加鉬酸銨試液與硝酸后,加熱生成黃色沉淀加熱生成黃色沉淀在銨試液中溶解在銨試液中溶解一、硫酸奎寧一、硫酸奎寧奎寧從金雞納樹皮中提取，提取分離過(guò)程中可能帶入其他金雞納堿雜質(zhì)。臨床上使用的藥物為硫酸奎寧片和二鹽酸奎寧注射劑。硫酸鹽硫酸鹽難溶于難溶于水水二鹽酸二鹽酸鹽水溶鹽水溶性好性好一、硫酸奎寧一、硫酸奎寧1.酸度酸性雜質(zhì) 取本品0.2g，加水20ml溶解后，測(cè)定pH值應(yīng)為5.76.6 。 2.氯仿乙醇不溶物 取本品2g，加氯仿無(wú)水乙醇 (2:1) 的混合液15ml，在50加熱10min后，用稱定重量的垂熔坩堝濾過(guò)，濾渣用上述

8、混合液分5 次洗滌，每次10ml ，在105 干燥至恒重，遺留殘?jiān)坏眠^(guò)2mg。 3.其他金雞納堿 (TLC、HPLC)主成分自身對(duì)照法或?qū)φ掌穼?duì)照法，規(guī)定限度為0.5%垂熔坩堝v 垂熔坩堝也叫砂芯坩堝，是一種坩堝式濾器，用玻璃粉壓制成砂芯濾板，適用定量分析對(duì)實(shí)驗(yàn)物可作過(guò)濾，干燥，稱量的聯(lián)合操作。造型為一只上口大下口小無(wú)底的錐形杯，在杯內(nèi)的下截部位焊有一片砂芯片，或稱為濾片，代替濾紙作過(guò)濾溶液用，濾片孔徑有粗細(xì)之分，1 號(hào)最粗，6 號(hào)最細(xì)，除砂芯濾片粗細(xì)區(qū)分之外，還有容量大小之分。由于它的底是平的，適合對(duì)過(guò)濾后滯留在砂芯片上的殘?jiān)苯右坪嫦鋬?nèi)干燥，稱量時(shí)也可直接放入天平上稱量。 1.酸度 取本

9、品1.0g，加水25ml溶解，測(cè)定pH值應(yīng)大于2.4。 2.水中不溶物 取本品加水溶解后，稍放置即有黃色不溶物產(chǎn)生,影響品質(zhì).3.氯化物 系生產(chǎn)工藝帶入.檢查時(shí)為了避免溶液顏色干擾, 先加堿使咯萘啶沉淀析出, 過(guò)濾后進(jìn)行檢查. 磷酸咯萘啶的純度檢查磷酸咯萘啶的純度檢查磷酸咯萘啶的純度檢查磷酸咯萘啶的純度檢查紫色紫色硫酸奎寧硫酸奎寧含量測(cè)定含量測(cè)定非水溶液非水溶液滴定法滴定法CHPUSPHPLC法法體內(nèi)測(cè)定體內(nèi)測(cè)定注意樣品注意樣品處理處理 硫酸奎寧測(cè)定硫酸奎寧測(cè)定 硫酸奎寧測(cè)定硫酸奎寧測(cè)定v見示例12-8v每1mL高氯酸滴定液（0.1mol/L)相當(dāng)于19.75mg的（C20H24N2O2) H

10、2SO4H2O。v1mol硫酸奎寧消耗4mol高氯酸。硫酸奎寧片的含量測(cè)定硫酸奎寧片的含量測(cè)定P321硫酸奎寧片的含量測(cè)定硫酸奎寧片的含量測(cè)定 硫酸奎寧片的含量測(cè)定硫酸奎寧片的含量測(cè)定 USPHPLC法法甲磺酸的作用甲磺酸的作用?醋酸的作用醋酸的作用?乙二胺的作用乙二胺的作用?硫酸奎寧片的含量測(cè)定硫酸奎寧片的含量測(cè)定 Ion-Pair 原理原理測(cè)定雜環(huán)類藥物中吡啶類、喹啉類等藥物時(shí)，主要采用烷基測(cè)定雜環(huán)類藥物中吡啶類、喹啉類等藥物時(shí)，主要采用烷基磺酸鹽（如戊烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉）或其他鹽類?；撬猁}（如戊烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉）或其他鹽類。pH3.5BH+C7H15SO2O-BH+C7H15SO2

11、O-影響條件：影響條件：流動(dòng)相一般呈酸性，以利于生物堿的離解；離子對(duì)試劑的非流動(dòng)相一般呈酸性，以利于生物堿的離解；離子對(duì)試劑的非極性部分越大，形成的離子對(duì)分配系數(shù)越大，保留時(shí)間越長(zhǎng)極性部分越大，形成的離子對(duì)分配系數(shù)越大，保留時(shí)間越長(zhǎng)（十二烷基磺酸鈉庚烷磺酸鈉戊烷磺酸鈉）。（十二烷基磺酸鈉庚烷磺酸鈉戊烷磺酸鈉）。第二節(jié)第二節(jié): :青蒿素類藥物的分析青蒿素類藥物的分析v 青蒿素又名黃蒿素,是我國(guó)從菊花科植物青蒿中提取分離得到的一個(gè)含過(guò)氧基團(tuán)的新型倍半萜內(nèi)酯。青蒿素是一種高效、速效、低毒的新型抗瘧藥。研究歷史研究歷史:資料來(lái)源于資料來(lái)源于baidu 中國(guó)抗瘧新藥的研究源于1967年成立的五二三項(xiàng)目，

12、其全稱為中國(guó)瘧疾研究協(xié)作項(xiàng)目，成立于1967年的5月23日,因絕密軍事項(xiàng)目,遂設(shè)代號(hào)523。 研究歷史研究歷史:資料來(lái)源于資料來(lái)源于baidu 歷經(jīng)380多次鼠瘧篩選，1971年10月取得中藥青蒿素篩選的成功。1972年從中藥青蒿中分離得到抗瘧有效單體，命名為青蒿素，對(duì)鼠瘧、猴瘧的原蟲抑制率達(dá)到100%。 1973年經(jīng)臨床研究取得與實(shí)驗(yàn)室一致的結(jié)果、抗瘧新藥青蒿素由此誕生。 研究歷史研究歷史:資料來(lái)源于資料來(lái)源于baidu 1981年10月在北京召開的由世界衛(wèi)生組織主辦的“青蒿素”國(guó)際會(huì)議上，中國(guó)青蒿素的化學(xué)研究的發(fā)言，引起與會(huì)代表極大的興趣，并認(rèn)為“這一新的發(fā)現(xiàn)更重要的意義是在于將為進(jìn)一步設(shè)

13、計(jì)合成新藥指出方向”。 1986年，青蒿素獲得新一類新藥證書，雙氫青蒿素也獲一類新藥證書。這些成果分別獲得國(guó)家發(fā)明獎(jiǎng)和全國(guó)十大科技成就獎(jiǎng)。 研究歷史研究歷史:資料來(lái)源于資料來(lái)源于baidu 2011年9月，中國(guó)女藥學(xué)家屠呦呦因創(chuàng)制新型抗瘧藥青蒿素和雙氫青蒿素的貢獻(xiàn)，獲得被譽(yù)為諾貝爾獎(jiǎng)“風(fēng)向標(biāo)”的拉斯克獎(jiǎng)。這是中國(guó)生物醫(yī)學(xué)界迄今為止獲得的世界級(jí)最高級(jí)大獎(jiǎng)。 研究歷史研究歷史:資料來(lái)源于資料來(lái)源于baidu 屠呦呦，女，屠呦呦，女，1930年年12月月30日生，藥學(xué)家，日生，藥學(xué)家，中國(guó)中醫(yī)研究院終身研究員兼首席研究員，中國(guó)中醫(yī)研究院終身研究員兼首席研究員，青蒿素研究開發(fā)中心主任。青蒿素研究開發(fā)中

14、心主任。1980年聘為碩士年聘為碩士生導(dǎo)師，生導(dǎo)師，2001年聘為博士生導(dǎo)師。多年從事年聘為博士生導(dǎo)師。多年從事中藥和中西藥結(jié)合研究，突出貢獻(xiàn)是創(chuàng)制新中藥和中西藥結(jié)合研究，突出貢獻(xiàn)是創(chuàng)制新型抗瘧藥型抗瘧藥青蒿素和雙氫青蒿素。青蒿素和雙氫青蒿素。研究歷史研究歷史:資料來(lái)源于資料來(lái)源于baidu 填補(bǔ)了華人十年未填補(bǔ)了華人十年未獲此獎(jiǎng)的空白，也獲此獎(jiǎng)的空白，也造就了第一位在中造就了第一位在中國(guó)獨(dú)立完成研究的國(guó)獨(dú)立完成研究的獲獎(jiǎng)?wù)?。獲獎(jiǎng)?wù)摺?研究歷史研究歷史:很遺憾的事情很遺憾的事情 這個(gè)藥物雖然由我國(guó)發(fā)現(xiàn),但我國(guó)卻沒(méi)有取得專利.因此,雖然這個(gè)藥物每年在全球產(chǎn)生巨大的效益,但我國(guó)還是處于原料供應(yīng)的地

15、位,而這個(gè)地位還受到嚴(yán)重威脅.遺憾遺憾青蒿素類藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)青蒿素類藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)OCH3HHHOOCH3H3COO青蒿素青蒿素類藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)青蒿素類藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)OCH3HHHOOCH3H3COHHO雙氫青蒿素是青蒿素經(jīng)還原制得，同時(shí)也是青蒿琥酯的體內(nèi)活性代謝物質(zhì)青蒿素類藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)青蒿素類藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)OCH3HHHOOCH3H3COOHOHOO青蒿琥酯是青蒿素的水溶性衍生物青蒿素類藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)青蒿素類藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)OCH3HHHOOCH3H3COOHCH3蒿甲醚是青蒿素的脂溶性衍生物青蒿素類藥物化學(xué)性質(zhì)青蒿素類藥物化學(xué)性質(zhì)氧化性氧化性過(guò)氧橋鍵具有氧化性過(guò)氧橋鍵具有氧化性旋光性旋光性

16、手性原子手性原子,具有旋光性具有旋光性紫外吸收特性紫外吸收特性環(huán)狀結(jié)構(gòu)雖然不具有共軛特性環(huán)狀結(jié)構(gòu)雖然不具有共軛特性,但取代基具有一定吸收特性但取代基具有一定吸收特性水解反應(yīng)水解反應(yīng)青蒿素結(jié)構(gòu)中有內(nèi)酯，在堿性條件青蒿素結(jié)構(gòu)中有內(nèi)酯，在堿性條件下水解，其余藥物結(jié)構(gòu)中沒(méi)有內(nèi)酯，下水解，其余藥物結(jié)構(gòu)中沒(méi)有內(nèi)酯，不發(fā)生水解不發(fā)生水解青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)呈色反應(yīng)呈色反應(yīng)過(guò)氧橋鍵具有氧化性過(guò)氧橋鍵具有氧化性酸性條件下能將碘離子氧化酸性條件下能將碘離子氧化成碘與淀粉指示液顯藍(lán)紫色成碘與淀粉指示液顯藍(lán)紫色青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)羥肟酸羥肟酸鐵反應(yīng)鐵反應(yīng)含內(nèi)酯的化合物、

17、羧酸衍生物和含內(nèi)酯的化合物、羧酸衍生物和一些酯類化合物在堿性條件下與一些酯類化合物在堿性條件下與羥胺反應(yīng)生成羥肟酸。在稀酸溶羥胺反應(yīng)生成羥肟酸。在稀酸溶液中與高鐵離子呈色液中與高鐵離子呈色顯紫色顯紫色例：青蒿素、例：青蒿素、青蒿琥酯青蒿琥酯青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)香草醛香草醛-硫酸反應(yīng)硫酸反應(yīng)使分子中的羧基脫水，增加雙鍵結(jié)構(gòu)，再使分子中的羧基脫水，增加雙鍵結(jié)構(gòu)，再經(jīng)雙鍵位移，雙分子縮合反應(yīng)生成其軛系經(jīng)雙鍵位移，雙分子縮合反應(yīng)生成其軛系統(tǒng)，在酸作用下形成陽(yáng)碳離子鹽而顯色統(tǒng)，在酸作用下形成陽(yáng)碳離子鹽而顯色ChP青蒿琥酯的鑒別：取本品約青蒿琥酯的鑒別：取本品約50mg，加三氯甲烷

18、加三氯甲烷1mL溶解后，取溶解后，取34滴置白瓷滴置白瓷板上，等三氯甲烷揮發(fā)后，加板上，等三氯甲烷揮發(fā)后，加2%香草醛硫香草醛硫酸溶液酸溶液1滴，顯滴，顯紅色紅色。青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)吸收光譜特征吸收光譜特征紅外，與標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照紅外，與標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照紫外，取代基末端吸收紫外，取代基末端吸收以資鑒別以資鑒別青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)色譜法色譜法HPLC法法保留時(shí)間定性保留時(shí)間定性青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)純度檢查純度檢查HPLC法法TLC法法青蒿素是以天然藥材分離提取為主，青蒿素是以天然藥材分離提取為主，藥品中通常存在結(jié)構(gòu)類似的有關(guān)物藥品

19、中通常存在結(jié)構(gòu)類似的有關(guān)物質(zhì)質(zhì)青蒿素類藥物的含量測(cè)定青蒿素類藥物的含量測(cè)定HPLC法法青蒿素類藥物的體內(nèi)藥物分析青蒿素類藥物的體內(nèi)藥物分析HPLC/MS/MS注意樣品處理注意樣品處理練習(xí)與思考練習(xí)與思考v1、用溶劑提取后非水溶液滴定法測(cè)定奎寧、用溶劑提取后非水溶液滴定法測(cè)定奎寧片的含量時(shí)，片的含量時(shí)，1mol的硫酸奎寧可消耗高氯的硫酸奎寧可消耗高氯酸的摩爾數(shù)是酸的摩爾數(shù)是vA、0.5molvB、1molvC、2molvD、3molvE、4mol練習(xí)與思考練習(xí)與思考v2、非水溶液滴定法測(cè)定硫酸奎寧原料藥的、非水溶液滴定法測(cè)定硫酸奎寧原料藥的含量時(shí)，含量時(shí)，1mol的硫酸奎寧可消耗高氯酸的硫酸奎寧可消耗高氯酸的摩爾數(shù)是的摩爾數(shù)是vA、0.5molvB、1molvC、2molvD、3molvE、4mol練習(xí)與思考練習(xí)與思考v3、具有綠奎寧反應(yīng)的藥物是、具有綠奎寧反應(yīng)的藥物