地中海貧血基因檢測在臨床診斷上的應(yīng)用課件

1、地中海貧血基因檢測在地中海貧血基因檢測在臨床診斷上的應(yīng)用臨床診斷上的應(yīng)用 2主主 要要 內(nèi)內(nèi) 容容1背景介紹背景介紹產(chǎn)品介紹產(chǎn)品介紹地中海貧血地中海貧血地中海貧血，又稱海洋性貧血，是一種常見的單基因遺傳性病。廣泛分布在全世界沿海地區(qū)。中國常見于東南沿海、西南地區(qū)以及臺灣地區(qū)。地中海貧血的分布地中海貧血的分布 地中海貧血是全球最大的單基因遺傳病之一中國南方地中海貧血人群攜帶率中國南方地中海貧血人群攜帶率 地區(qū)地區(qū)攜帶率攜帶率(%)(%) 地貧地貧 地貧地貧 廣東廣東 8.53 2.54 廣西廣西 14.95 6.78 四川四川 1.92 2.18 臺灣臺灣 4.20 1.10 香港香港 5.02

2、 3.41xu, et al. j clin pathol 2004, 57:517-22. cai, et al. chi j epidemiol 2002,23:281-5. 廣東省人群中廣東省人群中 地貧的攜帶者頻率地貧的攜帶者頻率 基因變異基因變異等位基因數(shù)等位基因數(shù)頻率頻率(%)(%) 地貧染色體地貧染色體4788.53 (- sea) 缺失缺失2324.14 (- 3.7) 缺失缺失1743.10 (- 4.2) 缺失缺失530.95 (- cs) 突變突變100.18 (-thai) 缺失缺失20.04 (- qs) 突變突變20.04 (-11.1) 缺失缺失10.02 1cd

3、118 (+tca)10.02 - -gene 缺失缺失10.02 未知突變未知突變20.04 基因變異基因變異等位基因數(shù)等位基因數(shù)頻率頻率(%)(%) 地貧染色體地貧染色體1982.54 cds 41-42 (-cttt)720.92 ivs-2-654 (ct)490.63 28 (ag)330.42 cd 26 (ga)100.13 cd 17 (at)80.10 cds 71-72 (+a)70.09 cd 43 (gt)70.09 -29 (ag)40.05 cds 27-28 (+a)40.05 -gene deletion10.01 未知突變未知突變30.04廣東省人群中廣東省人

4、群中 地貧的攜帶者頻率地貧的攜帶者頻率 地中海貧血地中海貧血 地中海貧血的共同特點是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成，致使血紅蛋白的組成成分改變。 地中海貧血分為-地中海貧血和-地中海貧血。人類不同時期血紅蛋白的組成人類不同時期血紅蛋白的組成胚胎期血紅蛋白： hb gower 1 （x2 e2 ） hb gower 2 (2 e2) hb portland (x2 g2) 即hb portland 1 另有少量hb portland 2 (x2 2)，hb portland 3 (x2 d2)胎兒期主要血紅蛋白： hbf （2 g2 ） 成人主要血紅蛋

5、白成人主要血紅蛋白： hba （ 2 2）約占血紅蛋白總量96.597.5% hba2 （2 d2 ） 約占血紅蛋白總量2.53.5% hbf （ 2 g2）約占血紅蛋白總量1%以下。地中海貧血基因檢測在臨床診斷上的應(yīng)用10 -地中海貧血地中海貧血l-地中海貧血（簡稱-地貧）是一種由于-珠蛋白基因突變導(dǎo)致肽鏈表達失衡而產(chǎn)生的單基因遺傳血液病。l多由-珠蛋白基因的缺失突變所致。l研究發(fā)現(xiàn)中國地區(qū)常見的3種缺失型 -地貧主要由 -sea、-3.7、 -4.2缺失(左缺失）引起。-地貧基因缺失示意圖地貧基因缺失示意圖-3.7-4.2-sea 2 1211 a地貧的基因型與表現(xiàn)型地貧的基因型與表現(xiàn)型n

6、ormal (/) 正常正常 靜止型靜止型-單一單一基因缺失或喪失功能基因缺失或喪失功能 臨床無任何癥狀，一般血液學檢查無異樣，僅平均紅細胞體積(mcv) 位于正常值下限。-地貧的基因型與表現(xiàn)型地貧的基因型與表現(xiàn)型 o thal trait( /-sea)( - / - )血紅蛋白血紅蛋白h病病3個個基因缺失或喪失功能基因缺失或喪失功能 肝脾腫大，中度貧血。小細胞，低色素，hbh含量較高，易發(fā)生溶血，有些病例需不定期輸血， 癥重者甚至需切除脾臟。 標準型標準型2個個基因缺失或喪失功能基因缺失或喪失功能 臨床無癥狀，血液學檢查出現(xiàn)輕微貧血，紅細胞大小不均一，平均紅細胞體積(mcv) 及平均血紅蛋

7、白含量(mch)明顯偏低。hb h disease(- 3.7/-sea)(- 4.2/-sea)-地貧的基因型與表現(xiàn)型地貧的基因型與表現(xiàn)型hb barts hydrops(-sea/-sea)hb bartshb barts胎兒水腫綜合癥胎兒水腫綜合癥 l4個基因缺失或喪失功能l胎兒于妊娠晚期或產(chǎn)后數(shù)小時內(nèi)死亡，全身水腫，肝脾腫大。l由于胎兒無法合成亞基，臍血血紅蛋白（ hb barts ，g4）含量高。非缺失型非缺失型-地貧地貧n 概念：概念： 基因發(fā)生點突變或少數(shù)幾個堿基的缺失。n 中國常見的非缺失型突變：中國常見的非缺失型突變：hb cs 2 cd 142 taacaa (gln) t

8、erminator mutation hb qs 2 cd 125 ctgccg (leupro) unstable hbhb ws 2 cd 122 caccag (hisgln) unstable hbn 特點特點： 常發(fā)生于2基因，比缺失型導(dǎo)致更嚴重的珠蛋白鏈合成的減少。 -地中海貧血地中海貧血-地中海貧血是一種由于-珠蛋白基因突變導(dǎo)致肽鏈合成減少或缺乏而產(chǎn)生的單基因遺傳血液病，多由-珠蛋白基因點突變所致。 在中國人群中常見的突變位點有cd41-42m， -28m， ivs-ii-654m，cd71-72m等 -地貧突變類型地貧突變類型編碼區(qū)的移碼突變、無義突變和起始密碼突變：如cd41

9、-42，cd71-72 ，cd17突變后形成終止子，表現(xiàn)為0。 非編碼區(qū)ivs-1和ivs-2突變?nèi)鏸vs-ii-654突變影響mrna的拼接，表現(xiàn)為。影響轉(zhuǎn)錄的突變：如-28，-29的突變影響基因的轉(zhuǎn)錄，表現(xiàn)為 。 -地貧的基因型與表現(xiàn)型地貧的基因型與表現(xiàn)型 重型重型 -地中海貧血地中海貧血 所有患者有組織缺氧癥狀，可出現(xiàn)“地中海貧血面容”，生長發(fā)育遲緩。紅細胞體積小且低色素。過剩的游離鏈形成鏈包涵體，引起溶血性貧血，靠輸血維持生命。/ 、0/ 0 、0/ （純合子或雙重雜合子） 輕型輕型 -地中海貧血地中海貧血 患者癥狀較輕，輕度貧血，輕度肝脾腫大。紅細胞脆性降低，小細胞，低色素，mcv、

10、mch較低。a/ 、a/ 0 （雜合子） -地貧的基因型與表現(xiàn)型地貧的基因型與表現(xiàn)型 中間型中間型 -地中海貧血地中海貧血 患者臨床癥狀介于重型和輕型之間，如中度偏重貧血，生長發(fā)育遲緩，黃疸等。血液檢查呈小細胞低色素貧血癥。/ 、/ 0 （純合子或雙重雜合子）地中海貧血基因檢測產(chǎn)品介紹地中海貧血基因檢測產(chǎn)品介紹 n根據(jù)-地貧基因缺失特點，利用多重gap-pcr技術(shù)可同管檢測3種缺失型及正常共4種基因型。通過電泳條帶大小來判斷缺失情況。n操作簡便快捷，結(jié)果直觀可靠。 -地中海貧血基因檢測試劑盒地中海貧血基因檢測試劑盒 -地中海貧血基因診斷操作流程地中海貧血基因診斷操作流程-地貧產(chǎn)品特點地貧產(chǎn)品特

11、點m dna markers1. ( / - 3.7) 2.0kb; 1.7kb2. ( / ) 1.7kb 3. ( / - 4.2) 1.7kb; 1.4kb4. (/-sea ) 1.7kb; 1.2kb5. (- 3.7 /-sea ) 2.0kb; 1.2kb m 1 2 3 4 5 m 1、對-地貧進行基因確診，結(jié)果準確可靠；2、同時檢測3種-地貧缺失型： -3.7、-4.2和sea；3、可檢出無臨床癥狀的靜止型-地貧（-3.7、-4.2）；4、讀取結(jié)果時可以與markers一一對應(yīng)，防止結(jié)果誤判。臨床意義臨床意義n 對-地貧患者進行基因確診。n 可廣泛用于-地貧的篩查，對-地貧基

12、因缺陷攜帶者進行鑒別，對于減少和防止重癥地貧兒的出生及優(yōu)生優(yōu)育具有重要的臨床意義。 -地中海貧血點突變基因檢測試劑盒地中海貧血點突變基因檢測試劑盒n 同時檢測 cs、 qs、 ws點突變wild typecsmwsmqsmn 臨床意義：臨床意義： 作為 -地中海貧血三種缺失型的補充，對懷疑 -地中海貧血有漏診的患者進行 cs、 qs、 ws點突變的診斷，確定具體的基因突變類型-地中海貧血基因檢測試劑盒地中海貧血基因檢測試劑盒利用基因芯片技術(shù)可以同時檢測中國人群8個常見位點和9個少見位點共17個位點的19種 -地貧基因突變類型 t和和 -地中海貧血基因診斷操作流程地中海貧血基因診斷操作流程-地中海貧血基因診斷結(jié)果判讀地中海貧血基因診斷結(jié)果判讀41-42n654n28n71-72n17nen31n27/28m41-42m654m28m71-72m17mem31mivs1-1m43m32m29m30m14-15mcapmi