急性毒性試驗(yàn)

1、 研究動物一次或在研究動物一次或在24小時(shí)內(nèi)多次小時(shí)內(nèi)多次給予受試物后，一定時(shí)間內(nèi)所產(chǎn)給予受試物后，一定時(shí)間內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。生的毒性反應(yīng)。觀察藥物毒性及其毒性靶器官觀察藥物毒性及其毒性靶器官為其它安全性試驗(yàn)的劑量和觀察項(xiàng)目的為其它安全性試驗(yàn)的劑量和觀察項(xiàng)目的設(shè)計(jì)提供信息設(shè)計(jì)提供信息為為i i期臨床起始劑量的設(shè)計(jì)提供信息期臨床起始劑量的設(shè)計(jì)提供信息藥物安全性研究中首先進(jìn)行的試驗(yàn)藥物安全性研究中首先進(jìn)行的試驗(yàn)嚙齒類嚙齒類 非嚙齒類非嚙齒類（發(fā)現(xiàn)毒理學(xué)研究）（發(fā)現(xiàn)毒理學(xué)研究）急性毒性試驗(yàn)的基本要求急性毒性試驗(yàn)的基本要求 嚙齒類嚙齒類兩種動物兩種動物 非嚙齒類非嚙齒類兩種性別兩種性別兩種給藥途徑兩

2、種給藥途徑l兩種動物：充分暴露受試物毒性, 若未采用非嚙齒類動物進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)，應(yīng)闡明其合理性。l兩種給藥途徑：通常，給藥途徑應(yīng)至少包括臨床擬用途徑和一種能使原形藥物較完全進(jìn)入循環(huán)的途徑（如靜脈注射）。如果臨床擬用途徑為靜脈給藥，則僅此一種途徑即可。動物選擇動物選擇 種類種類對受試物敏感的動物對受試物敏感的動物嚙齒類和非嚙齒類各一種嚙齒類和非嚙齒類各一種非嚙齒類動物種類應(yīng)與長期毒性試驗(yàn)一非嚙齒類動物種類應(yīng)與長期毒性試驗(yàn)一致致動物選擇動物選擇 年齡年齡通常選用健康成年動物通常選用健康成年動物 小鼠小鼠 5-65-6周齡周齡 大鼠大鼠 6-86-8周齡周齡 犬犬 6-86-8月齡月齡 猴猴 3-

3、43-4歲歲擬用于兒童的藥物可選用幼年動物擬用于兒童的藥物可選用幼年動物給藥途徑給藥途徑如臨床擬用靜脈給藥則可僅此一種途徑如臨床擬用靜脈給藥則可僅此一種途徑一般采用臨床給藥途徑加上靜脈給藥兩一般采用臨床給藥途徑加上靜脈給藥兩個(gè)途徑個(gè)途徑如不能靜脈給藥可改為其它途徑如不能靜脈給藥可改為其它途徑劑量劑量化學(xué)藥物最高劑量化學(xué)藥物最高劑量 靜脈給藥：靜脈給藥：2 2 g/kgg/kg 口服給藥：口服給藥：2-5 2-5 g/kgg/kg臨床擬用劑量的臨床擬用劑量的100-300100-300倍倍給藥容量：各劑量組應(yīng)按等容量，不等濃給藥容量：各劑量組應(yīng)按等容量，不等濃 度的給藥原則度的給藥原則最大給藥容

4、量：可參考相關(guān)的文獻(xiàn)最大給藥容量：可參考相關(guān)的文獻(xiàn)口服（包括灌胃）給藥前通常禁食過夜口服（包括灌胃）給藥前通常禁食過夜（至少小鼠（至少小鼠3-4 h3-4 h），但不禁水，給藥后），但不禁水，給藥后仍需禁食仍需禁食2-4 h2-4 h（小鼠（小鼠1-2 1-2 h h）原因：原因： 胃內(nèi)容影響給藥容積胃內(nèi)容影響給藥容積 胃內(nèi)容可能會影響藥物的吸收胃內(nèi)容可能會影響藥物的吸收觀察期限觀察期限一般給藥后連續(xù)觀察一般給藥后連續(xù)觀察1414天天如給藥第如給藥第2 2周內(nèi)發(fā)生動物死亡或出現(xiàn)新的周內(nèi)發(fā)生動物死亡或出現(xiàn)新的毒性反應(yīng)時(shí)，應(yīng)延長觀察期限毒性反應(yīng)時(shí)，應(yīng)延長觀察期限觀察終點(diǎn)觀察終點(diǎn) 死亡死亡 明顯毒性

5、征狀明顯毒性征狀觀察指標(biāo)觀察指標(biāo)死亡情況死亡情況體重等一般情況體重等一般情況征狀（征狀（signsign） 癥狀癥狀( (symptom)symptom)實(shí)驗(yàn)室等檢查實(shí)驗(yàn)室等檢查病理指標(biāo)病理指標(biāo)病理學(xué)檢查病理學(xué)檢查 所有動物（計(jì)劃處死、瀕死、死亡）都所有動物（計(jì)劃處死、瀕死、死亡）都應(yīng)進(jìn)行大體解剖應(yīng)進(jìn)行大體解剖 大體解剖發(fā)現(xiàn)異常時(shí)應(yīng)進(jìn)行組織病理學(xué)大體解剖發(fā)現(xiàn)異常時(shí)應(yīng)進(jìn)行組織病理學(xué)檢查檢查動物動物 種類：非嚙齒類種類：非嚙齒類 數(shù)量：一般數(shù)量：一般6 6只只觀察終點(diǎn)：死亡觀察終點(diǎn)：死亡劑量：劑量： 根據(jù)文獻(xiàn)和嚙齒類動物急性毒性試驗(yàn)結(jié)根據(jù)文獻(xiàn)和嚙齒類動物急性毒性試驗(yàn)結(jié)果，估計(jì)可能出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)到

6、發(fā)生果，估計(jì)可能出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)到發(fā)生死亡的劑量范圍，按死亡的劑量范圍，按50%50%遞增法列出劑量遞增法列出劑量序列表序列表方法：方法： 選取劑量序列表中的某個(gè)區(qū)段，每個(gè)劑選取劑量序列表中的某個(gè)區(qū)段，每個(gè)劑量（也可每隔一個(gè)劑量）給一個(gè)動物量（也可每隔一個(gè)劑量）給一個(gè)動物結(jié)果：結(jié)果： 近似致死劑量范圍近似致死劑量范圍最高非致死劑量與最高非致死劑量與最低致死劑量間的范圍最低致死劑量間的范圍動物動物種類：非嚙齒類種類：非嚙齒類數(shù)量：數(shù)量：8 8只只性別：雌、雄各半性別：雌、雄各半分組：分對照、給藥分組：分對照、給藥2 2組組觀察終點(diǎn)：死亡觀察終點(diǎn)：死亡劑量：劑量： 1 1、3 3、1010、303

7、0、100100、300300、10001000、3000 3000 mg/kgmg/kg 或或1010、2020、4040、8080、160160、320320、640640、1280 1280 mg/kgmg/kg方法：方法： 從低劑量開始，隔日給予下一劑量，從低劑量開始，隔日給予下一劑量，直至動物死亡直至動物死亡結(jié)果結(jié)果無動物死亡：無動物死亡：mldmld（minimum lethal dose 最小致死劑量）和和ldld5050大于最高劑量大于最高劑量某一劑量動物全部死亡：某一劑量動物全部死亡：mldmld和和ldld5050在該在該劑量和前一劑量間劑量和前一劑量間某一劑量動物部分死亡

8、，某一劑量動物部分死亡，mldmld在該劑量和在該劑量和前一劑量間，前一劑量間，ldld5050位于首次出現(xiàn)死亡和全位于首次出現(xiàn)死亡和全部動物死亡的劑量間部動物死亡的劑量間結(jié)果結(jié)果如無動物死亡，常以最高劑量給予動物如無動物死亡，常以最高劑量給予動物5-75-7天，以確定后續(xù)的重復(fù)給藥試驗(yàn)中高天，以確定后續(xù)的重復(fù)給藥試驗(yàn)中高劑量的選擇劑量的選擇適用條件適用條件在合理的最大給藥濃度和合理的最大給在合理的最大給藥濃度和合理的最大給藥容量的條件下仍達(dá)不到上述劑量要求藥容量的條件下仍達(dá)不到上述劑量要求更高的劑量所產(chǎn)生的信息不具有更進(jìn)一更高的劑量所產(chǎn)生的信息不具有更進(jìn)一步的價(jià)值步的價(jià)值方法方法一般使用一般

9、使用10-2010-20只動物只動物連續(xù)觀察連續(xù)觀察1414天天結(jié)果結(jié)果無動物死亡無動物死亡mldmld大于限度劑量大于限度劑量動物死亡動物死亡50%- 限度劑量限度劑量動物死亡動物死亡50%50%需要重新設(shè)置限度劑量或改用其需要重新設(shè)置限度劑量或改用其他方法他方法經(jīng)典的急性毒性實(shí)驗(yàn)方法經(jīng)典的急性毒性實(shí)驗(yàn)方法ldld5050值的意義值的意義用于比較藥物毒性大小用于比較藥物毒性大小用于計(jì)算用于計(jì)算titi（治療指數(shù)）（治療指數(shù)）ldld5050/ed/ed5050為設(shè)置為設(shè)置i i期臨床試驗(yàn)的起始劑量提供依據(jù)期臨床試驗(yàn)的起始劑量提供依據(jù)ldld5050法的不足法的不足動物用量大動物用量大觀察重點(diǎn)

10、觀察重點(diǎn)死亡死亡 ldld5050值受較多因素的影響，差別可達(dá)值受較多因素的影響，差別可達(dá)2.442.44 8.388.38倍倍 ldld5050的意義不如的意義不如noaelnoael和和mldmld動物動物種類：小鼠種類：小鼠體重：體重：1818 22 g/22 g/只只分組：一般分組：一般6 6組組每組動物數(shù)：每組動物數(shù)：1010 2020只（每組動物數(shù)相只（每組動物數(shù)相等）等）性別：雌、雄各半性別：雌、雄各半劑量組劑量組最高劑量：達(dá)到或接近使動物最高劑量：達(dá)到或接近使動物100%100%死亡死亡最低劑量：達(dá)到或接近動物最低劑量：達(dá)到或接近動物0%0%死亡死亡中間設(shè)中間設(shè)3 3個(gè)劑量組個(gè)

11、劑量組另設(shè)對照組另設(shè)對照組劑距：劑距：0.600.60 0.900.90，常用，常用0.70 0.70 0.80.8 各組間成等比級數(shù)各組間成等比級數(shù)給藥容量：給藥容量：0.2 0.2 mlml10gbw10gbw灌胃最大容量可達(dá)灌胃最大容量可達(dá)0.8 0.8 mlml/ /只只觀察觀察觀察期觀察期1414天天觀察重點(diǎn)：死亡觀察重點(diǎn)：死亡體重體重征狀征狀結(jié)果：分性別根據(jù)各劑量組的死亡率用結(jié)果：分性別根據(jù)各劑量組的死亡率用blissbliss法計(jì)算法計(jì)算ldld5050動物：首選大鼠動物：首選大鼠劑量：劑量：5 5、5050、500500和和2000 2000 mg/kgmg/kg觀察終點(diǎn)：明顯

12、的毒性反應(yīng)觀察終點(diǎn)：明顯的毒性反應(yīng)實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)： 預(yù)試預(yù)試 正式實(shí)驗(yàn)正式實(shí)驗(yàn)預(yù)試預(yù)試動物：雌性，每次動物：雌性，每次1 1只只劑量：根據(jù)資料選擇初試劑量或劑量：根據(jù)資料選擇初試劑量或500 500 mg/kg 2000 mg/kgmg/kg 2000 mg/kg 50 mg/kg 50 50 mg/kg 50和和500500的中間劑量的中間劑量 5 mg/kg5 mg/kg死亡存活死亡存活預(yù)試預(yù)試兩劑量間隔至少兩劑量間隔至少2424小時(shí)小時(shí)觀察期至少觀察期至少7 7天天正式實(shí)驗(yàn)正式實(shí)驗(yàn)動物：至少動物：至少1010只，雌、雄各半只，雌、雄各半劑量：根據(jù)預(yù)試，選擇可產(chǎn)生明顯毒性劑量：根據(jù)預(yù)試，選擇可

13、產(chǎn)生明顯毒性但不引起死亡的劑量但不引起死亡的劑量正式實(shí)驗(yàn)正式實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷結(jié)果判斷劑量劑量5505002000存活存活2000無嚴(yán)重急性無嚴(yán)重急性毒性危險(xiǎn)性毒性危險(xiǎn)性存活存活100%無無明顯毒性明顯毒性用用50 mg實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)用于用于500 mg實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)用用2000 mg實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)主要用于：主要用于：口服化學(xué)藥物的急性毒性試驗(yàn)口服化學(xué)藥物的急性毒性試驗(yàn)動物死亡發(fā)生于給藥后動物死亡發(fā)生于給藥后1 12 2天內(nèi)的藥物天內(nèi)的藥物優(yōu)點(diǎn)：節(jié)省動物優(yōu)點(diǎn)：節(jié)省動物動物動物種類：嚙齒類，一般選用大鼠種類：嚙齒類，一般選用大鼠性別：單一性別，一般選用雌性性別：單一性別，一般選用雌性周齡：實(shí)驗(yàn)時(shí)周齡：實(shí)驗(yàn)時(shí)8 8121

14、2周周實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)限度實(shí)驗(yàn)：適用于毒性可能較小的受試物限度實(shí)驗(yàn)：適用于毒性可能較小的受試物主實(shí)驗(yàn)：適用于估計(jì)有明顯毒性的受試物主實(shí)驗(yàn)：適用于估計(jì)有明顯毒性的受試物2000 mg/kg2000 mg/kg劑量水平限度試驗(yàn)劑量水平限度試驗(yàn)動物數(shù)：最多動物數(shù)：最多5 5只只方法：每次方法：每次1 1只動物給藥，量動物間隔只動物給藥，量動物間隔 48h48h，給藥后觀察，給藥后觀察1414d d2000 mg/kg2000 mg/kg試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果 x ooox ooo oxoxx ooxo oxoxx ooxo oxxx oxxoo oxxx oxxoo : : : :進(jìn)入主實(shí)驗(yàn)進(jìn)入主實(shí)驗(yàn) ld502

15、000 mg/kgld502000 mg/kg5000 mg/kg5000 mg/kg劑量水平限度試驗(yàn)劑量水平限度試驗(yàn)方法：方法： 結(jié)束結(jié)束 結(jié)果判斷：同結(jié)果判斷：同2000 2000 mg/kgmg/kg存活存活 全存活全存活非全存活非全存活動物數(shù)：動物數(shù)：1010只左右只左右劑量序表劑量序表 1.751.75、5.55.5、17.517.5、5555、175175、550550、2000 2000 mg/kgmg/kg 1.75 1.75、5.55.5、17.517.5、5555、175175、550550、17501750、5000 mg/kg5000 mg/kg給藥，每次一只動物給藥給藥，每次一只動物給藥起始劑量：序表中低于但接近起始劑量：序表中低于但接近ldld5050估計(jì)估計(jì)值的劑量，或從值的劑量，或從175 mg/kg175 mg