抗核糖體P蛋白及亞型抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡臨床診斷中的價(jià)值

1、抗核糖體P蛋白及亞型抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡臨床診斷中的價(jià)值 作者：李晶, 沈?yàn)] 賈汝琳, 王秀杰, 陳小三, 王大海, 朱雷, 遲曉峰 栗占國(guó)【摘要】 目的: 探討抗核糖體P蛋白(RibP)及亞型(RibP0、 P1和P2)抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)中的診斷價(jià)值。方法: 分別檢測(cè)375例SLE患者血清中的抗RibP、 P0、 P1和P2抗體, 分析抗RibP系列抗體在SLE診斷中的意義。結(jié)果: (1)抗RibP、 P0、 P1和P2抗體的敏感性分別為: 32.8%、 39.4%、 55.1%和37.4%, 特異性分別97.7%、 97.7%、 95.5%和94.9%。SLE患者血清中抗Rib

2、系列抗體的敏感性和特異性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(2)抗RibP0、 P1、 P2抗體在133例抗RibP抗體陰性的SLE中陽(yáng)性率分別為18.0%、 36.1%和15.8%?？筪sDNA抗體或抗Sm抗體陰性的SLE中有20.3%44.6%的抗RibP系列抗體呈陽(yáng)性。(3)抗RibP0, P1, P2蛋白抗體中陽(yáng)性組狼瘡精神損害的發(fā)生率均高于陰性組(P<0.05)。其中抗RibP和P2抗體陽(yáng)性組的發(fā)生率顯著高于陰性組(P<0.01)。結(jié)論: 抗RibP蛋白及亞型抗體均為SLE特異性的自身抗體, 該系列抗體對(duì)抗dsDNA抗體或抗Sm抗體陰性的SLE患者診斷有參考意義, 并且與狼瘡

3、精神損害相關(guān)。 【關(guān)鍵詞】 抗體; RibP, P0, P1, P2; 系統(tǒng)性紅斑狼瘡; 狼瘡精神損害系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus, SLE)是一種全身性的自身免疫病, 約有17%75%的SLE患者會(huì)出現(xiàn)中樞或周圍神經(jīng)系統(tǒng)受累1。SLE患者血清中可出現(xiàn)多種自身抗體, 目前已知的特異性自身抗體如抗Sm抗體、 抗dsDNA抗體、 抗核小體抗體等, 這些抗體對(duì)SLE的診斷具有重要意義, 但這些抗體對(duì)于狼瘡精神損害方面的提示作用較小。以往研究提示抗核糖體P蛋白(RibP)抗體與SLE的神經(jīng)系統(tǒng)病變關(guān)系密切2。抗RibP抗體主要識(shí)別60S核糖體上3個(gè)相對(duì)分子質(zhì)

4、量(Mr)約為38 000、 19 000和17 000的磷蛋白亞單位P0、 P1和P2, 這3個(gè)蛋白在C端都共同擁有一段22個(gè)氨基酸的線性表位, 應(yīng)用核糖體P蛋白C端抗原表位多肽或重組的RibP0融合蛋白可作為抗原通過(guò)ELISA檢測(cè)SLE患者血清中的抗RibP抗體3, 4。本研究利用ELISA檢測(cè)SLE患者、 疾病對(duì)照組和正常人血清中的抗RibP、 P0、 P1、 P2抗體水平, 探討RibP蛋白系列抗體對(duì)SLE的診斷價(jià)值及與其他自身抗體的關(guān)系。1 對(duì)象和方法1.1 研究對(duì)象 選取2006-01/2008-05在北京大學(xué)人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科住院的SLE患者198例, 其中女性181例, 男性1

5、7例, 年齡1478歲, 平均(36.9±13.6)歲; 病程4月30年, 平均病程6年, 診斷均符合1997年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的SLE分類診斷標(biāo)準(zhǔn)。疾病對(duì)照組為107例其他風(fēng)濕病, 包括類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)33例, 干燥綜合征(SS)61例, 混合性結(jié)締組織病(MCTD)7例, 未分化結(jié)締組織病(UCTD)6例, 診斷均符合各自疾病的國(guó)際診斷標(biāo)準(zhǔn); 女性102例, 男性6例, 年齡1879歲, 平均(49±16)歲, 病程2月32年, 平均病程5年。正常對(duì)照組70例選自北京大學(xué)人民醫(yī)院的健康查體者, 男性36名, 女性34名, 年齡1855歲, 平均(31±6

6、)歲。1.2 方法1.2.1 抗RibP、 P0、 P1和P2抗體檢測(cè) 抗RibP、 P0、 P1和P2抗體試劑盒由德國(guó)Euorimmun公司提供, 將血清1201倍稀釋加入微孔板, 室溫溫育30 min, 清洗緩沖液洗3次, 每孔加入100 L酶結(jié)合物, 室溫溫育30 min, 清洗后100 L色原/底物液至每一微孔, 室溫避光溫育15 min, 然后向每孔中100 L終止液, 450 nm比色, 參考波長(zhǎng)620650 nm。血清中抗RibP抗體濃度20 RU/mL為陽(yáng)性, 抗RibP0、 P1和P2抗體以對(duì)照組A均值+2標(biāo)準(zhǔn)差(s)作為臨界值, 大于臨界值為陽(yáng)性, 反之為陰性。1.2.2

7、其他自身抗體的檢測(cè) 抗雙鏈DNA(dsDNA)抗體, 抗Sm抗體和抗核抗體(ANA)譜的檢測(cè)均采用德國(guó)Euorimmun公司試劑盒。其中抗dsDNA抗體和抗Sm抗體檢測(cè)試劑盒為ELISA法, 檢測(cè)方法同抗RibP抗體?？筪sDNA抗體和抗Sm抗體濃度分別大于100 IU/mL和20 RU/mL為陽(yáng)性。ANA譜檢測(cè)方法為歐蒙印跡法, 可同時(shí)檢測(cè)抗線粒體(AMA)M2型抗體、 抗組蛋白抗體(AHA)、 抗核小體抗體(ANuA)、 抗增殖性核抗原(PCNA)抗體、 抗著絲點(diǎn)B蛋白(CENB)抗體、 抗Jo1抗體、 抗PMScl抗體、 抗SSB抗體、 抗SSA抗體、 抗Ro52抗體、 抗SSA抗體和抗

8、RNP/Sm抗體。按照試劑盒操作步驟進(jìn)行檢測(cè), 結(jié)果采用EUROLineScan軟件進(jìn)行結(jié)果判斷, 強(qiáng)度等級(jí)15為陽(yáng)性。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 13.0系統(tǒng)軟件做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析, 所有計(jì)量資料采用x±s或中位數(shù)表示, 組間比較采用t檢驗(yàn), 計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn), 相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析。2 結(jié)果2.1 抗RibP系列抗體的敏感性和特異性 SLE患者中抗RibP、 P0、 P1和P2抗體的敏感性分別為32.8%(65/198), 39.9%(79/198), 55.1%(109/198)及37.4%(74/198), 抗RibP系列抗體的敏感性和特異性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

9、(P>0.05, 表1)。表1 SLE患者中抗RibP、 P0、 P1和P2抗體敏感性及特異性比較2.2 抗RibP系列抗體對(duì)SLE特異性自身抗體陰性患者的檢測(cè) 在101例抗dsDNA抗體陰性和133例抗Sm抗體陰性的SLE患者中, 分別有24.8%44.6%和20.3%44.3%的患者出現(xiàn)抗RibP、 P0、 P1或P2抗體(表2)。此外在133例抗RibP抗體陰性的SLE中, 分別有24例(18.0%)抗RibP0抗體, 48例(36.1%)抗RibP0抗體和21例(15.8%)抗RibP2抗體陽(yáng)性。表2 抗RibP系列抗體在抗dsDNA抗體, 抗Sm抗體陰性的SLE患者中的

10、陽(yáng)性率2.3 抗RibP系列抗體與其他自身抗體的關(guān)系 抗RibP、 P0和P1抗體的陽(yáng)性組出現(xiàn)抗dsDNA抗體陽(yáng)性的機(jī)率比陰性組高, 有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異, 其中抗RibP0和P1抗體的兩組間差異顯著(P<0.01)。 198例SLE中當(dāng)抗RibP和P1抗體出現(xiàn)陽(yáng)性時(shí), 抗Sm抗體出現(xiàn)陽(yáng)性的可能性較大, 與陰性組相比明顯(P<0.01)。而抗RibP0和P2抗體陽(yáng)性組和陰性組間抗Sm抗體的發(fā)生率也有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。在ANA譜方面, 抗RibP、 P0、 P1和P2抗體陰性組和陽(yáng)性組間在抗PCNA抗體、 抗CENB抗體、 抗Jo1抗體、 抗PMScl

11、抗體、 抗Scl70抗體、 抗SSB抗體和抗Ro52抗體的發(fā)生率上沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但抗RibP抗體陰性組的抗AMAM2抗體發(fā)生率高于陽(yáng)性組(P<0.05)?？筊ibP1抗體陽(yáng)性組AHA和ANuA的發(fā)生率明顯高于陰性組(P<0.01)。抗SSA抗體和抗nRNP/Sm抗體的發(fā)生率分別在抗RibP和抗RibP0抗體陽(yáng)性組的發(fā)生率高于陰性組(P<0.05, 表3)。2.4 抗RibP系列抗體與SLE精神損害的關(guān)系 抗RibP、 P0、 P1和P2抗體陽(yáng)性組SLE精神損害的發(fā)生率分別為23.1%、 20.3%、 18.3%和21.6%, 均高于陰性組的8.3%、

12、 8.4%、 6.7%和8.1%(P<0.05)。 其中抗RibP和P2抗體陽(yáng)性組的發(fā)生率明顯高于陰性組(P<0.01)。表3 抗RibP系列抗體與其他自身抗體的關(guān)系3 討論抗RibP抗體作為SLE的特異性抗體, 主要識(shí)別位于大核糖體亞單位上的3個(gè)特異性核糖體蛋白(P0, P1和P2)。我們利用重組的RibP0, P1, P2蛋白以及天然純化的RibP蛋白作為抗原, 分別對(duì)198例SLE以及177例對(duì)照組中抗核糖體P蛋白系列抗體進(jìn)行了研究, 結(jié)果發(fā)現(xiàn)抗RibP、 P0、 P1和P2抗體均為SLE特異性抗體, 各抗體特異性相當(dāng), 敏感性抗RibP1抗體雖然比其他抗體略

13、高, 但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并無(wú)明顯差異。從抗RibP、 P0、 P1和P2抗體分布來(lái)看, 198例SLE中有2例(1.0%)僅抗RibP1抗體陽(yáng)性, 24例(12.1%)僅抗RibP1抗體陽(yáng)性, 1例(0.5%)僅抗RibP2陽(yáng)性, 提示RibP0, P1和P2蛋白中存在特異性的抗原表位, 而在抗RibP抗體陰性的133例SLE中, 也有51例(38.3%)出現(xiàn)了抗RibP0和/或P1和/或P2抗體, 而這些抗原表位可能由于核糖體P蛋白的空間構(gòu)象而被隱藏, 只有當(dāng)抗原以獨(dú)立蛋白的形式出現(xiàn)時(shí)才被顯現(xiàn)出來(lái)。由此說(shuō)明抗RibP抗體的抗原表位不僅存在于各亞單位C端的同源序列中, 這與文獻(xiàn)報(bào)道一致5。同時(shí)研究

14、發(fā)現(xiàn)有4例(2.0%)的SLE僅抗RibP抗體陽(yáng)性, 是否是因RibP0, P1, P2蛋白組成的RibP蛋白形成了新的SLE特異性構(gòu)象表位有待進(jìn)一步研究。此外本研究中還發(fā)現(xiàn)抗RibP系列抗體對(duì)抗dsDNA抗體或抗Sm抗體陰性的SLE有一定的診斷價(jià)值, 其中抗RibP1抗體在抗dsDNA抗體或抗Sm抗體陰性的SLE中出現(xiàn)陽(yáng)性比例最高, 分別為44.6%和44.3%, 而其他抗RibP, P0和P2抗體陽(yáng)性的比例為20.3%33.8%。這與Lin JL的報(bào)道基本一致3。目前關(guān)于抗RibP抗體與SLE神經(jīng)精神損害的關(guān)系目前國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道意見(jiàn)不一, 大部分學(xué)者認(rèn)為抗RibP抗體與SLE神經(jīng)精神損害有

15、關(guān)1, 有些學(xué)者則相反6。造成這種差異的原因很多, 如SLE患者的遺傳背景、 神經(jīng)精神損害判定標(biāo)準(zhǔn)差異、 抗RibP抗體檢測(cè)所用抗原的不同以及檢測(cè)方法學(xué)的差異等都可導(dǎo)致結(jié)論的不一致性。本研究結(jié)果顯示抗RibP、 P0、 P1和P2抗體均與狼瘡精神損害有關(guān)。綜上所述, 抗核糖體P蛋白系列抗體均為SLE特異性自身抗體; 該系列抗體對(duì)抗dsDNA抗體或抗Sm抗體陰性的SLE患者診斷具有參考意義, 并且與狼瘡精神損害相關(guān)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 Bonfa E, Golombek SJ, Kaufman LD, et al. Association between lupus psychosis and a

16、ntiribosomal P protein antibodiesJ. N Engl J Med, 1987, 317(5): 265-271.2 Eber T, Chapman J, Shoenfeld Y. Antiribosomal Pprotein and its role in psychiatric manifestations of systemic lupus erythematosus: myth or reality?J. Lupus, 2005, 14(8): 571-575.3 Lin JL, Dubljevic V, Fritzler MJ, et al. Major

17、 immunoreactive domains of human ribosomal P proteins lie Nterminal to a homologous C22 sequence: application to a novel ELISA for systemic lupus erythematosusJ. Clin Exp Immunol, 2005, 141(1): 155-164.4 Yoshio T, Masuyama JI, Minota S, et al. Correlation of serum IgG antibodies to recombinant P0 fu

18、sion protein with IgG antibodies to carboxylterminal 22 synthetic peptides and carboxylterminal 22 amino aciddeleted recombinant P0 fusion protein in patients with systemic lupus erythematosusJ. Arthritis Rheum, 1997, 40(7): 1364-1365.5 Fabien N, Moreira A, Lavergne JP, et al. Autoantibodies directed against the