正交設(shè)計(jì)優(yōu)選微波法炮制萸黃連的最佳工藝

1、正交設(shè)計(jì)優(yōu)選微波法炮制萸黃連的最佳工藝 作者：陳衛(wèi)紅,蔣孟良,周卓,王竹鑫【摘要】 目的 探討微波法炮制萸黃連的最佳炮制工藝。方法 采用薄層掃描法測(cè)定正交設(shè)計(jì)所得9個(gè)樣品中小檗堿的含量,以小檗堿的含量高低來評(píng)價(jià)炮制方法的優(yōu)劣。結(jié)果 微波法炮制萸黃連的最佳工藝為A2B2C3,即潤藥90 min,放2 cm厚,用80%微波,加熱3 min。結(jié)論 用微波法炮制萸黃連簡單方便、條件易控制、易操作、易推廣,炮制品質(zhì)量好。 【關(guān)鍵詞】 萸黃連；微波法；小檗堿；炮制工藝 Abstract：Objective To investigate the optimum techniques for processi

2、ng Yuhuanlian with microwave. Methods Nine samples were obtained by orthogonal design. Thin-layer chromatography was used to determine berberine in Yuhuanglian. The content of berberine was taken as the index for the evaluation on the superiority of processing techniques. Results The optimal process

3、ing techniques for Yuhuanglian with microwave was suggested as follows：A2B2C3, moistened for 90 minutes, put 2 cm thick, with 80% of the microwave, heating 3 minutes. Conclusion The method is simple, easy to control, easy to use, easy to promote, and the quality of processed products is better. Key

4、words：Yuhuanglian；microwave；berberine；processing techniques 黃連始載于神農(nóng)本草經(jīng),列為上品,歷代本草均有記載。黃連為常用中藥之一,具有清熱燥濕、瀉火解毒之功1。黃連的炮制方法很多,常見的有酒炙、姜汁炙、吳茱萸汁炙。用吳茱萸汁炮制黃連的方法又有加吳茱萸汁拌炒、加吳茱萸汁拌烘、加吳茱萸汁煮。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展、新設(shè)備的出現(xiàn)、新技術(shù)的應(yīng)用,又出現(xiàn)了微波法。筆者對(duì)炒法、烘法、煮法和微波法4種方法進(jìn)行了比較研究,結(jié)果以微波法最好(另文發(fā)表)。本試驗(yàn)在此基礎(chǔ)上,以小檗堿含量為指標(biāo),優(yōu)選了微波法炮制萸黃連的最佳工藝條件,現(xiàn)報(bào)道如下。1 儀器與試藥

5、雙波長薄層掃描分析儀：CS-930型(日本Shimadzu)；電子分析天平：AR1140型0.1 mg奧豪撕國際貿(mào)易(上海)有限公司；電熱恒溫水浴鍋：DK-S22型(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；電熱鼓風(fēng)干燥箱：CS101-2AB型(重慶試驗(yàn)設(shè)備廠)；微量進(jìn)樣器：10 L(上海注射器三廠)。黃連購于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院,經(jīng)蔣孟良教授鑒定為毛茛科植物黃連Coptis Chinensis Franch.的干燥根莖；吳茱萸購于湖南新晃縣藥材公司,經(jīng)鑒定為蕓香科植物吳茱萸Evodia rutaecarpa (Juss.) Benth.的干燥近成熟果實(shí)；鹽酸小檗堿對(duì)照品購于中國藥品生物制品檢定所,供

6、含量測(cè)定用。其他化學(xué)試劑均為分析純。2 方法與結(jié)果2.1 因素水平根據(jù)查閱的資料和預(yù)試驗(yàn),影響萸黃連微波炮制的因素主要有微波輸出大小、加熱時(shí)間、潤藥時(shí)間、藥物放置厚度等。具體參數(shù)見表1。表1 因素水平表（略）2.2 樣品的制備 稱取吳茱萸20 g,加12倍量水,浸泡60 min,提取40 min,共2次(第2次加水量與煎煮時(shí)間均為第1次的80%),濾過,合并濾液,定容至100 mL備用。 稱取黃連飲片20 g,共9份,分別加10 mL吳茱萸汁,拌勻,潤30、60或90 min后,置格蘭氏微波爐中(均放2 cm厚),以65%、80%、95%的微波加熱1、3、9 min即得。2.3 供試液的制備2

7、.3.1 標(biāo)準(zhǔn)品供試液的制備精密稱取鹽酸小檗堿5.12 mg,置5 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,得濃度為1.024 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品供試液。2.3.2 樣品供試液的制備將以上正交設(shè)計(jì)9個(gè)樣品粉碎過20目篩,各取約0.4 g,精密稱定,加鹽酸-甲醇(1100)60 mL置索氏提取器中,水浴上提取至提取液無色,提取液用50 mL容量瓶定容備用。2.4 含量測(cè)定2.4.1 測(cè)定波長的選定精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品及4個(gè)樣品各5 L,分別點(diǎn)于同一塊硅膠G薄板上,以正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-水(10112)為展開劑,展開,取出,晾干后,置掃描儀上在200500 nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描,結(jié)果最大吸收峰為

8、352 nm,最小吸收峰為412 nm。2.4.2 掃描條件雙波長反射法鋸齒掃描,S352 nm,R412 nm；SX3,狹縫1.25 mm×1.25 mm,掃描速度10 mm/min,外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量。2.4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品供試液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 L,分別點(diǎn)于同一薄層板上,同前展開、掃描測(cè)定。以小檗堿含量為自變量,峰面積積分值為因變量,進(jìn)行回歸處理,得回歸方程：Y752.529X723.271,r0.997 0。2.4.4 水分測(cè)定按中華人民共和國藥典方法測(cè)定水分2,以生品小檗堿含量8.341%為100%計(jì)算正交設(shè)計(jì)9個(gè)樣品的損失率。小檗

9、堿損失率(%)(黃連生品小檗堿含量萸黃連微波炮制后正交試驗(yàn)樣品的小檗堿含量)/黃連生品小檗堿含量×100%3-4。結(jié)果見表2。表2 正交試驗(yàn)9個(gè)樣品水分含量測(cè)定結(jié)果及小檗堿損失率（略）2.4.5 樣品含量測(cè)定精密吸取小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品2、6 L和9個(gè)樣品供試液各10 L,分別點(diǎn)于同一塊薄層板上,同前展開、掃描測(cè)定,用外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量(按干品計(jì)算),結(jié)果見表3。表3 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果（略）對(duì)表3數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析,結(jié)果見表4；因C因素的離均差平方和小于空項(xiàng),故將其合并計(jì)算誤差5。表4 方差分析表（略）2.5 結(jié)果分析 由直觀分析可知,以小檗堿含量為評(píng)價(jià)指標(biāo),各因素的主次順序?yàn)锽AC；

10、由方差分析可知,A、B兩因素對(duì)小檗堿含量有顯著影響,C因素影響不明顯,水平之間差異很小,故微波法炮制萸黃連的最佳炮制工藝為A2B2C3,即潤藥90 min,放2 cm厚,用80%微波,加熱3 min。3 討論 本研究表明,萸黃連的炮制以微波法為佳。該法既可降低部分小檗堿含量,從而降低黃連的過寒之性,又不使黃連中小檗堿含量太低而影響療效。黃連用吳茱萸炙的炮制目的是抑制苦寒性,長于清氣分濕熱,散肝膽郁火。黃連清熱瀉火的苦寒成分為小檗堿,黃連用吳茱萸炙后抑制其苦寒之性,應(yīng)是小檗堿含量有所降低。但是,用溫?zé)岬膮擒镙侵坪蟮狞S連還是寒性的,因此,還需要有苦寒成分小檗堿的存在。黃連用吳茱萸制后,到底要降低多

11、少小檗堿,保留多少小檗堿？有待進(jìn)一步研究。 正交設(shè)計(jì)9個(gè)樣品中小檗堿含量的順序?yàn)椋?86927431；其中1號(hào)小檗堿含量較生品降低最多為57.211%,已降到中華人民共和國藥典要求小檗堿的含量限度3.6%以下；5號(hào)降低最少,為8.716%。這可能是在加熱炒制過程中,部分小檗堿分解生成小檗紅堿所致,另黃連中小檗堿與吳茱萸中有機(jī)酸、黃酮反應(yīng)生成難溶性鹽,從而使小檗堿煎出減少所致6-7。 本試驗(yàn)用微波法炮制萸黃連的最佳炮制工藝為A2B2C3,在L9(34)正交設(shè)計(jì)表中可以找到,即為5號(hào),故不需做重復(fù)試驗(yàn)。在正交設(shè)計(jì)9個(gè)樣品中5號(hào)的小檗堿含量最高?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 雷載權(quán).中藥學(xué)M.北京：人民衛(wèi)生出版社,2001.316.2 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2000.200.3 趙法新,龐長留,李思三.張海岑研究員炮制吳萸連經(jīng)驗(yàn)J.中醫(yī)研究, 1996,9(3)：46.4 葉玉蘭,趙萍萍,羅澤瀾.黃連及其炮制品中5種生物堿含量測(cè)定J.中成藥,1996,18(3)：17.5