甲流乙流病毒檢測進展

1、 n 流感病毒屬于流感病毒屬于RNA病毒。流行性感冒是由甲（病毒。流行性感冒是由甲（A)、乙（、乙（B）、丙（）、丙（C）三型流感病毒引起，）三型流感病毒引起，n A型流感病毒常以流行形勢出現(xiàn)，能引起世界性流感大流行，它在動物中廣泛分布，并也能在型流感病毒常以流行形勢出現(xiàn)，能引起世界性流感大流行，它在動物中廣泛分布，并也能在動物中引起流感流行和造成大量動物死亡；動物中引起流感流行和造成大量動物死亡；n B型流感病毒常常引起局部暴發(fā)，不引起世界性流感大流行；型流感病毒常常引起局部暴發(fā)，不引起世界性流感大流行；n C型流感病毒主要以散在形式出現(xiàn)，主要侵襲嬰幼兒，一般不引起流行。型流感病毒主要以散在

2、形式出現(xiàn)，主要侵襲嬰幼兒，一般不引起流行。n 目前感染人的主要是甲型流感病毒中的目前感染人的主要是甲型流感病毒中的H1N1、H3N2亞型及乙型流感病毒中的亞型及乙型流感病毒中的Victoria和和Yamagata系。系。n 外周血常規(guī)外周血常規(guī)：白細胞總數一般不高或者降低，重癥病例淋巴細胞計數明顯降低：白細胞總數一般不高或者降低，重癥病例淋巴細胞計數明顯降低n 血生化血生化：部分病例出現(xiàn)低鉀血癥，少數病例肌酸激酶、天門冬氨酸氨基轉移酶、丙氨酸氨基：部分病例出現(xiàn)低鉀血癥，少數病例肌酸激酶、天門冬氨酸氨基轉移酶、丙氨酸氨基轉移酶、乳酸脫氫酶、肌酐等升高。轉移酶、乳酸脫氫酶、肌酐等升高。n （1）病

3、毒核酸檢測病毒核酸檢測：以：以RT-PCR（最好采用（最好采用real-time RT-PCR）法檢測呼吸道標本（咽拭子、）法檢測呼吸道標本（咽拭子、鼻拭子、鼻咽或氣管抽取物、痰）中的流感病毒核酸。鼻拭子、鼻咽或氣管抽取物、痰）中的流感病毒核酸。病毒核酸檢測的特異性和敏感性最好病毒核酸檢測的特異性和敏感性最好，且能區(qū)分病毒類型和亞型且能區(qū)分病毒類型和亞型n （2）病毒抗原檢測病毒抗原檢測（快速診斷試劑檢測（快速診斷試劑檢測）：快速抗原檢測方法可采用膠體金和免疫熒光法。）：快速抗原檢測方法可采用膠體金和免疫熒光法。由于快速抗原檢測的敏感性低于核酸檢測，因此對快速抗原檢測結果的解釋應結合患者流行由

4、于快速抗原檢測的敏感性低于核酸檢測，因此對快速抗原檢測結果的解釋應結合患者流行病史和臨床癥狀綜合考慮病史和臨床癥狀綜合考慮n （3）血清學檢測血清學檢測：檢測流感病毒特異性：檢測流感病毒特異性IgM和和IgG抗體水平。動態(tài)檢測的抗體水平。動態(tài)檢測的IgG抗體水平恢復期抗體水平恢復期比急性期有比急性期有4倍或以上升高有回顧性診斷意義倍或以上升高有回顧性診斷意義n （4）病毒的分離培養(yǎng)和鑒定病毒的分離培養(yǎng)和鑒定：屬于金標準，在流感流行季節(jié)，流感樣病例快速抗原診斷和免：屬于金標準，在流感流行季節(jié)，流感樣病例快速抗原診斷和免疫熒光法檢測陰性的患者建議再做病毒分離疫熒光法檢測陰性的患者建議再做病毒分離n

5、 病毒抗原檢測病毒抗原檢測（快速診斷試劑檢測（快速診斷試劑檢測）n 血清學檢測血清學檢測 （呼吸道病毒檢測）（呼吸道病毒檢測）n 1. 大夫留取標本，立即送檢；大夫留取標本，立即送檢；n 2. 檢驗科工作人員接收標本；檢驗科工作人員接收標本；n 3 檢驗科人員接收標本半個小時后在檢驗科門診四樓窗口打化驗單；檢驗科人員接收標本半個小時后在檢驗科門診四樓窗口打化驗單；n 咽喉拭子（推薦）咽喉拭子（推薦）：用滅菌過的棉簽從口腔完全插入咽喉中，以咽后壁、上鄂、扁桃體發(fā)紅：用滅菌過的棉簽從口腔完全插入咽喉中，以咽后壁、上鄂、扁桃體發(fā)紅 部位為中心，摩擦數次，采集粘膜表皮部位為中心，摩擦數次，采集粘膜表皮

6、n 鼻腔拭子鼻腔拭子：用滅菌過的棉簽完全插入鼻腔中，摩擦鼻甲數次，采集粘膜表皮。：用滅菌過的棉簽完全插入鼻腔中，摩擦鼻甲數次，采集粘膜表皮。n 鼻腔抽洗液鼻腔抽洗液：抽吸器的一側的管子連接在抽吸泵上，另一側的管子從外鼻孔完全插入鼻腔，：抽吸器的一側的管子連接在抽吸泵上，另一側的管子從外鼻孔完全插入鼻腔，啟動抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。將棉簽浸入到鼻腔抽洗液，使標本沾到棉簽上。啟動抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。將棉簽浸入到鼻腔抽洗液，使標本沾到棉簽上。n 注意：注意：應使用應使用泡沫或人造絲材質的泡沫或人造絲材質的棉簽采集樣本棉簽采集樣本!樣本采集后應樣本采集后應盡快送檢，盡快送檢，如果不能及時送

7、檢，如果不能及時送檢，應應室溫室溫儲存在儲存在密閉容器密閉容器中中，但但不可超過不可超過24小時，小時，樣本處理和儲運不合適，樣本處理和儲運不合適，可能會造成假陰性?？赡軙斐杉訇幮浴２杉玫拿藓灥綑z驗科塔樓二樓領取。采集用的棉簽到檢驗科塔樓二樓領取。n 普通甲流抗原（普通甲流抗原（H1N1及其亞型，及其亞型，H3N2及其亞型及其亞型，H5N1及其亞型，及其亞型，H9N2及其亞型，及其亞型，H7N3及及其亞型其亞型n 乙型流感抗原（乙型流感抗原（Brigit, B/R5 HongKong/5/72 Russia/69 Lee/40）n 方法方法：Flu檢測試劑運用膠體金標記和免疫層析技術，檢測

8、臨床樣本中的檢測試劑運用膠體金標記和免疫層析技術，檢測臨床樣本中的Flu抗原并以可視信抗原并以可視信號的方式直接顯示結果。號的方式直接顯示結果。n 原理原理：加入充分裂解的臨床樣本后，：加入充分裂解的臨床樣本后，F(xiàn)lu抗原在試劑條的前段與膠體金標記的抗原在試劑條的前段與膠體金標記的Flu抗體結合，抗體結合，形成抗原形成抗原-抗體復合物，該復合物在試劑膜上層析流動，經抗體復合物，該復合物在試劑膜上層析流動，經Flu單克隆抗體條帶（單克隆抗體條帶（FluA或或FluB測試線）時再次結合測試線）時再次結合Flu單克隆抗體，形成雙抗體夾心，并顯示紫紅色條帶。單克隆抗體，形成雙抗體夾心，并顯示紫紅色條帶

9、。n 陽性陽性 樣本中含有樣本中含有Flu抗原抗原,n 陰性陰性 樣本中不含樣本中不含F(xiàn)lu抗原，或者抗原，或者含量低于本產品的檢測水平含量低于本產品的檢測水平n 建議對陰性建議對陰性結果的樣本進行微生物培養(yǎng)以確定是否感染流感，若培養(yǎng)結果與檢測結果不同，結果的樣本進行微生物培養(yǎng)以確定是否感染流感，若培養(yǎng)結果與檢測結果不同，應再次取樣進行微生物培養(yǎng)復查應再次取樣進行微生物培養(yǎng)復查n 可快速檢測甲型和乙型流感病毒，診斷應可快速檢測甲型和乙型流感病毒，診斷應結合臨床癥狀、病毒分離培養(yǎng)結合臨床癥狀、病毒分離培養(yǎng)等其他檢查結果，由等其他檢查結果，由醫(yī)生綜合判斷進行確診醫(yī)生綜合判斷進行確診n Flu病毒已

10、病毒已失活的情況失活的情況下樣本中仍可能有下樣本中仍可能有Flu抗原抗原n Flu檢測試劑結果為陰性并不排除患者檢測試劑結果為陰性并不排除患者Flu感染的可能性感染的可能性，取樣不充分或操作方法不當，以及，取樣不充分或操作方法不當，以及樣本中抗原水平低于檢測限均會導致假陰性樣本中抗原水平低于檢測限均會導致假陰性n Flu檢測試劑所使用的單克隆抗體檢測試劑所使用的單克隆抗體可能無法檢測出所有的可能無法檢測出所有的Flu抗原變異體抗原變異體或者是或者是Flu新的菌株新的菌株n 檢測標本檢測標本：血清：血清n 檢測內容檢測內容：抗甲型流感病毒抗體：抗甲型流感病毒抗體IgM(不分型，歐蒙公司專利不分型

11、，歐蒙公司專利) 抗乙型流感病毒抗體抗乙型流感病毒抗體IgM(不分型，歐蒙公司專利不分型，歐蒙公司專利)n 檢測方法檢測方法：間接免疫熒光法：間接免疫熒光法n 1.檢測結果檢測結果必須結合必須結合患者的患者的臨床癥狀臨床癥狀進行綜合診斷進行綜合診斷n 2. 感染初期，病原體特異性感染初期，病原體特異性IgM抗體抗體未產生或者滴度很低未產生或者滴度很低會導致陰性結果，如有懷疑病原體會導致陰性結果，如有懷疑病原體感染，應感染，應提示患者在提示患者在7-14天內天內抽取第二份樣本復查抽取第二份樣本復查n 3. 二次感染和二次感染和復發(fā)感染復發(fā)感染時也可能檢測到特異性時也可能檢測到特異性IgM抗體抗體

12、n 4免疫功能受損或接受免疫抑制治療的患者，其血清學免疫功能受損或接受免疫抑制治療的患者，其血清學IgM抗體檢測的參考價值有限抗體檢測的參考價值有限n 5. 近幾個月內接受過輸血或其他血液制品治療的人群，對其陽性檢測結果的分析應慎重近幾個月內接受過輸血或其他血液制品治療的人群，對其陽性檢測結果的分析應慎重n 6. 不能區(qū)分流感病毒反復感染病例不能區(qū)分流感病毒反復感染病例n 7當檢測流感病毒時，若包被毒株和患者感染毒株之間的當檢測流感病毒時，若包被毒株和患者感染毒株之間的差異太大差異太大，可能存在，可能存在漏檢漏檢n 8. 接種接種流感疫苗流感疫苗也會產生也會產生IgM抗體，抗流感病毒抗體的解釋

13、應抗體，抗流感病毒抗體的解釋應考慮疫苗接種史考慮疫苗接種史n 醫(yī)囑名稱醫(yī)囑名稱 流感病毒檢測流感病毒檢測 n 收費代碼收費代碼 020916 n 收費標準收費標準 116/次次 n 醫(yī)囑名稱醫(yī)囑名稱 呼吸道病毒檢測呼吸道病毒檢測n 收費標準收費標準 274/次次n 取報告時間取報告時間 每周三下午三點出結果每周三下午三點出結果n n 檢測內容檢測內容：本實驗主要定性檢測人血清或血漿標本中：本實驗主要定性檢測人血清或血漿標本中漢坦病毒漢坦病毒IgG和和IgM抗體抗體。n 標本采集標本采集：采靜脈血，避免溶血，采集后的標本及時送檢，若不能及時送檢，可在：采靜脈血，避免溶血，采集后的標本及時送檢，若

14、不能及時送檢，可在28保存保存3天，長期保存需分裝血清冷凍于天，長期保存需分裝血清冷凍于-20 ，忌反復凍融。，忌反復凍融。n 檢測方法檢測方法：本實驗采用膠體金免疫層析技術，僅限于定性檢測樣本中的漢坦病毒抗體。：本實驗采用膠體金免疫層析技術，僅限于定性檢測樣本中的漢坦病毒抗體。 n 臨床意義臨床意義：腎綜合征出血熱（：腎綜合征出血熱（HFRS）亦稱流行性出血熱。是由漢坦病毒引起的急性、地方性、）亦稱流行性出血熱。是由漢坦病毒引起的急性、地方性、自然疫源性傳染病，病情危急，并發(fā)癥多，病死率高。自然疫源性傳染病，病情危急，并發(fā)癥多，病死率高。n 醫(yī)囑名稱醫(yī)囑名稱：流行性出血熱病毒抗體測定：流行性出血熱