二醇柱高效液相色譜法測定人參提取液中的人參皂苷(精)

1、第 26 卷第 4 期吉林化工學院學報 Vol .26No .42009 年 8 月JOURNAL OF J I L I N I N STIT UTE OF CHE M I CAL TECHNOLOGYAug . 2009收稿日期:2009-07-16作者簡介：董少鵬(1970-,男，吉林長春人，吉林省石油化工設計研究院高級工程師主要從事石油化工方面的研究.3 通訊作者:婁大偉(1973-,副教授,E -mail:loujlict .edu .cn文章編號：100722853(20090420005203二醇柱高效液相色譜法測定人參提取液中的人參皂苷董少鵬 1婁大偉23，孫大志 2 王悅虹 2

2、,任 紅2(1.吉林省石油化工設計研究院工藝所，吉林長春130021;2.吉林化工學院化學與 制藥工程學院，吉林吉林132022摘要:采用二醇柱，在等度洗脫條件下，建立了高效液相色譜(HP LC 定量分析人 參提取液中人參皂苷的檢測方法優(yōu)化的色譜條件：L i Chr os pher 100D i ol 柱 (250mm x2mm i .d .,5 流動相為乙腈 2 水(體積比為 82 : 18,流速為 1.0L ? m in -1，檢測波長為 200n m,柱溫為 15C.研究結果表明：在較低溫度下,采用二醇柱分析 7 種主要人參皂苷，具有分析速度快，不需要梯度洗脫程序，方法簡單等優(yōu)點關鍵詞:

3、高效液相色譜柱；二醇柱;等度洗脫;人參皂苷中圖分類號:R 286.0文獻標識碼:A人參是我國名貴的藥材，已有數千年的藥用歷史.目前，國內外對其主要的活 性成分人參皂苷預防和抑制腫瘤的作用進行了深入研究.研究結果發(fā)現：人參總皂苷 及各單體化合物對促進腫瘤細胞凋亡，促使腫瘤細胞分化，提高腫瘤細胞對化療藥物 的敏感性，以及提高機體抗腫瘤的免疫力等方面有重要的作用.按照人參皂苷的結構 類型、糖基的數量和位置將分離鑒定出的數十余種單體皂苷化合物分為3 組:(a20(S 一原人參二醇型，如人參皂苷 Ra,Rb1,Rb2,Rb3,Rc,Rd,Rg3,Rh2,R s;(b 20(S原 人參三醇型，如人參皂苷

4、Re,Rf,Rg1,Rg2,Rh1;(c 齊墩果酸型，如人參皂苷 Ro .在所有這些人參皂苷中,7 種主要成分(Rf,Rg1,Rd,Re,Rc,Rb2 和 Rb1 是含量最高的，也是主要的藥理活性成分.一些分離方法包括：薄層色譜(T LC 1、氣相色譜（GC 2和配有紫外檢測器（UV、蒸發(fā)光散射檢測器的高效液相色譜或質譜檢測3-6都已經被研究.在這些方法中，高效液相色譜已經廣泛應用于人參皂苷的分析.由于它的 靈敏度高，廣泛應用于不揮發(fā)性化合物，而且其不需要有衍生化就能完成分析.高效液 相色譜也更容易應用于上述的各種檢測技術.在高效液相色譜法中，研究普遍采用了傳統(tǒng)的 C18 柱，使用梯度 洗脫，

5、流動相采用乙腈與水的混合物或緩沖液.這些方法使人參皂苷成分分離受到限制，而且分 離時間很長，大部分分離時間需要 60m in 左右.本文建立了一種新的人參皂苷分離方 法，采用了固相萃取前處理技術對樣品進行處理后，使用二醇柱進行等度洗脫分離.與 傳統(tǒng)的C18 分離方法相比，該法具有分離速度快，分離度好，靈敏度高等優(yōu)點，而且實 現了樣品中 7 種主要人參皂苷的同時測定.1 實驗部分1.1 試劑與儀器人參皂苷標準對照品 Rf,Rg1,Rd,Re,Rc,Rb2和Rb1購于法國Extrasynthese公司, 置于 4C冰箱中避光保存；用于液相色譜流動相或樣品處理的乙腈和甲醇（色譜純，購于天津市大茂化學

6、試劑廠；所有實驗用水均采用高純 水;人參樣品購于 kanebo 公司.島津 LC 20AT 高效液相色譜儀（紫外 2 可見檢測器；色譜柱:L i Chr os pher 100Di ol 柱（250mmx2mm i .d .,5 色譜工作站：浙大智達 N2000 系統(tǒng)（浙江大學智 達信息工程有限公司；固相萃取小柱：C18（500mg/3mL,北京華爾博科技有限公司.1.2 標準溶液的配制使用甲醇為溶劑配制成濃度為 300ng/L勺標準儲備液.取適量的標準儲備液逐 級稀釋后得到所需濃度的標準溶液用于高效液相色譜定性分析時，配制成適宜濃度 的單品溶液所有樣品均置于冰箱內保存1.3 樣品處理方法準確

7、量取人參提取液 1mL 于 5mL 樣品瓶中，加入 1mL 水，超聲處理 10m in.取 1mL處理液過 C18 固相萃取小柱（預先用 5mL 甲醇和 5mL 水活化.分別用 5mL 水和 5mL30%的甲醇水溶液洗柱后，用 3mL 甲醇洗脫待分析物，洗脫液經 0.2 卩 m PTF 濾 膜過濾后，在室溫條件下用氮氣吹干.殘留物用適宜量甲醇定容后，用于高效液相色譜 測定.1.4 色譜條件流動相:乙腈 2 水 （體積比為 82 : 18,流速:1.0L/m in;檢測波長:200nm;柱溫:15C; 柱溫控制：將色譜柱置于含有常溫水的保溫水槽中，在不斷攪拌條件下，向水槽中不斷 加入碎冰,待溫度

8、達到實驗溫度，停止加冰.溫度穩(wěn)定 5m in 后，進行液相色譜測定7.2 結果與討論2.1 色譜分離條件的優(yōu)化由參考文獻得知，人參皂苷的最大吸收波長在 203n m,實驗選取了 198205nm, 在其他條件相同條件下測試人參皂苷，得出在 200n m 時，人參皂苷有最大的響應值.實驗在室溫條件下進行流動相配比的優(yōu)化，在乙腈與水的體積比為 82 : 18 時,7 種人參皂苷的分離效果最好然而，人參皂苷 Rf 和 Rg1,Rd 和 Re 仍未完全分離.因此, 研究中主要考察了溫度對分離條件的影響實驗選取 0,5,10,15,20, 25C 為主要溫度控 制點，分別進行高效液相色譜分離測定結果表明

9、：在流動相組成乙腈與水的體積比為 82 : 18,溫度為 15C時，所有的人參皂苷達到了最好的分離效果在 3 個典型的溫度下 人參皂苷標準品的色譜圖如圖 1 所示因此，實驗選取了檢測波長 200nm,流動相組成 乙腈 2 水 （體積比為 82 : 18,柱溫 15C為最佳色譜分離條件0t/mIqpiVM lAlfPIj| inii iiwm 用JIu2I 1 .fiw、int/m7.Rb1int/m in1.Rf;2.Rg1;3.Rd;4.Re;5.Rc;6.Rb2;4.Re;圖 13 個溫度條件混合人參皂苷標準品的色譜圖2.2 實際樣品分析采用本法對人參提取液實際樣品進行了測定，并在最優(yōu)化條

10、件下對 7 種主要人 參皂苷進行了定量分析人參樣品的色譜圖如圖 2 所示21門、t/m in1. Rf;2. Rg1;3. Rd;0.72Rb15.Rc;6. Rb2;7. Rb1圖 2 人參樣品的色譜圖表 1 表明了其定量結果6 吉林化工學院學報2009 年表 1 人參提取液中的人參皂苷含量人參皂苷皂苷含量 3/mg ? (10mL -1樣品人參提取液Rf 2.009 00532.62Rg16.406 00610.95Rd 4.614 0390.84Re M ean DRS D /%6.368 0180.28Rc 8.837 0:0941.07Rb210.068 007214.415 021

11、0.143n =3.3 結 論本文建立了用二醇柱同時分離 7 種主要活性人參皂苷的分離方法，該方法解決 了傳統(tǒng)C18 柱分析時間長、分離效果差等缺點，而且無需梯度洗脫條件，在等度洗脫 情況下 17min 之內即可完成.結果表明，該方法具有簡單、快速，同時分離效果好等 優(yōu)點，可以用于人參皂苷的分離和檢測.參考文獻：1 Va nhaelen -Fastre R.,FaesM.,Va nhaelen M.H igh 2perf or mance thi n -layer chr omat ographic deter m in ati on of six maj orgin se nosides i

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