小鼠免疫組織及免疫細胞的觀察

1、_小鼠免疫組織及免疫細胞的觀察【實驗原理】免疫器官、組織及細胞是機體免疫系統的重要組成部分。中樞免疫器官包括胸腺和骨髓，是T 淋巴細胞及其他各類免疫細胞發(fā)生、發(fā)育和分化的場所，外周免疫器官包括脾脹、 淋巴結和粘膜相關淋巴組織是免疫應答的場所。各類免疫細胞直接參與免疫系統對抗原類物質的免疫應答，完善的免疫器官組織結構和正常的免疫細胞種類和數量是機體免疫功能發(fā)揮正常的基本條件?！驹噭┖推鞑摹啃∈?、棉簽、解剖臺、平皿、大頭針、手術剪子、手術鑷子、載玻片、瑞士染液、細胞篩【操作方法】1.取一只小鼠，采用頸部脫臼法處死，將小鼠放到解剖臺上，沿腹中線剪開皮膚且不破壞腹膜和胸膜， 剪開腹膜，打開腹腔和胸腔，

2、觀察胸腺所在的位置和形狀。2.分離脾細胞：取出脾脹，去除其周圍的脂肪組織，用剪子剪碎脾臟，放入細胞篩中，用載玻片清研脾脹，滴加生理鹽水，使脾細胞分散成細胞懸液。3.脾細胞染色觀察：取少量細胞懸液置于載玻片上，與室溫晾干，加瑞士染色液甲染色 1min ，甩掉染液，用瑞士染色液乙染色5min ，用自來水沖洗，讓染液漂走，置于光學顯微鏡下觀察染色脾細胞?！窘Y果觀察】小鼠脾細胞瑞士染色鏡下觀察精品資料_【注意事項】1.正確抓取小鼠，防止被鼠咬傷。2.脾臟分離完整，清研輕柔。3.染色時間不宜過長或過短。.【討論】脾臟具有多種重要的生理功能, 參與并調節(jié)血液、 免疫、內分泌系統的運轉 ,絕非可有可無 ;脾

3、臟功能在疾病的不同階段扮演不同的角色,有時甚至完全相反 ,即具有雙向性、時向性的特點。1.脾切除術后暴發(fā)性感染全脾切除術后OPSI的發(fā)生率約為1 % 2.4 %。雖然OPSI 的發(fā)生率不是很高 ,但脾臟切除后 ,在由肺炎球菌導致的感染中毒性休克中 , 50 %患者的病情迅速進展 , 并最終導致死亡。脾臟為全身最大的淋巴器官 , 血循環(huán)相當豐富 , 且脾臟具有延緩微循環(huán)的作用, 有利于清除和吞噬多種抗原 , 減輕機體感染的發(fā)生。 同時脾臟擁有大量重要的免疫細胞及免疫因子 , 如 T 細胞、 B 細胞、 K 細胞、單核巨噬細胞、自然殺傷細胞、殺傷細胞、淋巴因子活化殺傷細胞 (LAK 細胞 )、樹突

4、狀細胞。免疫因子包括 tufstin 因子、精品資料_備解素即 P 因子、纖維結合蛋白免疫核糖核酸環(huán)磷酸鳥苷內源性細胞毒因子、調理素和補體等。而脾切除后,脾臟所產生的免疫因子及免疫細胞消失,血漿中免疫球蛋白 IgM 、 IgG 下降 ,巨噬細胞活性下降 ,補體旁路活性下降及自身抗體活性增強 , 使免疫系統失衡 ,導致機體易感性增加 ,甚發(fā)生 OPSI 。2.關于 tufstin 是主要由脾臟產生的促吞噬激素, N ajjar 于 1970 年首先發(fā)現。是 IgG 分子 Fc 段的一種四肽 (T hrLy s -P ro -A rg),通過激活中性粒細胞發(fā)揮吞噬功能。需要在白細胞激肽酶及內羧基肽

5、酶的共同作用下釋放。脾切除、鐮狀紅細胞貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜、A IDS 及一些腹部疾病可使其水平下降 , 脾移植后可使tufstin 的水平升高。 雖然已發(fā)現其在免疫系統中的重要作用 , 但具體機制仍不十分明了。理論上講上述情況tufstin 活性減低的原因包括低球蛋白血癥、脾臟內中性粒細胞釋放減少、白細胞激肽酶活性改變及tufstin 分子異常。3.脾臟的抗腫瘤功能機體發(fā)生腫瘤的主要原因為免疫系統監(jiān)控失調, 而脾臟作為人體免疫系統的重要組成部分, 無疑與腫瘤的發(fā)生密切相關。臨床觀察發(fā)現 , 脾臟不僅自身很少發(fā)生原發(fā)惡性腫瘤且少有轉移瘤出現, 這也表明脾臟具有抗腫瘤的作用。 目前大家較公認的觀點為脾臟在腫瘤免疫中具有雙向性、時向性的特點。表現為在腫瘤早期脾臟具有抗腫瘤作用, 而在晚期則表現為免疫抑制,促進腫瘤生長。其抗腫瘤作用主要表現在:可增強巨噬細胞的吞噬功能?？稍鰪娋奘杉毎芙饬黾毎捌溥^氧化酶作用。 通過增強NK 細胞活性發(fā)揮抗腫瘤作用。Chu 認為 , tufstin的抗腫瘤機制不僅通過增加巨噬細胞的腫瘤趨向性、吞噬能力和分泌能力 , 更重要的是增加巨噬細胞產生氧自由基超氧陰離子的能力 , 對殺傷腫瘤細胞具有