實(shí)驗(yàn)室常用培養(yǎng)基的配制方法

1、五、實(shí)驗(yàn)室常用培養(yǎng)基的配制方法Ampicillin（氨卡青霉素）（100 mg/ml）組份濃度100 mg/ml Ampicillin配制量 50 ml配制方法1.稱量5 g Ampicillin置于50 ml離心管中。2. 加入40 ml滅菌水，充分混合溶解后，定容至 50 ml3. 用0.22 m過濾膜過濾除菌。4. 小份分裝（1 ml/份）后,-20T保存。IPTG（異丙基-B -D-硫代半乳糖苷）（24 mg/ml）組份濃度 24 mg/mL IPTG配制量 50 mL配制方法 1.稱1.2 g IPTG置于50 ml離心管中。2. 加入40 ml滅菌水，充分混合溶解后，定容至 50

2、ml3. 用0 22 m過濾膜過濾除菌。4小份分裝（1 ml，份）后,-20E保存。X-Gal （20 mg/ml）組份濃度 20 mg/ml X-Gal配制量 50 ml配制方法 1.稱量I g X-Gal置于50 ml離心管中。2. 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50 ml3. 小份分裝（1 ml/份）后，-20C避光保存。I D拉差甘LB培養(yǎng)基組份濃度1%（W/V）Tryptone（胰蛋白胨），0.5%（W/V）Yeast Extract（酵母提取物），1%（W/V）NaCI配制量 1 L配制方法1.稱取下列試劑，置于l L燒杯中。Trypt one10

3、gYeast Extract5 gNaCl10 g2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加 5 N NaOH（約 0.2 m1），調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L o5咼溫咼壓火菌后，4。C保存。LB/Amp培養(yǎng)基組份濃度1%(W/V)Trypt one0.5%(W/V)Yeast Extract1%(W/V)NaCl0.1 mg/mlAmpicilli n配制量 1 L配制方法 1稱取下列試劑，置于I L燒杯中Trypt one10 gYeast Extract5 gNaCl10 g2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加

4、 5 N NaOH(約 0.2 mL)。調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。4. 加去離子水將培養(yǎng)基定谷至1 L o5. 咼溫咼壓火菌后，冷卻至室溫。6. 加入 1 ml Ampicillin(100 mg/ml)后均勻混合。7.4°C保存。TO拉差甘IB培養(yǎng)基1.2%(W/V)Trypt one2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPOa配制量 1.L配制方法 1.配制磷酸鹽緩；中液(0.17 M KH 2PO4, 0.72 M K2HPO4)100 ml。 溶解2.31 g KH2PC4和l2.54 g K2HPO4

5、于90 ml的去離子水中，攪拌溶解 后，加去離子水定容至100 ml，咼溫咼壓火菌 2.稱取下列試劑，置于l L燒杯中。Trypt one12 gYeast Extract24 gGlycerol4 m3. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L后，咼溫咼壓火菌。5. 待溶液冷卻至60C以下時(shí)，；加入100 ml的上述滅菌磷酸鹽緩沖 液。6.4C保存。TB/Amp培養(yǎng)基組份濃度1.2%(W/V)Trypt one2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17 mMKH 2PO472 mMK2HPO40.1 mg/ml

6、Ampicilli n配制量配制方法SOB培養(yǎng)基組份濃度配制量配制方法壓滅菌。SOC培養(yǎng)基組份濃度1 L1配制磷酸鹽緩沖液(0.17 M KH 2PO4, 0.72 M K2HPO4)100 ml。 溶解2.31 g KH2PO4,和 12.54g K2HPO4于90 ml的去離子水中，攪 拌溶解后，加去離子水定容至 100 ml，咼溫咼壓火菌。2. 稱取下列試劑，置于I L燒杯中。Tryptone12 gYeast Extract24 gGlycerol4 ml3. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至I L后，咼溫咼壓火菌。5. 待溶液冷卻至60C以下

7、時(shí)，加入100 ml的上述滅菌磷酸鹽緩沖 液。6. 均勻混合后4C保存。2%(W/V)Trypt one0.5%(W/V)Yeast Extract0.05%(W/V)NaCl2.5mMKCl10 mMMgCl 21 L1.配制9 250 mM KCl 溶液在90 ml的去離子水中溶解1.86 g KCl后，定容至100 ml。2. 配制2 M MgCl2溶液。在90 ml去離子水中溶解19 g MgCl2后，定容至100 ml，高溫高Trypt one20 gYeast Extract5 gNaCl0.5 g3.稱取下列試劑，置于l L燒杯中4. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/p>

8、5. 量取10 m1 250 mM KCl溶液，加入到燒杯中。6. 滴加5 N NaOH溶液(約0.2 m1)，調(diào)節(jié)pH值至7.0。7. 加入去離子水將培養(yǎng)基定容至l L 08. 高溫高壓滅菌后，4C保存。9. 使用前加入5 ml滅菌的2 M MgCl 2溶液。2%(W/V)Trypt one0.5%(W/V)Yeast Extract0.05%(W/V)NaCl2.5 mMKCl10 mMMgCl220 mMGlucose配制量 100 mL配制方法 1.配制I M Glucose溶液。將18 g Glucose溶于90 ml去離子水中，充分溶解后定容至100 ml。 用0.22 何濾膜過濾

9、除菌。2.向I 00 ml SOB培養(yǎng)基中加入除菌的1 M Glucose溶液2 ml，均勻 混合。3.4C保存。2 8T培養(yǎng)基組份濃度 1.6%(WV)Tryptone , 1%(W/V)Yeast Extract, 0.5%(W/V)NaCI 配制量 1 L配制方法 1.稱取下列試劑，置于l L燒杯中。Trypt one16 gYeast Extract10 gNaCl5 g2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?. 滴力卩5 N NaOH,調(diào)節(jié)pH值至7.0。4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L o5. 咼溫咼壓火菌后，4C保存。 bx broth組份濃度2%(W/V)Tryp

10、tone ， 0.5%(W/V)Yeast Extract ， o5%(W/V)MgSO 4 7H2O配制量 1 L配制方法 1.稱取下列試劑，置于l L燒杯中。Trypt one20 gYeast Extract5 gMgSO4 7H2O5 g2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?. 滴加1 N KOH。調(diào)節(jié)pH值至7.5o4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L o5. 咼溫咼壓火菌后，4C保存。NZCYM培養(yǎng)基0.5%(WV)Yeast Extract0.1%(WV)Casamino Acid （酪蛋白氨基酸）1%(WV)NZ胺0.5%(WV)NaCl0.2%(WV)MgSO4

11、7Ho1 L1稱取下列試劑。置于I L燒杯中Yeast Extract5 gCasam ino Acid1 gNZ胺10 gNaCl5 gMgSO4 7Ho2 g2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加 5 N NaOH（約 0.2 ml），調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。4. 加去離子水將培養(yǎng)基定谷至1 L o5. 咼溫咼壓火菌后，4C保存。組份濃度配制量配制方法NZYM培養(yǎng)基組份濃度0.5%(WV)Yeast Extract1%(WV)NZ胺0.1%(WV)NaCl0.2%(WV)MgSO4 7Ho配制方法NZYM培養(yǎng)基除不含Casamino Acid外，其他成份與 NZCY

12、M培養(yǎng) 基相同。NZM培養(yǎng)基組份濃度1%(WV)NZ胺0.1%(WV)NaCl0.2%(WV)MgSO4 7Ho配制方法 NZM培養(yǎng)基除不含Yeast Extract酵母提取物）外，其他成份與NZYM 培養(yǎng)基相同。一般固體培養(yǎng)基的配制配制方法 1.按照液體培養(yǎng)基配方準(zhǔn)備好液體培養(yǎng)基，在高溫高壓滅菌前，加 入下列試劑中的一種。Agar（瓊脂；鋪制平板用）15 g/LAgar（瓊脂；配制頂層瓊脂用）7 g/LAgarose（瓊脂糖；鋪制平板用）15 g/LAgarose（瓊脂糖；配制頂層瓊脂用）7 g/L2.高溫高壓滅菌后，戴上手套取出培養(yǎng)基，搖動(dòng)容器使瓊脂或瓊脂糖充分混勻（此時(shí)培養(yǎng)基溫度很高，小

13、心燙傷）。3. 待培養(yǎng)基冷卻至5060°C時(shí)，加入熱不穩(wěn)定物質(zhì)（如抗生素等）, 搖動(dòng)容器充分混勻。4. 鋪制平板（3035 ml 培養(yǎng)基 /90 mm培養(yǎng)皿）。LB/Amp/X-Gal/LPTG 平板培 養(yǎng)基 組份濃度1%(W/V)Trypt one0.5%(W/V)Yeast Extract1%(W/V)NaCl0.1 mg/mlAmpicilli n0.024mg/mlIPTG0.04 mg/mlX-GaL1.5%(W/V)Agar配制量 1 L配制方法 1稱取下列試劑，置于l L燒杯中Trypt one10 gYeast Extract5 gNaCl10 g2. 加入約800

14、ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加 5 N NaOH（約 0.2 mL），調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L后，加入15 g Agar。5. 高溫高壓滅菌后，冷卻至 60 C左右。6. 加入 1 ml Ampicillin（100 mg/ml）、1 ml IPTG（24 mg/ml）、2 ml X-Gal（20 mg/mL）后均勻混合。7. 鋪制平板（3035 ml/90 mm培養(yǎng)皿）。8.4C避光保存。TB/Amp/X-Gal/LPTG 平板培 養(yǎng)基 組份濃度1.2%(W/V)Trypt one2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)G

15、lycerol17 mMKH 2PO472 mMK2HPO40.1 mg/mlAmpicilli n0.024 mg/mlIPTG0.04mg/mLX-GaL1.5%(W/V)Agar配制量 1 L配制方法 1.配制磷酸鹽緩沖液（0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4）100 ml。溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K2HPO4于90 ml的去離子水中，攪拌溶解后，加去離子水定容至 100 ml,咼溫咼壓火菌2.稱取下列試劑，置于I L燒杯中。Tryptone12 gYeast Extract24 gGlycerol4 ml3. 加入約800 ml的去離子水，充分

16、攪拌溶解。4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L后。加入I 5 g Agar。5高溫高壓滅菌后，冷卻至 60C左右。6. 加入100 ml的上述滅菌磷酸鹽緩沖液、I ml Ampicillin （100mg/ml）、1 ml IPTG（24mg/mL）、2 ml X-Gal（20 mg/ml）后均勻混合。7. 鋪制平板（3035 ml/90 mm培養(yǎng)皿）。8 4 C避光保存。六、抗生素的貯存溶液及其工作濃度抗生素貯存液*1工作濃度濃度保存條件嚴(yán)緊型質(zhì)粒松弛型質(zhì)粒氨芐青霉素50 mg/ml（溶于水）-20 C20 (g/ml60 g/ml羧芐青霉素50 mg/mL（溶于水）-20 C20 (g/m

17、l60 g/ml氯霉素34 mg/mL（溶于乙醇）-20 C25 (g/mll70 g/mL卡那霉素10 mg/mL（溶于水）-20 C10 (g/ml50 g/ml鏈霉素10 mg/mL（溶于水）-20 C10 (g/ml50 g/ml四環(huán)素*25 mg/mL（溶于乙醇）-20 C10 (g/ml50 g/mL*1以水為溶劑的抗生素貯存液應(yīng)通過 0.22 m濾器過濾除菌。以乙醇為溶劑的抗 生素溶液無須除菌處理。所有抗生素溶液均應(yīng)保存于不透光的容器中。*2鎂離子是四環(huán)素的拮抗劑，四環(huán)素抗性菌的篩選應(yīng)使用不含鎂鹽的培養(yǎng)基（如LB培養(yǎng)基）。七、SDS-PAGE 濃縮膠（5%Acrylamide）配

18、方表各種組份名稱各種凝膠體積所對(duì)應(yīng)的各種組份的取樣量1 m12 m13 m14 ml5 ml6 m18 m110 mLH2O0.681.42.12.73.44.15.56.830%Acrylamide0.170.330.50.670.831.01.3171.0M Tris-HCI(pH6.8)0.130.250.380.50.630 751.0l.2510%SDS0.010.020.030.040.050 060.080.110%過硫酸銨0.010.020.030.040.050.060.080.1TEMED.0.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0080.015m1

19、10m115m120 mI25m130m140m150 mI6%GelH2O2.65.37.010.613.215.921.226.530%Acrylamide1.02.03 04.05.06.08.010.01.5 M Tris-HCI(pH8.8)1.32.53.85.06.37.510.012.510%SDS0.050.10.150.20.250.30.40.510%過硫酸銨00.050.10.150.20.250.30.40.5TEMED.0-0.0040.0080.0120.0150.020.0240.0320.048%GelH2O2.34.66.99.311.513.918.523.230%AcryIamide1.32.74.05.36.78.010.713.31.5M Tris-HCI(pH8 8)1.32.53.85.06.37.510.012.510%SDS0.050.10.150.20.250.30.40.510%過硫酸銨0.0.050.10.150 20.250.30 40.5TEMED0.0030.0060.0090.0I20.0150.0180.0240.0310%GeLH2O1.94.05.97.99.914.915.919.830%AcryIamide1.73.35.06.78.