信號肽在基因工程中的應用

1、信號肽在基因工程中的應用什么是信號肽？ 指新合成多肽鏈中用于指導蛋白質的跨膜轉移（定位）的n-末端的氨基酸序列 一般有16-26個氨基酸殘基，其中包括疏水核心區(qū)信號肽的 c 端和 n 端3部分 信號肽似乎沒有嚴格的專一性。信號肽的功能指導分泌型蛋白在糙面內質網上合成的決定因素是蛋白質n端的信號肽。 信號識別顆粒和內質網膜上的信號識別顆粒的受體等因子協(xié)助完成這一過程。信號肽假說 信號肽假說認為，編碼分泌蛋白的mrna在翻譯時首先合成的是n 末端帶有疏水氨基酸殘基的信號肽，它被內質網膜上的受體識別并與之相結合。信號肽經由膜中蛋白質形成的孔道到達內質網內腔，隨即被位于腔表面的信號肽酶水解，由于它的引

2、導，新生的多肽就能夠通過內質網膜進入腔內，最終被分泌到胞外。翻譯結束后，核糖體亞基解聚、孔道消失，內質網膜又恢復原先的脂雙層結構。蛋白質的運轉離不開信號肽蛋白質的運轉離不開信號肽蛋白性質蛋白性質 運轉機制運轉機制 主要類型主要類型 分泌分泌 蛋白質在結合核糖體蛋白質在結合核糖體上合成，并以翻譯上合成，并以翻譯- -運轉同步機制運輸運轉同步機制運輸免疫球蛋白、卵蛋白、免疫球蛋白、卵蛋白、水解酶、激素等水解酶、激素等細胞器發(fā)育細胞器發(fā)育 蛋白質在游離核糖體蛋白質在游離核糖體上合成，以翻譯后運上合成，以翻譯后運轉機制運輸轉機制運輸 核、葉綠體、線粒體、核、葉綠體、線粒體、乙醛酸循環(huán)體、過氧化乙醛酸循

3、環(huán)體、過氧化物酶體等細胞器中的蛋物酶體等細胞器中的蛋白質白質 膜的形成膜的形成 兩種機制兼有兩種機制兼有 質膜、內質網、類囊體質膜、內質網、類囊體中的蛋白質中的蛋白質 跨膜運輸和鑲入膜內的幾種主要蛋白質跨膜運輸和鑲入膜內的幾種主要蛋白質 新生蛋白質通過同步轉運途徑進入內質網內腔的主要過程 信號肽可使正在翻譯的核糖體附著到rer膜上。在信號肽指引下蛋白質在細胞內的輸運 核糖體是通過信號肽的功能而附著并合成分泌蛋白的。因此游離的核糖體和膜結合核糖體之間本身并無差異。9 信號肽是作為一種附著到er膜上的信號識別，此可能通過開始合成出的n-端頭幾個氨基酸的疏水功能。然后蛋白鏈插進膜中，信號肽埋在膜中的

4、一種蛋白酶所剪切這時核糖體已完成翻譯，蛋白已延著導肽途經穿過膜。鹽沖洗過的膜不能啟動核糖體的結合，它的能力又可以恢復。11信號肽序列 蛋白質跨膜運轉信號也是由mrna編碼的。在起始密碼子后，有一段編碼疏水性氨基酸序列的rna區(qū)域，這個氨基酸序列就被稱為信號序列。信號序列在結合核糖體上合成后便與膜上特定受體相互作用，產生通道，允許這段多肽在延長的同時穿過膜結構，因此，這種方式是邊翻譯邊跨膜運轉。信號肽在基因工程技術與應用13融合gp67 信號肽的慈菇蛋白酶抑制劑基因在蠶體內表達1.重組轉移載體 pbacpak-gpapi2 的構建pbacpak-gpapi2 的 ph. p、gp67 信號肽序列

5、和 a pi2 基因的連接處序列為:2.重組病毒的篩選及表達產物分子量測定3.血淋巴中表達產物含量的測定 表達產物經 sds-page電泳 ,脫色后用凝膠干燥儀干燥 ,用bio-rad gs-670 圖像分析儀進行掃描處理。測得 crbk-api4 感染的血淋巴上清液中表達的 api占可溶性蛋白含量的 9 %,crbk-gpapi2 感染的血淋巴上清液中表達的 api占可溶性蛋白含量的 7 %。血淋巴中可溶性蛋白總量測定表明:crbk-api4 感染的血淋巴上清液中為 40mg/ ml ,crbk-gpapi2 感染的血淋巴上清液中為 55mg/ ml。從而得到血淋巴中表達的慈菇蛋白酶抑制劑的

6、絕對含量:crbk-api4 感染的血淋巴中為 3.6mg/ ml ,crbk-gpapi2 感染的血淋巴中為3.8mg/ ml。兩者的絕對表達量差別不大。4 .表達的慈菇蛋白酶抑制劑的活性測定參考文獻生 物 技 術 通 訊堵國成。陳堅，等大腸桿菌高效表達重組蛋白策略中國生物工程雜志，2007，27(9)：103龍建銀，王會信生物化學與生物物理進展，（）：楊運桂，徐京寧，等生物化學與生物物理學專有名詞 rer：粗面內質網 信號識別顆粒signal recognition particle （srp） er；內質網 ribosome receptor 核糖體受體 spr receptor 信號識別顆粒受體 signal peptidase 信號肽酶