血液凝固和影響血液凝固的因素

1、 血液凝固和影響血液凝固的因素 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 14級臨床醫(yī)學(xué)本部三班 張伊娜【摘要】目的： 通過測定某些條件下的血液凝固時間，探究各種因素對血液凝固的影響及機(jī)制。方法： 取家兔新鮮血液分別置于室溫、低溫、涂石蠟于試管壁的試管，加棉花、NaCl、肝素、草酸鉀、肺組織浸液，用竹簽攪拌處理，觀察記錄其凝血時間并與不做任何處理的血液凝固時間進(jìn)行對比，分析凝血時間的變化。結(jié)果： 經(jīng)棉花、肺組織浸液處理的血凝時間較室溫短，經(jīng)NaCl、涂石蠟于試管壁處理的血凝時間較室溫長，經(jīng)肝素、草酸鉀、低溫處理的血液不凝，經(jīng)竹簽攪拌的血液不凝且竹簽上纏有乳白色絲狀物。結(jié)論： 增加粗糙面、組織因子促進(jìn)血液凝固；稀釋血液、

2、涂石蠟于試管壁可延長凝血時間；肝素、草酸鉀、低溫抑制血液凝固。纖維蛋白是血液凝固所必需的?！娟P(guān)鍵詞】 血液凝固；凝血因子；肝素；纖維蛋白1實(shí)驗(yàn)材料和方法 1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1實(shí)驗(yàn)動物 家兔。1.1.2實(shí)驗(yàn)材料和器械 棉花，石蠟油，碎冰塊，氯化鈉，肝素，草酸鉀，肺組織浸液，氨基甲酸乙酯；試管（8支），小燒杯（2支），竹簽，兔手術(shù)臺，手術(shù)器械，注射器，動脈夾，動脈插管，恒溫水浴槽，秒表（本實(shí)驗(yàn)用手機(jī)秒表功能）。1.2實(shí)驗(yàn)方法 1.2.1家兔稱重后，按5mL/kg體重劑量給家兔耳緣靜脈注射200g/L的氨基甲酸乙酯使之麻醉，將兔仰臥并固定于兔手術(shù)臺上。1.2.2切開頸部皮膚、肌肉后，使兩側(cè)頸總動

3、脈暴露，用玻璃分針分離一側(cè)頸總動脈，頭端用線結(jié)扎，向心端夾上動脈夾。用眼科剪在近結(jié)扎線處的血管壁剪一“V”形小口，向心方向插入動脈插管，用線結(jié)扎固定。以備取血之用。1.2.3取8支試管，并編號。按下表實(shí)驗(yàn)條件準(zhǔn)備完畢(其中4號試管14組加0.5mLNaCl,而58組加2mL NaCl)編號實(shí)驗(yàn)條件1空白對照2棉花少許3石蠟油潤滑整個試管表面4浸在盛有碎冰塊的燒杯中52mL NaCl61mL 肝素70.1mL 草酸鉀80.1mL 肺組織浸液 圖示 ：促凝與抗凝試驗(yàn)1.2.4放開動脈夾，先放一管血后再18號管每管加入血液1mL（約試管的1/8），立即用秒表（手機(jī)秒表功能）計時，每隔30s將試管傾斜

4、一次，觀察血液是否凝固，至血液成為凝膠狀時，記下所歷時間。其中58號管需搖晃試管使血液和液體混勻。1.2.5由頸總動脈插管放血，分別注入兩個小燒杯內(nèi)各10mL，一杯靜置；另一杯用竹簽不斷地進(jìn)行攪拌5min，觀察血液的凝固現(xiàn)象。取出竹簽，用水洗凈，觀察纏繞在竹簽上的物質(zhì)。1.2.5記錄各管的凝血時間1。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果 2.1與空白對照組凝血時間（1號試管）相比：（1）2、8號試管凝血時間縮短，且8號試管凝血最快，2號其次。（2）3、5號試管凝血時間延長，但3號試管中血凝較5號快。（3）4號試管未凝（理論上浸在0冰水混合物中血液不會凝固，但實(shí)驗(yàn)條件下冰塊逐漸溶解導(dǎo)致其溫度上升，可能會出現(xiàn)使4號管血液凝

5、固的現(xiàn)象）。（4）待結(jié)束實(shí)驗(yàn)，6、7號管血液始終不凝。 詳見下表：編號實(shí)驗(yàn)條件凝血時間（min）與空白組實(shí)驗(yàn)結(jié)果對照平均數(shù)X標(biāo)準(zhǔn)差SX+S1空白對照37.8111.3237.81+11.322棉花少許11.755.3711.75+5.37縮短3石蠟油潤滑整個試管表面42.892.6542.89+2.65延長4浸在盛有碎冰塊的燒杯中未凝延長52.0mL NaCl51.251.7351.25+1.73延長61.0mL 肝素不凝延長（始終不凝）70.1mL 草酸鉀不凝延長（始終不凝）80.1mL 肺組織浸液8.152.838.15+2.83縮短 圖示 ：促凝與抗凝試驗(yàn)2.2與對照組相比，經(jīng)竹簽攪拌過

6、的血液不凝固，竹簽洗凈后上面纏繞著乳白色絲狀物質(zhì)。3實(shí)驗(yàn)討論3.1血液凝固機(jī)制 血液由流動的液體狀態(tài)轉(zhuǎn)為不流動的凝膠狀態(tài)稱為血液凝固.血液凝固是生理性止血功能的重要組成部分。3.1.1凝血因子特性 包括12個經(jīng)典的凝血因子,即F(其中因子已被廢除)以及激肽系統(tǒng)的2個因子，即激肽釋放酶原和高分子量激肽原。除F為金屬離子外，其他均為蛋白質(zhì)；除組織因子外，其他均存在于血漿中2。3.1.2凝血途徑 血液凝固過程是由許多凝血因子參加的酶促反應(yīng)。根據(jù)血液凝固過程中凝血酶原激活途徑不同，可將血液凝固分為內(nèi)源性激活途徑和外源性激活途徑。（1）內(nèi)源性凝血途徑：內(nèi)源性凝血途徑是指參與凝血的因子全部來自血液，通常因

7、血液與帶負(fù)電荷的異物表面（如玻璃、白陶土、硫酸酯、膠原等）接觸而啟動。當(dāng)血液與帶負(fù)電荷的異物表面接觸時，首先是F結(jié)合到異物表面，并被激活為Fa。Fa的主要功能是激活F成為Fa，從而啟動內(nèi)源性凝血途徑。（2）外源性凝血途徑：由來自于血液之外的組織因子暴露于血液而啟動的凝血過程，成為外源性凝血途徑，又稱組織因子途徑。組織因子是一種跨膜糖蛋白，存在于大多數(shù)組織細(xì)胞。在生理情況下，直接與循環(huán)血液接觸的血細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞不表達(dá)組織因子，但約有0.5%的F處于活化狀態(tài)（Fa）。當(dāng)血管損傷時，暴露出組織因子，后者與Fa結(jié)合而形成Fa組織因子復(fù)合物，后者在磷脂和Ca2+存在的情況下迅速激活F生成Fa。 由內(nèi)源性

8、和外源性凝血途徑所生成的Fa，在Ca2+存在的情況下可與FVa在磷脂膜表面形成FXaFVaCa2+磷脂復(fù)合物，即凝血酶原復(fù)合物，進(jìn)而激活凝血酶原。 凝血酶原的激活和纖維蛋白的生成 凝血酶原在凝血酶原復(fù)合物的作用下激活成為凝血酶3。 本實(shí)驗(yàn)采用動物頸動脈放血取血，血液幾乎未與組織因子接觸。因此，凝血過程主要是內(nèi)源性凝血系統(tǒng)的作用。肺組織浸液中含豐富的組織因子，加入試管觀察外源性凝血系統(tǒng)的作用。3.2對實(shí)驗(yàn)結(jié)果本質(zhì)探究3.2.1棉花對血液凝固的影響 實(shí)驗(yàn)中加入棉花后血液凝固時間較室溫縮短。棉花給血液凝固提供了一個粗糙的表面，容易使血小板發(fā)生黏著、聚集，然后釋放許多凝血因子和血小板因子；另外棉花含許

9、多帶負(fù)電荷的植物纖維，也能激活凝血因子X，啟動內(nèi)源性凝血途徑。3.2.2涂石蠟油于試管壁對血液凝固的影響 實(shí)驗(yàn)中涂石蠟油于試管壁血液凝固時間較室溫延長。由于石蠟油表面光滑，不易引起血小板黏著，即不易使血小板發(fā)揮促進(jìn)凝血的作用。另外石蠟油為絕緣體，其把試管表面所帶的負(fù)電荷覆蓋，不利于凝血因子X的激活，因而延長凝血時間。3.2.3低溫對血液凝固的影響 實(shí)驗(yàn)中置于低溫后血液凝固時間較室溫延長。凝血酶發(fā)揮作用需要適宜的溫度，當(dāng)溫度降低時，酶的活性就減弱甚至喪失，因此放置于冰水中的試管血液不凝固。3.2.4NaCl對血液凝固的影響 我們小組的實(shí)驗(yàn)中加入2mLNaCl血液凝固時間較室溫延長。原因是加入的生

10、理鹽水稀釋了血液，使凝血酶的濃度降低，延長了血液凝固的時間。而1組加入0.5mLNaCl血液凝固時間較室溫縮短，可能不同濃度的NaCl產(chǎn)生效果不同，亦有可能是凝血酶發(fā)揮作用有一個最適濃度，越接近最適濃度，凝血時間越短。3.2.5肝素對血液凝固的影響 實(shí)驗(yàn)中加入肝素后血液不會凝固。肝素是機(jī)體內(nèi)外重要的抗凝物質(zhì)?？鼓概c凝血酶等多種凝血因子的活性中心絲氨酸殘基結(jié)合，使這些凝血因子的活性受到抑制或失活，從而達(dá)到抗凝的作用。肝素則主要通過與血漿中的的一些抗凝蛋白，如抗凝血酶結(jié)合，加強(qiáng)后者的抗凝作用。此外肝素還能使血管內(nèi)壁細(xì)胞釋放凝血抑制物和纖溶酶原激活物，增強(qiáng)纖溶作用。因此在試管內(nèi)放入肝素時血液不會

11、發(fā)生凝固。3.2.6草酸鉀對血液凝固的影響 實(shí)驗(yàn)中加入草酸鉀后血液不會凝固。凝血過程中Ca2是重要的凝血因子，其參與了血液凝固的許多環(huán)節(jié)，當(dāng)血液中沒有Ca2時血液就不會發(fā)生凝固。在試管中加入草酸鉀，由于草酸鉀與Ca2發(fā)生反應(yīng)，生成草酸鈣沉淀，使血液中沒有Ca2，故血液不會發(fā)生凝固。3.2.7肺組織浸出液對血液凝固的影響 實(shí)驗(yàn)中加入肺組織浸出液后血液不會凝固。肺組織浸出液中含有豐富的組織因子（凝血因子），易通過外源性途徑迅速發(fā)生凝血反應(yīng)，因此加肺組織浸出液的試管血液凝固發(fā)生最快。3.2.8竹簽攪拌實(shí)驗(yàn)對血液凝固的影響 實(shí)驗(yàn)中經(jīng)竹簽攪拌實(shí)驗(yàn)后血液不再凝固。在竹簽上可見乳白色絲狀物，該物質(zhì)為不溶性的

12、纖維蛋白。血液凝固的實(shí)質(zhì)就是血漿中的可溶性纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成不溶性的纖維蛋白的過程。纖維蛋白交織成網(wǎng)，把血細(xì)胞和血液的其他成分網(wǎng)羅在內(nèi)，從而形成血凝塊。用竹簽攪動后不溶性的纖維蛋白被粘附在竹簽上，血液中可溶性纖維蛋白原被完全消耗，不再產(chǎn)生不溶性的纖維蛋白，血液自然無法凝固。4實(shí)驗(yàn)結(jié)論 經(jīng)棉花、肺組織浸液處理的血凝時間較室溫短，而涂石蠟于試管壁處理的血凝時間較室溫長，表明與粗糙面、負(fù)離子接觸能夠啟動內(nèi)源性凝血途徑使凝血加快，組織因子易通過外源性途徑迅速發(fā)生凝血反應(yīng)；經(jīng)2mLNaCl處理的血凝時間較室溫長，原因是加入的生理鹽水稀釋了血液，使凝血酶的濃度降低，延長了血液凝固的時間。但經(jīng)0.5mLNaCl處理的血液凝固時間較室溫短，其機(jī)制尚不清；經(jīng)肝素、草酸鉀、低溫處理的血液不凝，肝素、草酸鉀是較強(qiáng)的抗凝劑