環(huán)氧乙烷滅菌器滅菌驗(yàn)證報(bào)告

1、*環(huán)氧乙烷滅菌驗(yàn)證報(bào)告文件編號(hào)*文件版本A/0生效日期2012年12月12日文件分發(fā)明細(xì)副本： 總經(jīng)理 管理代表 副總經(jīng)理 生產(chǎn)技術(shù)部 生產(chǎn)部 質(zhì)量部 供銷部 總經(jīng)辦正文： 文控中心 蓋受控章 制訂審核批準(zhǔn)制訂日期2012年12月30日審核日期2012年12月30日批準(zhǔn)日期2012年12月30日修改記錄版號(hào)修改狀態(tài)修改內(nèi)容制訂/日期審核/日期批準(zhǔn)生效/日期目錄1.目的2.范圍3.引用文件和標(biāo)準(zhǔn)4.確認(rèn)小組設(shè)備和材料6.操作流程及參數(shù)滅菌產(chǎn)品的裝載及監(jiān)測(cè)傳感器的分布8.安裝確認(rèn)9.運(yùn)行確認(rèn)10.物理性能確認(rèn)11.生物性能確認(rèn)結(jié)果12.產(chǎn)品安全性能確認(rèn)13.過(guò)程的異常和方案修改14.產(chǎn)品二次滅菌1

2、5.結(jié)論16.附件目錄39 / 45文檔可自由編輯打印1 驗(yàn)證目的11我公司根據(jù)ISO11135進(jìn)行滅菌驗(yàn)證，我公司成立驗(yàn)證小組，主要成員見(jiàn)驗(yàn)證小組成員表。1。2通過(guò)驗(yàn)證確認(rèn)來(lái)證明確定過(guò)程是有效的，可再現(xiàn)的，保證最終產(chǎn)品的無(wú)菌概率小于或等于SAL10-6。1 適用范圍 本方案適用*公司生產(chǎn)的*，及以其有相同組成材料和制造過(guò)程的相關(guān)產(chǎn)品的EO滅菌。2 參照標(biāo)準(zhǔn)1.1 ISO 11135-1:2007, Sterilization of health care productsEthylene oxidePart 1: Requirements for development, validatio

3、n, and routine control of a sterilization process for medical devices.2.1 ISO 10993-7，Biological evaluation of medical devices-Part 7: Ethylene oxide sterilization residuals2.2 ISO 11737-1:2006, Sterilization of medical devices-Microbiological methods-Part 1: Determination of a population of microor

4、ganisms on products.2.3 ISO 11138-1:2006，Sterilization of health care products - Biological indicators - Part 1: General requirements.2.4 ISO 11138-2:2006， Sterilization of health care products - Biological indicators -Part 2: Biological indicators for ethylene oxide sterilization processes.2.5 2005

5、版中國(guó)藥典附錄XVI XIH ，滅菌法 無(wú)菌檢查法。 3 驗(yàn)證小組成員及職責(zé)表1. 小組成員姓名所在部門(mén)職務(wù)本驗(yàn)證工作中職責(zé)行政部經(jīng)理驗(yàn)證方案的編寫(xiě)、指導(dǎo)以及協(xié)助驗(yàn)證設(shè)計(jì)部經(jīng)理驗(yàn)證方案的協(xié)助設(shè)計(jì)生產(chǎn)部廠長(zhǎng)監(jiān)督系統(tǒng)正常供水生產(chǎn)部主任系統(tǒng)安裝維護(hù)及跟蹤系統(tǒng)正常運(yùn)行質(zhì)量部檢驗(yàn)員無(wú)菌檢驗(yàn)、殘留量檢測(cè)管理層總經(jīng)理驗(yàn)證方案的審批管理層管代驗(yàn)證實(shí)施和檢驗(yàn)所有操作人員均接受相關(guān)知識(shí)的培訓(xùn)，詳見(jiàn)操作人員培訓(xùn)記錄。1. 設(shè)備和材料解析室有效容積： 4480 mm×1350 mm×1700 mm溫度： 室溫濕度： 60%-90%解析室與清新空氣循環(huán)速度：5300m3/h在空氣的入口處和出口處各有

6、一個(gè)風(fēng)扇(送風(fēng)量5300m3/h,風(fēng)扇轉(zhuǎn)速1450r/min)。滅菌器EO滅菌器名稱：供應(yīng)商: 材料: 不銹鋼容積:安裝時(shí)期:2012年 11月溫度傳感器制造商:型號(hào):靈敏度:濕度傳感器制造商:型號(hào):靈敏度:環(huán)氧乙烷 (EO) 混合成份： 供應(yīng)商：批號(hào):2012/11/16氣體的檢測(cè)報(bào)告詳細(xì)見(jiàn)供應(yīng)商出貨單生物指示劑 (BI)微生物名稱：供應(yīng)商：規(guī)格：D值：批號(hào)：過(guò)期日期:產(chǎn)品證明見(jiàn)附件3： BI資質(zhì)報(bào)告培養(yǎng)基 (營(yíng)養(yǎng)瓊脂)； (玫瑰紅瓊脂)； (硫乙醇流體培養(yǎng)基)； (營(yíng)養(yǎng)肉湯)； (改良馬丁培養(yǎng)基)。EO 殘留測(cè)試測(cè)試中心：測(cè)試設(shè)備：參考標(biāo)準(zhǔn)：ISO10993-7（GB/T14233）2.

7、操作流程及參數(shù)圖 1.滅菌流程及滅菌參數(shù)要求2.1. 加熱：將滅菌系統(tǒng)總電源接通，設(shè)定溫度的上下限值，將加熱開(kāi)關(guān)推向“開(kāi)”的位置，系統(tǒng)啟動(dòng)加熱/循環(huán)，對(duì)滅菌柜進(jìn)行加熱，當(dāng)溫度達(dá)到設(shè)定值后，系統(tǒng)自動(dòng)停止加熱，保持溫度衡定。2.2. 保溫：產(chǎn)品被推入后，關(guān)好滅菌柜門(mén)，設(shè)定保溫時(shí)間，對(duì)滅菌產(chǎn)品進(jìn)行加熱。2.3. 抽真空：當(dāng)保溫時(shí)間結(jié)束后，啟動(dòng)真空泵，設(shè)定壓力值，將真空閥推向“開(kāi)”的位置，系統(tǒng)對(duì)滅菌柜進(jìn)行抽真空，當(dāng)達(dá)到設(shè)定值后，系統(tǒng)自動(dòng)停止。2.4. 加濕：抽真空后結(jié)束后，如果濕度30 %，需對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行加濕，當(dāng)濕度達(dá)到40 %60 %時(shí)停止加濕。2.5. 保壓：在預(yù)定的負(fù)壓值下保持30 min，使產(chǎn)品

8、包裝內(nèi)的空氣排出，同時(shí)記錄產(chǎn)品中所有溫度、濕度傳感器的值。2.6. 加藥：向滅菌柜內(nèi)注入預(yù)定量的滅菌劑，如2 kg，同時(shí)記錄氣化器的溫度、滅菌劑的溫度，加藥前壓力、加藥后壓力、加藥時(shí)間，并用這些數(shù)據(jù)用氣體狀態(tài)方程式計(jì)算滅菌柜內(nèi)滅菌劑的濃度，同直接稱量法比較所得的值應(yīng)一致（證明滅菌劑全部被加入）。計(jì)算公式如下：E.O濃度=（K*P）/（R*T） K：E.O稀釋常數(shù)：44000 P：引入E .O后壓力上升值 R：氣體常數(shù)(純氣：0.08205)T：引入E.O后，箱體內(nèi)絕對(duì)溫度（273t）2.7. 滅菌：按預(yù)定時(shí)間設(shè)定好滅菌時(shí)間，記錄滅菌開(kāi)始時(shí)滅菌柜內(nèi)壓力、滅菌結(jié)束時(shí)滅菌柜內(nèi)壓力、 滅菌開(kāi)始15 m

9、in時(shí)產(chǎn)品中濕度傳感器的濕度值、整個(gè)滅菌過(guò)和產(chǎn)品中溫度傳感器的值。2.8. 氣洗：滅菌結(jié)束時(shí)，排出滅菌劑，設(shè)定抽真空到-20±2 Kpa,保持3 min，打開(kāi)排空閥，空氣進(jìn)入，按這樣的循環(huán)兩次，同時(shí)記錄滅菌柜內(nèi)壓力的變化值。2.9. 產(chǎn)品推出：氣洗結(jié)束后，將放空閥推向“開(kāi)”的位置，空氣進(jìn)入滅菌柜，打開(kāi)滅菌柜門(mén)，將滅菌“合格”的產(chǎn)品送入解析室。2.10. 解析：記錄解析室內(nèi)溫度范圍，新鮮空氣換流流量，并根據(jù)以往經(jīng)驗(yàn)在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行E0殘留量測(cè)試，找出產(chǎn)品EO、ECH殘留合格的最短解析時(shí)間。3. 滅菌產(chǎn)品的裝載及監(jiān)測(cè)傳感器的分布7.1產(chǎn)品的裝載根據(jù)產(chǎn)品的包裝設(shè)計(jì)特點(diǎn)及滅菌箱容積要求

10、確定滅菌產(chǎn)品裝載量為：90個(gè)銷售包裝/滅菌箱； 共90滅菌箱/滅菌批，總使用空間為：4480 mm×1350 mm×1700 mmDoor(a) 正面模式圖(b) 頂視模式圖 有效裝載 (正面圖) 圖 2. 在滅菌器中滅菌箱的裝載和產(chǎn)品在滅菌箱中的放置每個(gè)手術(shù)衣外面套一個(gè)透析袋，然后25個(gè)獨(dú)立袋裝一個(gè)紙箱，包裝封口參數(shù)及包裝材料見(jiàn) 手術(shù)衣包裝確認(rèn)報(bào)告 (TB/TS/02V-02-01).7.2溫度和濕度傳感器分布依據(jù)標(biāo)準(zhǔn) ISO 11135進(jìn)行運(yùn)行確認(rèn)和性能確認(rèn)的時(shí)候，需要用 10個(gè)濕度傳感器和2個(gè)濕度傳感器來(lái)監(jiān)測(cè)滅菌柜(1.024m3)中的溫度和濕度情況，傳感器放置圖見(jiàn)

11、圖 3。 傳感器 (1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9,) 被貼于滅菌器室壁相應(yīng)位置（磁性吸附），傳感器5, 10, 11 和 12 被細(xì)線掛于滅菌柜內(nèi)圖3中相應(yīng)的位置。在做性能確認(rèn)，裝載樣品的情況下，所有傳感器均用同產(chǎn)品一樣的包裝材料裝好，參照運(yùn)行確認(rèn)放置的位置，放于滅菌產(chǎn)品之間，這些點(diǎn)包括已確認(rèn)過(guò)的最冷點(diǎn)。圖 3. 溫度及濕度傳感器放置圖表2. 溫度和濕度傳感器對(duì)應(yīng)表位置編號(hào)溫度傳感器濕度傳感器123456789101112傳感器編號(hào) T029T026T028T032T027T031T035T033T030T034M62254M337084. 安裝確認(rèn)設(shè)備購(gòu)買于2012年11月，

12、2012年11月安裝調(diào)試完畢，安裝確認(rèn)依照標(biāo)準(zhǔn)ISO 11135-1的要求按滅菌確認(rèn)方案，進(jìn)行確認(rèn), 確認(rèn)內(nèi)容包括：1) 確認(rèn)設(shè)備相關(guān)技術(shù)資料；2) 計(jì)量器具校準(zhǔn)；3) 設(shè)備安裝環(huán)境確認(rèn)；4) 管道的安裝確認(rèn)；5) 電器控制系統(tǒng)安裝確認(rèn)。安裝確認(rèn)結(jié)果確認(rèn)報(bào)告 5. 運(yùn)行確認(rèn)1) 滅菌器滅菌室箱壁及空間溫度均勻性試驗(yàn)：根據(jù)ISO 11135-1標(biāo)準(zhǔn)要求，選用 10個(gè)貼觸式溫度傳感器直接貼觸柜壁和懸掛于柜室空間（具體分布如圖3），啟動(dòng)加熱/循環(huán)系統(tǒng)，在到達(dá)滅菌工藝所需溫度（50）時(shí)，所有傳感器記錄的溫度均在50±3的范圍內(nèi)，其中5位置處的溫度傳感品器所記錄的溫度為最低點(diǎn)，此位置位于滅菌器

13、的柜門(mén)。2) 真空速率試驗(yàn)：在空載的情況下，將滅菌柜溫度升到50±3 ，保持溫度衡定，將滅菌柜門(mén)關(guān)好，封閉柜門(mén)，啟動(dòng)真空泵，將真空閥開(kāi)關(guān)推向“開(kāi)”的狀態(tài)，真空度達(dá)到-50 kPa時(shí),記錄時(shí)間(t2)，同時(shí)關(guān)閉真空閥，保持60 min，結(jié)果真空至-50 Kpa所用時(shí)間(t2) <30 min。3) 正壓泄漏試驗(yàn)：在空載的情況下、將滅菌柜溫度升到50±3 ，保持溫度衡定，將滅菌柜門(mén)關(guān)好，封閉柜門(mén)，打開(kāi)氣泵，向柜內(nèi)加壓至50 Kpa，保持60 min，結(jié)果一小時(shí)泄漏小于0.1 Kpa。4) 負(fù)壓泄漏試驗(yàn)：在空載、溫度恒定的條件下（50±3 ），封閉柜門(mén)，啟動(dòng)真空泵

14、，將真空閥開(kāi)關(guān)推向“開(kāi)”的狀態(tài)，抽真空至-50Kpa，保壓60 min，結(jié)果一小時(shí)泄漏小于0.1 Kpa。5) 在空載條件下，保持滅菌室溫度恒定（50±3 ），將蒸汽發(fā)生器的電源開(kāi)關(guān)打開(kāi)，當(dāng)蒸汽發(fā)生器壓力達(dá)到50 Kpa時(shí)，打開(kāi)加濕開(kāi)關(guān)，向柜內(nèi)加蒸汽，40min內(nèi)，溫度升到75%，蒸汽發(fā)生器有效?？傊? 運(yùn)行確認(rèn)結(jié)果表明設(shè)備能達(dá)到滅菌過(guò)程所要求的性能參數(shù)范圍。詳細(xì)見(jiàn)性能確認(rèn)。6. 物理性能確認(rèn)確認(rèn)3個(gè)半周期和2個(gè)全周期的物理性能，所有物理性能確認(rèn)參數(shù)數(shù)據(jù)見(jiàn)EO 滅菌記錄,3個(gè)半周期和2個(gè)全周期的物理性能參數(shù)數(shù)據(jù)總結(jié)分別見(jiàn)表3和表4。在3個(gè)半周期物理性能確認(rèn)時(shí)，滅菌參數(shù)采用極端條件 (

15、溫度37和滅菌介質(zhì)EO=1.9 Kg)，2個(gè)全周期也利用極端條件（溫度43和滅菌介質(zhì)EO=2.1 Kg）。在所有滅菌周期內(nèi)，滅菌裝載樣品量和傳感器的放置同本文7部分中描述一樣，溫度傳感器放置位置包括運(yùn)行確認(rèn)中認(rèn)為最冷的點(diǎn)，所有滅菌周期內(nèi)的溫度和濕度記錄見(jiàn)滅菌產(chǎn)品溫度均勻性記錄 和滅菌產(chǎn)品濕度均勻性記錄 ，結(jié)果顯示設(shè)備性能穩(wěn)定，滿足滅菌需求。表3. 半周期物理性能確認(rèn)結(jié)果過(guò)程確認(rèn)項(xiàng)目半周期參數(shù)記錄半周期1滅菌時(shí)間半周期2滅菌時(shí)間半周期3滅菌時(shí)間2012-12-52012-12-62012-12-7加熱起始溫度()252023最終溫度()373737所用時(shí)間（min）303540產(chǎn)品推入保溫所用時(shí)

16、間（min）29293010個(gè)溫度傳感器中最大值()35.836.636.810個(gè)溫度傳感器中最低值()3535.834.910個(gè)溫度傳感器平均值()35.236.235.1抽真空起始?jí)毫?kPa)-0.100.2最終壓力(kPa)-49.9-48.8-49.4所用時(shí)間 (min)343濕度最大值62.860.351.7濕度是小值59.754.747.7濕度平均值615848.6加濕注入蒸汽前滅菌室內(nèi)壓力(kPa)-注入蒸汽時(shí)間 (min)-注入蒸汽后滅菌室內(nèi)壓力 (kPa)-保壓時(shí)間 (min)29303010個(gè)溫度傳感器中最大值() 47.246.947.210個(gè)溫度傳感器中最小值()46

17、.848.449.310個(gè)溫度傳感器平均值()47.048.048.52個(gè)濕度傳感器最大值 (%RH)63.162.354.72個(gè)濕度傳感器最小值 (%RH)59.655.749.72個(gè)濕度傳感器平均值 (%RH)61.558.852.6加藥EO注入前滅菌室內(nèi)壓力 (kPa)-49.7-48.7-49.3EO注入重量(kg)1.91.91.9EO注入后滅菌室內(nèi)壓力 (kPa)62.161.760.9EO注入所用時(shí)間(min)464EO注入時(shí)汽化器溫度最小值()31.431.631.5EO 注入時(shí)EO的溫度最小值()28.527.628.1滅菌氣體作用時(shí)間(min)240240240作用開(kāi)始時(shí)滅

18、菌室內(nèi)壓力(kPa)58.761.661作用結(jié)束時(shí)滅菌室內(nèi)壓力(kPa)58.661.561.1作用15min后滅菌器的濕度 (%RH)72.349.352.3作用過(guò)和中產(chǎn)品最大溫度值 ()373739.8作用過(guò)程中產(chǎn)品最大溫差值 ()35.336.038.7作用過(guò)程中產(chǎn)品之間的溫差 ()1.70.41.1作用15min時(shí)EO濃度(mg/L)570570570氣洗換氣前的壓力 (kPa)58.561.261.1換氣后的壓力(kPa)-19.3-20-19.6換氣間隔時(shí)間 (min)111換氣次數(shù)( times) 222表4. 全周期物理性確認(rèn)結(jié)果過(guò)程確認(rèn)項(xiàng)目全周期滅菌參數(shù)記錄全周期1滅菌時(shí)間全

19、周期2滅菌時(shí)間2012-12-72012-12-7加熱起始溫度()2124最終溫度()4343所用時(shí)間（min）5346產(chǎn)品推入保溫所用時(shí)間（min）293010個(gè)溫度傳感器中最大值()48.750.410個(gè)溫度傳感器中最低值()47.950.710個(gè)溫度傳感器平均值()48.250.6抽真空起始?jí)毫?kPa)0.10.1最終壓力(kPa)-48-49.8所用時(shí)間 (min)46濕度最大值3939.4濕度是小值37.738.9濕度平均值3839.1加濕注入蒸汽前滅菌室內(nèi)壓力(kPa)-注入蒸汽時(shí)間 (min)-注入蒸汽后滅菌室內(nèi)壓力 (kPa)-保壓時(shí)間 (min)302910個(gè)溫度傳感器中最

20、大值() 49.151.510個(gè)溫度傳感器中最小值()47.850.810個(gè)溫度傳感器平均值()48.751.22個(gè)濕度傳感器最大值 (%RH)41.248.42個(gè)濕度傳感器最小值 (%RH)38.741.92個(gè)濕度傳感器平均值 (%RH)39.139.6加藥EO注入前滅菌室內(nèi)壓力 (kPa)-48.1-46.8EO注入重量(kg)2.12.1EO注入后滅菌室內(nèi)壓力 (kPa)6565.8EO注入所用時(shí)間(min)66EO注入時(shí)汽化器溫度最小值()32.131.5EO 注入時(shí)EO的溫度最小值()28.327.4滅菌氣體作用時(shí)間(min)480480作用開(kāi)始時(shí)滅菌室內(nèi)壓力(kPa)65.768.

21、1作用結(jié)束時(shí)滅菌室內(nèi)壓力(kPa)64.568作用15min后滅菌器的濕度 (%RH)65.768.1作用過(guò)和中產(chǎn)品最大溫度值 ()41.342作用過(guò)程中產(chǎn)品最大溫差值 ()38.638.9作用過(guò)程中產(chǎn)品之間的溫差 ()2.52.1作用15min時(shí)EO濃度(mg/L)630630氣洗換氣前的壓力 (kPa)64.568換氣后的壓力(kPa)-19.1-18.8換氣間隔時(shí)間 (min)12換氣次數(shù)( times) 22產(chǎn)品送入解析室解析解析時(shí)間(h)77解析室溫度范圍()20-3920-39換氣流量( min/once)連續(xù)連續(xù)7. 生物性能確認(rèn)生物性能確認(rèn)包括以下內(nèi)容：l 培養(yǎng)基靈敏度：對(duì)所用

22、培養(yǎng)基進(jìn)行無(wú)菌檢查和靈敏度檢查；l 滅菌產(chǎn)品的生物負(fù)載：檢測(cè)確認(rèn)滅菌前產(chǎn)品的生物負(fù)載小于100 CFU/件；l 初始微生物挑戰(zhàn)：在空載情況下滅菌10min的，測(cè)試BI的抵抗性；l 短周期：尋找一個(gè)沒(méi)有微生物存活下來(lái)的最短滅菌時(shí)間，能達(dá)到SAL10-6；l 半周期：確認(rèn)半周期的重復(fù)性；l 全周期：確認(rèn)兩個(gè)全周期后產(chǎn)品的性能和包裝的性能。根據(jù)半周期法及ISO 11135-1中生物性能確認(rèn)要求，如“圖4.半周期法”。該方法能保證滅菌過(guò)程殺滅具有特定抵抗性的微生物芽孢，其方法在所有其它參數(shù)保持不變（所有關(guān)鍵參數(shù)都應(yīng)設(shè)置為下限，以保證這種最差條件均能滿足要求），找到?jīng)]有微生物存活的滅菌效果時(shí)需要的最短滅

23、菌時(shí)間。在檢測(cè)生物指示劑（BI）顯示沒(méi)有微生物生長(zhǎng)的情況下，還要再重復(fù)兩次滅菌過(guò)程，而且檢測(cè)均無(wú)微生物生長(zhǎng)，確立的這一個(gè)滅菌時(shí)間，再用2倍于這一個(gè)滅菌時(shí)再進(jìn)2次滅菌循環(huán)運(yùn)行（所有關(guān)鍵參數(shù)都設(shè)置為上限、以保證最惡劣條件均不損害產(chǎn)品及包裝的性能），滅菌循環(huán)如圖7所示，并加載性能測(cè)試和EO、ECH測(cè)定的產(chǎn)品樣品。圖 4 半周期法11.1 培養(yǎng)基靈敏度測(cè)試過(guò)程依照培養(yǎng)基靈敏度檢查方法（中國(guó)藥典2012），對(duì)本批次的培養(yǎng)基進(jìn)行確認(rèn)，靈敏度檢查前已經(jīng)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行無(wú)菌性檢查，培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)小于5代，生命活力旺盛。所測(cè)試的培養(yǎng)基包括：營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA）、孟加拉玫瑰紅瓊脂培養(yǎng)基（RBA）

24、、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（NB）。a) NA：將金黃色葡萄球菌接種于被檢的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA），經(jīng)30 35 培養(yǎng)18 h24 h后，刮取菌落于0.9 %無(wú)菌氯化鈉溶液內(nèi)制成均勻菌液，在再逐管稀釋成濃度100 CFU/ml的菌懸液，取1 ml菌懸液于無(wú)菌的的平皿中，接種3個(gè)平皿，分別澆注溫度不高于50的滅菌后（NA），凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置于所需溫度培養(yǎng)，并用未加菌液的（NA）平皿作空白對(duì)照，30 35 培養(yǎng)24 h48 h, 觀察結(jié)果。b) RBA：將白色念珠菌接種于被檢的孟加拉玫瑰紅瓊脂培養(yǎng)基（RBA），經(jīng)23 28 培養(yǎng)24 h28 h后，刮取菌落于0.9 %無(wú)菌氯化鈉溶液內(nèi)制

25、成均勻菌液，再逐管稀釋成濃度100 CFU/ml的菌懸液，取1 ml菌懸液于無(wú)菌的的平皿中，接種3個(gè)平皿，分別澆注溫度不高于40 °C的滅菌后的（RBA），并用未加菌液的（RBA）平皿作空白對(duì)照，23 28 培養(yǎng)24 h48 h, 觀察結(jié)果。c) 凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置于所需溫度培養(yǎng)。d) NB：將已知含菌量為2×106 CFU/片的枯草芽孢桿菌菌片，用無(wú)菌的玻璃珠加10 ml的0.9 無(wú)菌氯化鈉溶液將其混勻成菌懸液后，再逐管稀釋成濃度100 CFU/ml的菌懸液，取1ml菌懸液接種于20 ml的營(yíng)養(yǎng)肉湯（NB）培養(yǎng)管，接種3管，并用未接種的20 ml的NB做空白對(duì)照管，30 3

26、5 培養(yǎng)37 d，觀察結(jié)果。e) 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：將生孢梭菌接種于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，經(jīng)30 35 培養(yǎng)1824 h后，無(wú)菌操作取出菌液用0.9 無(wú)菌氯化鈉溶液將其混勻成菌懸液后，再逐管稀釋成濃度100 CFU/ml的菌懸液，取10只無(wú)菌試管， 每只試管加入12 ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，將其中9只試管分成3組，每組3只，分別在每組中各加入1 ml細(xì)菌數(shù)100 CFU/ml的生孢梭菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌懸液，所有試管均置于30 35 培養(yǎng)培養(yǎng)37 d，并用未接種細(xì)菌的試管做空白對(duì)照，觀察結(jié)果。 結(jié)果：經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后，所有接種細(xì)菌數(shù)100 CFU/ml菌液的培養(yǎng)基均長(zhǎng)菌，靈敏度達(dá)到

27、要求，所有記錄見(jiàn)培養(yǎng)基靈敏度測(cè)試報(bào)告。11.2 滅菌前產(chǎn)品生物負(fù)載測(cè)試滅菌前產(chǎn)品的生物負(fù)載測(cè)試過(guò)程依照-初始污染菌檢測(cè)方法、初始污染菌的確定和ISO 11737-1 滅菌醫(yī)療器械-生物測(cè)試方法-第 1部分:產(chǎn)品上微生物數(shù)量的確認(rèn)。從每一批產(chǎn)品中抽取一件產(chǎn)品，按照下列已經(jīng)確認(rèn)方法，對(duì)滅菌前的手術(shù)衣進(jìn)行生物負(fù)載評(píng)估。以確定手術(shù)衣產(chǎn)品的生物負(fù)載水平。步驟: - 從已包裝好的產(chǎn)品中，每一批抽取一件產(chǎn)品，投入100ml，0.1%蛋白胨水溶液中，蝸旋振蕩30s。- 制成1：10，1：100等稀釋級(jí)供試液中。- 取供試液2ml于兩個(gè)無(wú)菌的平皿中，每個(gè)1ml，分別注入溫度不高于40°C的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)

28、基（NA）和孟加拉玫瑰紅瓊脂培養(yǎng)基（RBA），凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置于所需溫度培養(yǎng)。- 根據(jù)菌落數(shù)估算出該類產(chǎn)品的生物負(fù)載水平，詳細(xì)見(jiàn)產(chǎn)品的生物負(fù)載測(cè)試報(bào)告注：對(duì)手術(shù)衣生物負(fù)載做厭氧菌檢測(cè)，結(jié)果未能檢出厭氧菌，確定手術(shù)衣負(fù)載中不存在厭氧菌，同時(shí)從產(chǎn)品結(jié)構(gòu)分析也證明手術(shù)衣不存在厭氧菌生存的環(huán)境。11.3 初始微生物性能挑戰(zhàn)BI在空的滅菌柜中經(jīng)過(guò)一個(gè)滅菌周期循環(huán)后，滅菌劑作用10min，取出BI投入營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中經(jīng)30-35 培養(yǎng) 3-7 天，結(jié)果顯示滅菌10min后，所有BI均有菌生長(zhǎng)11.4 短周期按本文7的描述裝載滅菌產(chǎn)品，依照本文6部分的過(guò)程進(jìn)行短周期循環(huán)，EO的作用時(shí)間分別為30min, 6

29、0min, 120min, 240 min。 所有重要參數(shù)均設(shè)定為下限（溫度=37，滅菌介質(zhì)EO=1.9 Kg），滅菌循環(huán)結(jié)束后，分別將樣品和BI進(jìn)行無(wú)菌測(cè)試。短周期滅菌器運(yùn)行條件： 溫度： 47 (設(shè)定值的下限)滅菌介質(zhì)EO注入量： 10Kg (設(shè)定值的下限)EO 作用時(shí)間：30min, 60min, 120min, 240 min。BI 分布：在短周期，半周期和全周期滅菌循環(huán)中，所有BI均密封于透析袋中，置于手術(shù)衣中間，以最終滅菌包裝包裝好“產(chǎn)品”， 其中最大的手術(shù)衣，內(nèi)部面積最大，熱量最難傳導(dǎo)進(jìn)入手術(shù)衣中心，所用材料最多，體積最大，氣體最難進(jìn)入內(nèi)部，這樣的產(chǎn)品代表了所有手術(shù)衣中最難滅菌的

30、情況，將BI放于這樣的產(chǎn)品中心，作為過(guò)程挑戰(zhàn)裝置（PCD）。將PCD均勻的放置于滅菌柜中，這些位置包括滅菌柜中最難滅菌的位置, 如靠門(mén)的地方，此處在整個(gè)滅菌柜中溫度是最低的位置，滅菌柜的上層，此處是滅菌劑濃度最低的位置，保證這些最差情況下達(dá)到SAL10-6 無(wú)菌水平。20個(gè)BI在滅菌器中的位置見(jiàn)圖 4., 這些位置包括溫度最低，EO最難到達(dá)的位置。圖 4. 滅菌柜內(nèi)BI分布示意圖產(chǎn)品的裝載：取三批合格產(chǎn)品，每批520個(gè)，包裝好后用于滅菌裝載產(chǎn)品，這三批裝載產(chǎn)品經(jīng)過(guò)一次滅菌后，送入解析室去除EO，重復(fù)用來(lái)做下一次滅菌過(guò)程的裝載產(chǎn)品，裝載方式見(jiàn)本文7部分。生物負(fù)載測(cè)試樣品、性能確認(rèn)測(cè)試樣品、內(nèi)毒素

31、測(cè)試樣品和EO、ECH 殘留測(cè)試樣品均為合格產(chǎn)品，見(jiàn)表5. 6個(gè)樣品用來(lái)做生物負(fù)載測(cè)試，20個(gè)樣品經(jīng)短周期1滅菌后做產(chǎn)品無(wú)菌測(cè)試，20個(gè)樣品經(jīng)第一次全周期滅菌后從中抽出3個(gè)樣品（黃色）作性能測(cè)試，3個(gè)樣品（綠色）用來(lái)做內(nèi)毒素測(cè)試，左邊14個(gè)樣品 (藍(lán)色) 和其它 6 個(gè)新加入的樣品經(jīng)全周期2滅菌后，其中9個(gè)樣品（藍(lán)色）已經(jīng)經(jīng)受2次全周期滅菌循環(huán)，用來(lái)確認(rèn)經(jīng)兩次滅菌后產(chǎn)品的性能是否受到破壞，證明二次滅菌的可行性，左邊11個(gè)樣品經(jīng)二次全周期滅菌后用，作EO殘留測(cè)試樣品。表5. 測(cè)試樣品生物負(fù)載測(cè)試樣品（6件）短周期1后樣品的無(wú)菌測(cè)試（20件）全周期1樣品（20件）性能測(cè)試樣品（3件）內(nèi)毒素測(cè)試樣品

32、（3件）全周期2樣品（20件）二次滅菌性能測(cè)試樣品（9件）EO/ECH殘留測(cè)試樣品（11件） 201220620122482012249201225020122512012253201225420122552012256201225720122582012259結(jié)論：經(jīng)30min短周期運(yùn)行后， BI部分被殺滅，產(chǎn)品上的生物負(fù)載全部被殺滅，證明生物負(fù)載的抗性不大于BI，BI是可接受的。短周期循環(huán)滅菌后，BI培養(yǎng)結(jié)果顯示，滅菌劑（EO）作用60min-120min，均沒(méi)有達(dá)到SAL10-6無(wú)菌水平，只有當(dāng)滅菌時(shí)間為240min時(shí)，剛好能滅活BI上所有微生物，所以滅活BI的最短時(shí)間為240min，2

33、40min既為半周期時(shí)間。尋找最短滅菌時(shí)間的短周期循環(huán)過(guò)程中，BI測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表6，詳細(xì)報(bào)告見(jiàn)無(wú)菌測(cè)試報(bào)告（短周期運(yùn)行后BI的無(wú)菌測(cè)試結(jié)果、短周期運(yùn)行產(chǎn)品無(wú)菌測(cè)試結(jié)果）表 6. BI無(wú)菌測(cè)試結(jié)果周期滅菌時(shí)間EO 作用時(shí)間/min滅菌水箱溫度/EO注入重量/Kg氣洗次數(shù)培養(yǎng)時(shí)間/天培養(yǎng)溫度/BI 結(jié)果初始生物性能挑戰(zhàn)2012、12、510371.93730-3520+/20短周期 12012、12、630371.93730-3513+/20*短周期 22012、12、660371.93730-359+/20短周期32012、12、6120371.93730-355+/20半周期 12012、12、

34、7240371.93730-350+/20半周期 22012、12、7240371.93730-350+/20半周期32012、12、7240371.93730-350+/20全周期12012、12、7480432.13730-350+/20全周期22012、12、7480432.13730-350+/20* 注 ：產(chǎn)品的生物負(fù)載在經(jīng)過(guò)第一個(gè)短周期滅菌后，經(jīng)被殺滅，所以后面的滅菌循環(huán)周期均不需再對(duì)樣品進(jìn)行無(wú)菌測(cè)試。11.5 半周期根據(jù)半周期法及ISO 11135-1中生物性能確認(rèn)要求，找到?jīng)]有微生物存活的滅菌效果時(shí)需要的最短滅菌時(shí)間，在檢測(cè)BI顯示沒(méi)有微生物生長(zhǎng)的情況下，還要再重復(fù)兩次滅菌過(guò)程

35、，而且檢測(cè)均無(wú)微生物生長(zhǎng)，確立的這一個(gè)滅菌時(shí)間既是半周期時(shí)間。結(jié)果重復(fù)2次240min滅菌循環(huán)，BI測(cè)試無(wú)菌生物，無(wú)菌效果達(dá)到SAL10-6，滅菌過(guò)程中測(cè)試樣品見(jiàn)表5，BI測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表6詳細(xì)報(bào)告見(jiàn)無(wú)菌測(cè)試報(bào)告（短周期運(yùn)行后BI的無(wú)菌測(cè)試結(jié)果、短周期運(yùn)行產(chǎn)品無(wú)菌測(cè)試結(jié)果）11.6 全周期因?yàn)榘胫芷跍缇鷷r(shí)間為240min，所以全周期滅菌時(shí)間應(yīng)為480min，全周期滅菌循環(huán)參數(shù)取設(shè)定值上限, 以確認(rèn)滅菌產(chǎn)品性能，滅菌過(guò)程樣品見(jiàn)表5，BI測(cè)試結(jié)果顯示完全被殺滅，無(wú)菌效果達(dá)到SAL10-6，BI測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表6。在同樣的條件下確認(rèn)經(jīng)二次滅菌循環(huán)，結(jié)果顯示產(chǎn)品的包裝和產(chǎn)品能經(jīng)受二次滅菌。二次全周期滅菌循環(huán)B

36、I測(cè)試報(bào)告見(jiàn)無(wú)菌測(cè)試（全周期BI無(wú)菌測(cè)試） 。8. 產(chǎn)品安全性能確認(rèn)8.1. EO殘留測(cè)試 分別抽取解析1天、2天、3天的產(chǎn)品，送往韋士泰檢測(cè)中心按ISO11607-7標(biāo)準(zhǔn)用比色法測(cè)試試產(chǎn)品上EO殘留量, 結(jié)果顯示，解析三天后，產(chǎn)品上的EO殘留量符合標(biāo)準(zhǔn)要求，詳細(xì)報(bào)告見(jiàn) EO殘留測(cè)試報(bào)告 8.2. 產(chǎn)品性能確認(rèn)全部產(chǎn)品經(jīng)全周期滅菌后，產(chǎn)品的性能均符合要求. 詳細(xì)見(jiàn)附件成品檢驗(yàn)報(bào)告。8.3. 包裝完整性產(chǎn)品經(jīng)全周期滅菌后，包裝材料及封口強(qiáng)度沒(méi)有受到影響，包裝上的標(biāo)簽字跡清晰 成品檢驗(yàn)報(bào)告9. 過(guò)程的異常和方案修改無(wú)10. 結(jié)論經(jīng)有計(jì)劃的對(duì)滅菌過(guò)程確認(rèn)（安裝確認(rèn)、運(yùn)行確認(rèn)和性能確認(rèn)），并對(duì)產(chǎn)品的安

37、全性能進(jìn)行測(cè)試，所有的結(jié)果證明由州電達(dá)滅菌設(shè)備廠生產(chǎn)和安裝的HDX-1CE滅菌器，以設(shè)備技術(shù)規(guī)格一致，所建立EO滅菌手術(shù)衣的參數(shù)和滅菌過(guò)程符合 ISO 11135-1標(biāo)準(zhǔn)要求，產(chǎn)品的無(wú)菌水平達(dá)到 SAL10-6的無(wú)菌水平，EO滅菌全周期為480min,產(chǎn)品的性能和包裝符合要求11. 批準(zhǔn) 經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，參數(shù)符合工藝要求，準(zhǔn)予進(jìn)行生產(chǎn)！ 批準(zhǔn)人： 日 期：2012、12、1112. 附件目錄: 具體記錄見(jiàn)附件 環(huán)氧乙烷滅菌驗(yàn)證人員資格確認(rèn)表 KEEO 001驗(yàn)證目的：確認(rèn)參加驗(yàn)證的人員具備正確從事驗(yàn)證活動(dòng)的資格驗(yàn)證要求：1.至少有兩名經(jīng)培訓(xùn)合格的驗(yàn)證人員。 2.參與驗(yàn)證的人員與培訓(xùn)記錄相符合。驗(yàn)證依

38、據(jù)：ISO11135-1驗(yàn)證（操作）人員姓名： 人員專業(yè)： 設(shè)備管理 操作 微生物試驗(yàn) 計(jì)量管理驗(yàn)證內(nèi)容： 1. 環(huán)氧乙烷滅菌基本常識(shí) 合格 不合格 2. 計(jì)量器具校驗(yàn) 合格 不合格 3. 滅菌參數(shù)設(shè)定 合格 不合格 4. 設(shè)備操作 合格 不合格 5. 設(shè)備維護(hù) 合格 不合格 6. 物理性能鑒定 合格 不合格 7. 微生物性能鑒定 合格 不合格 8. 設(shè)備安裝 合格 不合格 驗(yàn)證方法：檢查培訓(xùn)記錄相關(guān)文檔：1. 培訓(xùn)記錄2. 操作上崗證 不合格描述：驗(yàn)證結(jié)論： 合格 不合格 驗(yàn)證人： 日期：2012.12.6審核結(jié)論： 合格 不合格 審核人： 日期：2012.12.6生物指示物使用性驗(yàn)證確認(rèn)表

39、 KEEO 002驗(yàn)證目的：確認(rèn)生物指示物滅菌過(guò)程的適用性驗(yàn)證要求：1.采購(gòu)符合法規(guī)要求； 2.產(chǎn)品符合產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)要求。驗(yàn)證依據(jù)：ISO11138 驗(yàn)證（操作）人員姓名： 產(chǎn)品名稱：枯草芽孢桿菌生物指示劑 型號(hào)規(guī)格： 生產(chǎn)批號(hào)： 生產(chǎn)企業(yè)：驗(yàn)證內(nèi)容： 資料（記錄）確認(rèn)1、 生產(chǎn)許可證 合格 不合格2、 衛(wèi)生許可證 合格 不合格3、 產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn) 合格 不合格4、出廠檢驗(yàn)報(bào)告 合格 不合格驗(yàn)證方法：核實(shí)相關(guān)資料相關(guān)文檔：生物指示物滅菌適用性驗(yàn)證文件資料明細(xì)表序號(hào)文件資料名稱編（證）號(hào)有效期備注1生產(chǎn)許可證2衛(wèi)生許可證3產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)4出廠檢驗(yàn)報(bào)告不合格描述：驗(yàn)證結(jié)論： 合格 不合格 驗(yàn)證人： 日期：2012

40、.12.6審核結(jié)論： 合格 不合格 審核人： 日期：2012.12.6生物指示物含菌量檢驗(yàn)記錄XFEO 003-1 菌種：枯草芽孢桿菌 生產(chǎn)批號(hào)： 含菌量：1×1065×106cfu 供應(yīng)商： 檢驗(yàn)時(shí)間： 2012.12.6 檢驗(yàn)人員： 檢驗(yàn)依據(jù)：GB/t 19973.1 檢驗(yàn)方法：微生物方法結(jié)果：合格編號(hào)培養(yǎng)后長(zhǎng)菌數(shù)計(jì)算結(jié)果1234567判定：符合要求，合格。 驗(yàn)證人： 日期：2012、12、6環(huán)氧乙烷適用性驗(yàn)證確認(rèn)表驗(yàn)證目的：確認(rèn)環(huán)氧乙烷滅菌過(guò)程的適用性驗(yàn)證要求：1.采購(gòu)符合法規(guī)要求；2.產(chǎn)品符合產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)要求。驗(yàn)證依據(jù)：GB13098-1驗(yàn)證（操作）人員姓名：產(chǎn)品名稱：

41、 環(huán)氧乙烷 型號(hào)規(guī)格：生產(chǎn)批號(hào)： 生產(chǎn)企業(yè)： 驗(yàn)證內(nèi)容： 資料（記錄）確認(rèn)1、 出廠檢驗(yàn)報(bào)告 合格 不合格2、產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn) 合格 不合格3、現(xiàn)場(chǎng)目測(cè)EO 滅菌劑質(zhì)量 合格 不合格 驗(yàn)證方法：核實(shí)相關(guān)資料、相關(guān)文檔：環(huán)氧乙烷滅菌適用性驗(yàn)證文件資料明細(xì)表序號(hào)文件資料名稱編（證）號(hào)有效期備注1出廠檢驗(yàn)報(bào)告2產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)不合格描述：驗(yàn)證結(jié)論： 合格 不合格 驗(yàn)證人： 日期：2012、12、06審核結(jié)論： 合格 不合格 審核人： 日期：2012、12、06產(chǎn)品初始污染菌符合性驗(yàn)證確認(rèn)表 KEEO 005驗(yàn)證目的：確認(rèn)產(chǎn)品初始污染菌的符合性驗(yàn)證要求：初始污染菌數(shù)應(yīng)符合要求驗(yàn)證依據(jù)：GB15980-1995驗(yàn)證（操

42、作）人員姓名： 產(chǎn)品名稱：一次性外科手術(shù)包 型號(hào)規(guī)格： 生產(chǎn)批號(hào)： 驗(yàn)證項(xiàng)目： 資料（記錄）確認(rèn)產(chǎn)品進(jìn)入滅菌循環(huán)前的初始污染菌試驗(yàn) 合格 不合格 驗(yàn)證方法：按GB15980-1995附錄C相關(guān)文檔：1、 產(chǎn)品初始污染菌檢驗(yàn)記錄不合格描述：驗(yàn)證結(jié)論： 合格 不合格 驗(yàn)證人： 日期：2012.12.7審核結(jié)論： 合格 不合格 審核人： 日期：2012.12.7產(chǎn)品初始污染菌試驗(yàn)記錄 KEEO 005-1產(chǎn)品名稱： 型號(hào)規(guī)格： 生產(chǎn)批號(hào)：抽樣時(shí)間： 2012、12、11 抽樣地點(diǎn)： 抽樣數(shù)量： 10支（套）檢驗(yàn)依據(jù)：GB15980-1995 檢驗(yàn)方法：GB15980-1995培養(yǎng)基名稱： 編號(hào)： 供應(yīng)商：樣品編號(hào)12345678910含菌量（cfu/set）5322436237空白對(duì)照樣品編號(hào)12含菌量（cfu/set）00結(jié)論：經(jīng)檢測(cè)，符合標(biāo)準(zhǔn)要求。 驗(yàn)證人： 日期：2012.12.7滅菌器安裝驗(yàn)證相關(guān)資料確認(rèn)表XFEO 006驗(yàn)證目的：確認(rèn)滅菌器隨機(jī)文件的完整性驗(yàn)證要求：1.滿足合同或供應(yīng)商的隨機(jī)文件； 2.滿足采購(gòu)滅菌器必須具備的法規(guī)要求。驗(yàn)證依據(jù)：無(wú)菌醫(yī)療器械生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則和供應(yīng)商的隨機(jī)文件 滅菌器規(guī)格 滅菌器編號(hào)： 供應(yīng)商： 驗(yàn)證（操作）