第四章化學(xué)毒物的一般毒性作用

1、第四章第四章 一般毒性作用一般毒性作用及其試驗(yàn)與評(píng)價(jià)方法及其試驗(yàn)與評(píng)價(jià)方法& 1 急性毒性作用急性毒性作用& 2 亞慢性和慢性毒性作用亞慢性和慢性毒性作用& 3 蓄積毒性蓄積毒性& 4 局部毒性作用局部毒性作用1 急性毒性作用急性毒性作用o一、急性毒性和急性毒性試驗(yàn)的目的一、急性毒性和急性毒性試驗(yàn)的目的o二、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn)o三、急性毒性分級(jí)三、急性毒性分級(jí)一、急性毒性和急性毒性試驗(yàn)的目的一、急性毒性和急性毒性試驗(yàn)的目的o急性毒性急性毒性(acute toxicity)(acute toxicity)是指機(jī)體是指機(jī)體( (人或試人或試驗(yàn)動(dòng)物驗(yàn)動(dòng)物)

2、)一次接觸或一次接觸或2424小時(shí)內(nèi)多次接觸小時(shí)內(nèi)多次接觸化學(xué)物化學(xué)物后在后在短期短期內(nèi)所發(fā)生的內(nèi)所發(fā)生的毒性效應(yīng)毒性效應(yīng)，包括一般行，包括一般行為、外觀改變、大體形態(tài)變化以及死亡效應(yīng)。為、外觀改變、大體形態(tài)變化以及死亡效應(yīng)。 一、急性毒性和急性毒性試驗(yàn)的目的一、急性毒性和急性毒性試驗(yàn)的目的 目的目的n測(cè)試和求出化學(xué)毒物對(duì)一種或幾種試驗(yàn)動(dòng)物的致死量測(cè)試和求出化學(xué)毒物對(duì)一種或幾種試驗(yàn)動(dòng)物的致死量( (以以ldld5050表示表示) )以及其它的急性毒性參數(shù)，了解急性毒作用強(qiáng)度。以及其它的急性毒性參數(shù)，了解急性毒作用強(qiáng)度。n并通過(guò)觀察動(dòng)物中毒表現(xiàn)和死亡的情況，了解急性毒作用并通過(guò)觀察動(dòng)物中毒表現(xiàn)和

3、死亡的情況，了解急性毒作用性質(zhì)、可能的靶器官和致死原因，提供化學(xué)毒物的急性中毒性質(zhì)、可能的靶器官和致死原因，提供化學(xué)毒物的急性中毒資料、初步資料、初步評(píng)價(jià)對(duì)人體產(chǎn)生損害的危險(xiǎn)性評(píng)價(jià)對(duì)人體產(chǎn)生損害的危險(xiǎn)性。n探求化學(xué)毒物急性毒性的探求化學(xué)毒物急性毒性的劑量劑量反應(yīng)關(guān)系反應(yīng)關(guān)系與中毒特征。與中毒特征。n為亞慢性、慢性毒性作用試驗(yàn)的染毒劑量設(shè)計(jì)提供參考依為亞慢性、慢性毒性作用試驗(yàn)的染毒劑量設(shè)計(jì)提供參考依據(jù)。據(jù)。n研究化學(xué)毒物急性中毒的預(yù)防和急救治療措施。研究化學(xué)毒物急性中毒的預(yù)防和急救治療措施。n為毒理學(xué)機(jī)制研究提供線索為毒理學(xué)機(jī)制研究提供線索 。 一、急性毒性和急性毒性試驗(yàn)的目的一、急性毒性和急性

4、毒性試驗(yàn)的目的o 急性毒性試驗(yàn)常用的毒性參數(shù)：急性毒性試驗(yàn)常用的毒性參數(shù)：n ld50/lc50n zac （ld50/limac） n ld84/ld16(或或lc84lc16) n 劑量劑量反應(yīng)曲線斜率反應(yīng)曲線斜率 毒作用帶o急性毒作用帶（急性毒作用帶（acute toxic effect acute toxic effect zone,zzone,zacac）為半數(shù)致死劑量與急性閾劑量的比為半數(shù)致死劑量與急性閾劑量的比值，表示為：值，表示為：z zacac=ld=ld5050/lim/limacac z zacac值小，說(shuō)明化學(xué)物質(zhì)從產(chǎn)生輕微損害到值小，說(shuō)明化學(xué)物質(zhì)從產(chǎn)生輕微損害到導(dǎo)致急

5、性死亡的劑量范圍窄，引起死亡的危導(dǎo)致急性死亡的劑量范圍窄，引起死亡的危險(xiǎn)性大；反之，則說(shuō)明引起死亡的危險(xiǎn)性小。險(xiǎn)性大；反之，則說(shuō)明引起死亡的危險(xiǎn)性小。 二、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn)( (一一) )試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)動(dòng)物n 原則原則 ：o 急性毒性試驗(yàn)要求選擇對(duì)化學(xué)毒物的代謝和毒急性毒性試驗(yàn)要求選擇對(duì)化學(xué)毒物的代謝和毒效應(yīng)表現(xiàn)與人的反應(yīng)盡可能一致的試驗(yàn)動(dòng)物。效應(yīng)表現(xiàn)與人的反應(yīng)盡可能一致的試驗(yàn)動(dòng)物。o 動(dòng)物易于獲得動(dòng)物易于獲得o 品系純化品系純化o 價(jià)格較低和易于飼養(yǎng)等條件。價(jià)格較低和易于飼養(yǎng)等條件。 二、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn)1 1試驗(yàn)動(dòng)物的種屬和品系試驗(yàn)動(dòng)物的種屬和品系n最好用兩種種屬的動(dòng)

6、物最好用兩種種屬的動(dòng)物n嚙齒類嚙齒類: :小鼠、大鼠、豚鼠或家兔小鼠、大鼠、豚鼠或家兔n非嚙齒類：非嚙齒類：狗或猴。狗或猴。n急性皮膚毒性試驗(yàn)急性皮膚毒性試驗(yàn)可選用成年大、小鼠、豚鼠或家兔，可選用成年大、小鼠、豚鼠或家兔，優(yōu)先考慮白色家兔。優(yōu)先考慮白色家兔。n急性吸入毒性試驗(yàn)和經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)急性吸入毒性試驗(yàn)和經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)則優(yōu)先考慮大、則優(yōu)先考慮大、小鼠。小鼠。二、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn)試驗(yàn)動(dòng)物的年齡和體重：試驗(yàn)動(dòng)物的年齡和體重：n急性試驗(yàn)動(dòng)物不宜過(guò)老或過(guò)幼，通常要求選擇剛成年動(dòng)急性試驗(yàn)動(dòng)物不宜過(guò)老或過(guò)幼，通常要求選擇剛成年動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)，而且須是未曾交配和受孕的動(dòng)物。例如：物進(jìn)行試驗(yàn)

7、，而且須是未曾交配和受孕的動(dòng)物。例如：大鼠大鼠180180240g240g、小鼠、小鼠181825g25g、家兔、家兔2 22.5kg2.5kg、豚鼠、豚鼠200200250g250g、狗、狗4 46kg6kg。( (小犬小犬) )n同一批試驗(yàn)動(dòng)物體重變異范圍不應(yīng)超過(guò)該批動(dòng)物平均體同一批試驗(yàn)動(dòng)物體重變異范圍不應(yīng)超過(guò)該批動(dòng)物平均體重的重的2020。 品品 系系周齡周齡 wistarwistar sd sd雌性雌性雄性雄性雌性雌性雄性雄性 3 35454565650505252 4 4919197978686101101 5 5134134134134130130150150 6 61661661

8、87187172172206206 7 7209209233233210210262262 8 8214214297297240240318318 9 92322323253252582583653651010246246370370272272399399大鼠體重與周齡的關(guān)系大鼠體重與周齡的關(guān)系 小鼠體重與周齡的關(guān)系小鼠體重與周齡的關(guān)系 品品 系系 周齡周齡 昆明昆明 balb/cbalb/c c57bl/6 c57bl/6 615 615 雌性雌性 雄性雄性 雌性雌性 雄性雄性 雌性雌性 雄性雄性 雌性雌性 雄性雄性 0 01.951.95 2.10 2.10 1.40 1.40 1.46

9、 1.46 1.40 1.40 1.44 1.44 1.58 1.58 1.58 1.58 1 15.545.54 5.82 5.82 3.35 3.35 3.50 3.50 3.42 3.42 3.50 3.50 4.64 4.64 4.64 4.64 2 27.907.90 8.35 8.35 5.50 5.50 5.60 5.60 5.55 5.55 5.60 5.60 7.96 7.96 7.96 7.96 3 313.5513.55 14.80 14.80 7.32 7.32 7.40 7.40 6.40 6.40 6.90 6.90 9.83 9.83 9.83 9.83 4 42

10、1.3521.35 22.60 22.6011.6011.6012.4512.4512.2012.2012.5712.5715.7515.7519.0019.00 5 527.9027.90 33.25 33.2514.7514.7516.1016.1016.9016.9018.1018.1020.7520.7522.5822.58 6 632.8032.80 39.25 39.2515.6015.6017.4017.4018.4018.4020.5020.5021.8821.8825.9625.96 7 734.7034.70 39.90 39.9016.1016.1018.6518.651

11、9.0019.0021.6021.6023.1223.1227.9627.96 8 834.8034.80 40.05 40.0518.1618.1620.2520.2520.2520.2522.4022.4024.1624.1628.8328.83二、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn)3.3.試驗(yàn)動(dòng)物的性別：試驗(yàn)動(dòng)物的性別：n 急性毒性試驗(yàn)的主要內(nèi)容是求急性毒性試驗(yàn)的主要內(nèi)容是求ldld5050，除特殊要求外，除特殊要求外，一般急性毒性試驗(yàn)對(duì)動(dòng)物性別要求為一般急性毒性試驗(yàn)對(duì)動(dòng)物性別要求為雌雄各半雌雄各半。n 如果在預(yù)試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)化學(xué)毒物如果在預(yù)試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)化學(xué)毒物( (如農(nóng)藥如農(nóng)藥) )對(duì)雌、雄動(dòng)物對(duì)

12、雌、雄動(dòng)物毒效應(yīng)的敏感性有明顯差異，則應(yīng)單獨(dú)分別求出雌性毒效應(yīng)的敏感性有明顯差異，則應(yīng)單獨(dú)分別求出雌性與雄性動(dòng)物各自的與雄性動(dòng)物各自的ldld5050。n 如果試驗(yàn)是為致畸試驗(yàn)作準(zhǔn)備，也可僅作雌性動(dòng)物的如果試驗(yàn)是為致畸試驗(yàn)作準(zhǔn)備，也可僅作雌性動(dòng)物的ldld5050測(cè)試。測(cè)試。 二、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn)n大、小鼠等小動(dòng)物大、小鼠等小動(dòng)物 每組每組10只，兔每組只，兔每組8只只n狗等大動(dòng)物狗等大動(dòng)物 每組每組6只只n分組原則分組原則隨機(jī)化原則隨機(jī)化原則n一般要求設(shè)一般要求設(shè)5-7組組n經(jīng)消化道染毒時(shí)，要求試驗(yàn)前對(duì)動(dòng)物禁食經(jīng)消化道染毒時(shí)，要求試驗(yàn)前對(duì)動(dòng)物禁食n大鼠、小鼠大鼠、小鼠隔夜進(jìn)食；染

13、毒后禁食隔夜進(jìn)食；染毒后禁食4hn大動(dòng)物大動(dòng)物每日上午喂食前染毒每日上午喂食前染毒n染毒后繼續(xù)禁食染毒后繼續(xù)禁食24h，但在禁食時(shí)要保障飲水。，但在禁食時(shí)要保障飲水。n選擇健康動(dòng)物選擇健康動(dòng)物n12周的檢疫期周的檢疫期二、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn) （二）試驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)環(huán)境（二）試驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)環(huán)境n 恒定的溫度：恒定的溫度：223n 濕度：濕度：3070%n 照度：晝夜各半照度：晝夜各半n 飼料合格、飲水合格、墊料合格飼料合格、飲水合格、墊料合格二、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn)（三）染毒途徑的選擇（三）染毒途徑的選擇: 染毒途徑（染毒途徑（exposure routes）的選擇需考慮：）的選

14、擇需考慮：模模擬人在生活和生產(chǎn)環(huán)境中實(shí)際接觸受試物的途徑擬人在生活和生產(chǎn)環(huán)境中實(shí)際接觸受試物的途徑和方式和方式；有利于不同化學(xué)物之間急性毒性大小的有利于不同化學(xué)物之間急性毒性大小的比較比較；受試物的性質(zhì)和用途；各種受試物毒性評(píng)受試物的性質(zhì)和用途；各種受試物毒性評(píng)價(jià)程序的要求等。價(jià)程序的要求等。 最常用的染毒途徑為最常用的染毒途徑為經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注射途徑。射途徑。 受試樣品受試樣品二、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn)o 經(jīng)口經(jīng)口( (胃腸道胃腸道) )接觸接觸 : 灌胃灌胃: :小鼠小鼠0.20.2 1.0ml/1.0ml/只或只或0.10.1 0.5ml/10g0.

15、5ml/10g 大鼠一次灌胃體積不超過(guò)大鼠一次灌胃體積不超過(guò)5ml/5ml/只只 家兔不超過(guò)家兔不超過(guò)10ml/2kg10ml/2kg 狗不超過(guò)狗不超過(guò)50ml/10kg50ml/10kg 吞咽膠囊吞咽膠囊: : o 經(jīng)呼吸道接觸經(jīng)呼吸道接觸 : 靜式吸入靜式吸入 動(dòng)式吸入動(dòng)式吸入 o 經(jīng)皮膚接觸經(jīng)皮膚接觸 :o 注射途徑接觸注射途徑接觸: : 二、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn)（四）染毒劑量與分組（四）染毒劑量與分組: 1 1查閱文獻(xiàn)查閱文獻(xiàn)o 了解化學(xué)毒物的結(jié)構(gòu)式、分子量、常溫常壓下的狀態(tài)、了解化學(xué)毒物的結(jié)構(gòu)式、分子量、常溫常壓下的狀態(tài)、熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、密度、閃點(diǎn)、揮發(fā)度、蒸氣壓、水溶性和熔點(diǎn)、

16、沸點(diǎn)、密度、閃點(diǎn)、揮發(fā)度、蒸氣壓、水溶性和脂溶性等理化特性，生產(chǎn)批號(hào)及純度，雜質(zhì)成分與含量脂溶性等理化特性，生產(chǎn)批號(hào)及純度，雜質(zhì)成分與含量等。等。o 確定使用哪一種計(jì)算方法求確定使用哪一種計(jì)算方法求ldld5050，然后再設(shè)計(jì)劑量分，然后再設(shè)計(jì)劑量分組。組。ldld5050的計(jì)算方法常用寇氏法、概率單位法、霍氏法的計(jì)算方法常用寇氏法、概率單位法、霍氏法等。等。o 找出與受試化學(xué)毒物結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)近似的化學(xué)物的找出與受試化學(xué)毒物結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)近似的化學(xué)物的毒性資料，并以文獻(xiàn)資料中相同的動(dòng)物種系和相同接觸毒性資料，并以文獻(xiàn)資料中相同的動(dòng)物種系和相同接觸途徑所測(cè)得的途徑所測(cè)得的ldld5050(lc

17、(lc5050) )值作為受試化學(xué)物的值作為受試化學(xué)物的預(yù)期毒性預(yù)期毒性中值中值。 二、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn) 2 2預(yù)試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn) o 設(shè)定以此預(yù)期值作為待測(cè)化學(xué)物的中間劑量組，并在設(shè)定以此預(yù)期值作為待測(cè)化學(xué)物的中間劑量組，并在該劑量的上下各設(shè)計(jì)該劑量的上下各設(shè)計(jì)l l一一2 2個(gè)劑量組作為預(yù)試驗(yàn)劑量。個(gè)劑量組作為預(yù)試驗(yàn)劑量。o 根據(jù)確定的劑量組進(jìn)行染毒。根據(jù)確定的劑量組進(jìn)行染毒。o 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的死亡資料根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的死亡資料確定組距。確定組距。 可根據(jù)以下公式計(jì)算出劑量分組：可根據(jù)以下公式計(jì)算出劑量分組： i=(lgldi=(lgld9090-lgld-lgld1010) )(n-1)

18、(n-1) 或：或：i=(lgldi=(lgld100100-lgld-lgld0 0) )(n-1)(n-1) 式中式中i i為組距為組距( (相鄰的兩個(gè)劑量組對(duì)數(shù)劑量之差相鄰的兩個(gè)劑量組對(duì)數(shù)劑量之差) )； n n為設(shè)計(jì)的劑量組數(shù)。為設(shè)計(jì)的劑量組數(shù)。 組距組距(對(duì)數(shù)對(duì)數(shù)) 或或 式中：式中：n-設(shè)計(jì)的劑量組數(shù)設(shè)計(jì)的劑量組數(shù)1lglg1090nldldi1lglg0100nldldi二、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn) 3 3正式試驗(yàn)正式試驗(yàn) o 一般來(lái)說(shuō)，根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)所選用的一般來(lái)說(shuō)，根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)所選用的ldld5050計(jì)算方法來(lái)確定組計(jì)算方法來(lái)確定組數(shù)。例如幾率單位法、寇氏法一般設(shè)數(shù)。例如幾

19、率單位法、寇氏法一般設(shè)6 61010個(gè)劑量組；霍個(gè)劑量組；霍氏法固定設(shè)氏法固定設(shè)4 4個(gè)劑量組。求得個(gè)劑量組。求得i i值后以最低劑量組值后以最低劑量組(ld(ld0 0或或ldld1010) )的對(duì)數(shù)劑量加上一個(gè)的對(duì)數(shù)劑量加上一個(gè)i i值，即是第二個(gè)劑量組的對(duì)數(shù)值，即是第二個(gè)劑量組的對(duì)數(shù)劑量，依此類推直至最高劑量組，查各自的反對(duì)數(shù)即得出劑量，依此類推直至最高劑量組，查各自的反對(duì)數(shù)即得出各組劑量的真實(shí)值。各組劑量的真實(shí)值。 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 o lgld0 lgld0+i lgld0+2i lgld0+3i lgld0+4i o 另一種方法：另一種方法：算出公比算出公比

20、r r二、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn)（五）試驗(yàn)周期與毒效應(yīng)觀察（五）試驗(yàn)周期與毒效應(yīng)觀察n1.中毒癥狀中毒癥狀二、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn) 2.體重體重o 在觀察試驗(yàn)動(dòng)物中毒癥狀的過(guò)程中，應(yīng)同時(shí)觀察體重的在觀察試驗(yàn)動(dòng)物中毒癥狀的過(guò)程中，應(yīng)同時(shí)觀察體重的變化。變化。體重可以反映動(dòng)物中毒后的整體變化。體重可以反映動(dòng)物中毒后的整體變化。體重改變體重改變的原因很多：的原因很多：o 若化學(xué)毒物刺激或損傷消化道可出現(xiàn)試驗(yàn)動(dòng)物飲食減少若化學(xué)毒物刺激或損傷消化道可出現(xiàn)試驗(yàn)動(dòng)物飲食減少甚至拒食，表現(xiàn)為體重減輕。甚至拒食，表現(xiàn)為體重減輕。o 若化學(xué)毒物引起腹瀉，將影響食物吸收和利用，體重也若化學(xué)毒物引起腹瀉

21、，將影響食物吸收和利用，體重也會(huì)減輕。會(huì)減輕。o 若化學(xué)毒物影響水的攝取或腎功能急性損傷，也可能在若化學(xué)毒物影響水的攝取或腎功能急性損傷，也可能在體重上反映出來(lái)。體重上反映出來(lái)。因此，對(duì)存活動(dòng)物尤其是對(duì)低于因此，對(duì)存活動(dòng)物尤其是對(duì)低于ldld5050劑量組的存活動(dòng)物應(yīng)劑量組的存活動(dòng)物應(yīng)在觀察期在觀察期1414天內(nèi)稱量其體重的變化以便了解受試物引天內(nèi)稱量其體重的變化以便了解受試物引起毒效應(yīng)的持續(xù)時(shí)間。起毒效應(yīng)的持續(xù)時(shí)間。 二、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn)3.3.病理檢查及其他指標(biāo)病理檢查及其他指標(biāo): :o 急性毒性試驗(yàn)中，急性毒性試驗(yàn)中，對(duì)死亡的動(dòng)物對(duì)死亡的動(dòng)物均應(yīng)及時(shí)進(jìn)行大均應(yīng)及時(shí)進(jìn)行大體解剖

22、和病理組織學(xué)檢查，肉眼觀察主要臟器的體解剖和病理組織學(xué)檢查，肉眼觀察主要臟器的大體病理變化，如臟器大小、外觀、色澤的變化，大體病理變化，如臟器大小、外觀、色澤的變化，有無(wú)充血、出血、水腫或其它改變，對(duì)有改變的有無(wú)充血、出血、水腫或其它改變，對(duì)有改變的臟器進(jìn)行取材做組織病理學(xué)檢查。臟器進(jìn)行取材做組織病理學(xué)檢查。觀察期結(jié)束后觀察期結(jié)束后對(duì)存活動(dòng)物對(duì)存活動(dòng)物進(jìn)行大體病理檢查必要時(shí)做組織病進(jìn)行大體病理檢查必要時(shí)做組織病理學(xué)檢查。根據(jù)試驗(yàn)需要可進(jìn)一步擴(kuò)大觀察項(xiàng)目。理學(xué)檢查。根據(jù)試驗(yàn)需要可進(jìn)一步擴(kuò)大觀察項(xiàng)目。如體溫、心電圖、腦電圖或進(jìn)行某些生化指標(biāo)測(cè)如體溫、心電圖、腦電圖或進(jìn)行某些生化指標(biāo)測(cè)定等。定等。二

23、、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn)4.死亡和死亡時(shí)間死亡和死亡時(shí)間o 重點(diǎn)觀察和記錄每只動(dòng)物死亡的時(shí)間，特重點(diǎn)觀察和記錄每只動(dòng)物死亡的時(shí)間，特別是最早出現(xiàn)死亡的時(shí)間以及各個(gè)劑量組別是最早出現(xiàn)死亡的時(shí)間以及各個(gè)劑量組動(dòng)物的死亡數(shù)。對(duì)分析中毒死亡時(shí)間的規(guī)動(dòng)物的死亡數(shù)。對(duì)分析中毒死亡時(shí)間的規(guī)律具有一定意義，可為深入研究化學(xué)物的律具有一定意義，可為深入研究化學(xué)物的毒作用機(jī)制提供參考。毒作用機(jī)制提供參考。 ld50的測(cè)定與計(jì)算的測(cè)定與計(jì)算二、急性毒性試驗(yàn)二、急性毒性試驗(yàn)(六六)經(jīng)典急性毒性試驗(yàn)的局限性經(jīng)典急性毒性試驗(yàn)的局限性n 1.消耗的動(dòng)物量大消耗的動(dòng)物量大n 2.獲得的信息有限獲得的信息有限n 3.測(cè)得

24、的測(cè)得的ld50僅僅是一個(gè)近似值僅僅是一個(gè)近似值n 4.在安全性評(píng)價(jià)中僅評(píng)價(jià)動(dòng)物死亡和簡(jiǎn)單的在安全性評(píng)價(jià)中僅評(píng)價(jià)動(dòng)物死亡和簡(jiǎn)單的癥狀觀察是不夠的，更需要的是生理學(xué)、血癥狀觀察是不夠的，更需要的是生理學(xué)、血液學(xué)及其它化驗(yàn)檢查所提供的深入細(xì)致的毒液學(xué)及其它化驗(yàn)檢查所提供的深入細(xì)致的毒性信息。性信息。三、急性毒性的分級(jí)與評(píng)價(jià)三、急性毒性的分級(jí)與評(píng)價(jià)外源化學(xué)物急性毒性分級(jí)（外源化學(xué)物急性毒性分級(jí)（who）毒性毒性分級(jí)分級(jí)大鼠一次經(jīng)口大鼠一次經(jīng)口ld50 (mg/kg)6只大鼠吸入只大鼠吸入4小時(shí)，小時(shí)，死亡死亡24只的濃度只的濃度(ppm)兔經(jīng)皮兔經(jīng)皮ld50(/mg/kg)對(duì)人可能致死的估計(jì)量對(duì)人可

25、能致死的估計(jì)量g/kg總量總量(g/60kg)劇毒劇毒1105151000我國(guó)食品毒理急性毒性分級(jí)法我國(guó)食品毒理急性毒性分級(jí)法(1994)急性毒性分級(jí)急性毒性分級(jí)大鼠經(jīng)口大鼠經(jīng)口ld50(mg/kg)大致相當(dāng)于大致相當(dāng)于70kg人的致死量人的致死量6級(jí)級(jí)(極毒極毒)1稍嘗稍嘗,150001050克克一一 亞慢性毒性作用：亞慢性毒性作用： 亞慢性毒性的概念亞慢性毒性的概念 亞慢性毒性試驗(yàn)的目的亞慢性毒性試驗(yàn)的目的 亞慢性毒性試驗(yàn)的設(shè)計(jì)亞慢性毒性試驗(yàn)的設(shè)計(jì) 二二 慢性毒性作用：慢性毒性作用： 慢性毒性的概念慢性毒性的概念 慢性毒性試驗(yàn)的目的慢性毒性試驗(yàn)的目的 慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì) 2

26、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)(一一) 概念：概念： 亞慢性毒性亞慢性毒性(subchronic toxicity)是指是指人或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物人或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物連續(xù)接觸連續(xù)接觸較長(zhǎng)時(shí)間、較大劑量較長(zhǎng)時(shí)間、較大劑量的外源化合物所引起的毒性效應(yīng)。的外源化合物所引起的毒性效應(yīng)。慢性毒性慢性毒性(chronic toxicity)是指人或?qū)嵤侵溉嘶驅(qū)嶒?yàn)動(dòng)物驗(yàn)動(dòng)物長(zhǎng)期長(zhǎng)期(甚至終生甚至終生)反復(fù)接觸反復(fù)接觸低劑量低劑量的化學(xué)毒物所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。的化學(xué)毒物所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。一、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)的概念、目的一、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)的概念、目的（二）試驗(yàn)?zāi)康模海ǘ┰囼?yàn)?zāi)康模?1.1.確定受試物亞慢性和慢

27、性毒性的效應(yīng)譜，對(duì)在急性及亞急性毒性試確定受試物亞慢性和慢性毒性的效應(yīng)譜，對(duì)在急性及亞急性毒性試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的毒作用提供新的信息，驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的毒作用提供新的信息，并發(fā)現(xiàn)在急性及亞急性毒性試驗(yàn)中并發(fā)現(xiàn)在急性及亞急性毒性試驗(yàn)中未發(fā)現(xiàn)的毒作用；未發(fā)現(xiàn)的毒作用； 2.2.研究受試物亞慢性和慢性毒作用的研究受試物亞慢性和慢性毒作用的靶器官靶器官； 3.3.研究受試物亞慢性和慢性毒性研究受試物亞慢性和慢性毒性劑量劑量反應(yīng)反應(yīng)( (效應(yīng)效應(yīng)) )關(guān)系關(guān)系，確定其觀察，確定其觀察到有害作用的最低劑量到有害作用的最低劑量(loael)(loael)和未觀察到有害作用的劑量（和未觀察到有害作用的劑量（noaelnoae

28、l），），提出此受試物的安全限量參考值；提出此受試物的安全限量參考值； 4.4.研究受試物亞慢性和慢性毒性損害的研究受試物亞慢性和慢性毒性損害的可逆性可逆性； 5.5.亞慢性毒性試驗(yàn)為慢性毒性試驗(yàn)的劑量設(shè)計(jì)及觀察指標(biāo)選擇提供依亞慢性毒性試驗(yàn)為慢性毒性試驗(yàn)的劑量設(shè)計(jì)及觀察指標(biāo)選擇提供依據(jù)；據(jù)； 6.6.確定不同動(dòng)物物種對(duì)受試物亞慢性和慢性毒效應(yīng)的差異，為將毒性確定不同動(dòng)物物種對(duì)受試物亞慢性和慢性毒效應(yīng)的差異，為將毒性研究結(jié)果外推到人提供依據(jù)。研究結(jié)果外推到人提供依據(jù)。一、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)的概念、目的一、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)的概念、目的二、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)二、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)

29、（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇 亞慢性毒性試驗(yàn)亞慢性毒性試驗(yàn) 年齡：年齡：大鼠大鼠80100g 狗狗 812月月 小鼠小鼠1015g數(shù)量：數(shù)量：小動(dòng)物小動(dòng)物20 大動(dòng)物大動(dòng)物6性別：性別：雌雄各半雌雄各半 慢性毒性試驗(yàn)慢性毒性試驗(yàn)?zāi)挲g：年齡：大鼠大鼠 5070g 狗狗 8月月 小鼠小鼠 初斷乳初斷乳數(shù)量：數(shù)量：小動(dòng)物小動(dòng)物40 大動(dòng)物大動(dòng)物8性別：性別：雌雄各半雌雄各半（二）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒期限：（二）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒期限：n 工業(yè)毒理學(xué)工業(yè)毒理學(xué) 36個(gè)月個(gè)月n 食品毒理學(xué)食品毒理學(xué) 6個(gè)月個(gè)月1年年n 環(huán)境毒理學(xué)環(huán)境毒理學(xué) 6個(gè)月個(gè)月1年年n 致癌試驗(yàn)致癌試驗(yàn) 接近或等于動(dòng)物的預(yù)期壽命接近或

30、等于動(dòng)物的預(yù)期壽命二、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)二、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì) n經(jīng)消化道經(jīng)消化道n經(jīng)呼吸道經(jīng)呼吸道n經(jīng)皮膚經(jīng)皮膚二、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)二、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)（三）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒方式（三）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒方式n亞慢性毒性的劑量選擇亞慢性毒性的劑量選擇o 陰性對(duì)照組陰性對(duì)照組o 低劑量組低劑量組o 中劑量組中劑量組o 高劑量組高劑量組 急性毒性的閾劑量急性毒性的閾劑量 1/201/5 ld50o 組距：組距：310倍，倍，最低不小于最低不小于2倍倍n慢性毒性的劑量選擇慢性毒性的劑量選擇o 陰性對(duì)照組陰性對(duì)照組o 低劑量組低劑量組o 中劑量組中劑量組o 高劑量組高劑量組 亞慢性閾

31、劑量或其亞慢性閾劑量或其1/51/2 1/10 ld50o 組距：組距：25倍，最低不小倍，最低不小于于2倍倍（四）試驗(yàn)分組和劑量設(shè)計(jì)（四）試驗(yàn)分組和劑量設(shè)計(jì)（五）觀察指標(biāo)（五）觀察指標(biāo)1.一般綜合性觀察指標(biāo)：一般綜合性觀察指標(biāo)：o外觀體征、行為活動(dòng)、體重、食物利用率外觀體征、行為活動(dòng)、體重、食物利用率2. 一般化驗(yàn)指標(biāo)：一般化驗(yàn)指標(biāo)：血常規(guī)；尿液檢查；血常規(guī)；尿液檢查； sgpt sgot等等3. 系統(tǒng)尸解和病理學(xué)檢查：系統(tǒng)尸解和病理學(xué)檢查：o（1）臟器濕重、臟器系數(shù)（臟器濕重、臟器系數(shù)（臟臟/ /體比值體比值 ）（如如肝肝/ /體比，即體比，即( (全肝濕重全肝濕重/ /體重體重) ) 1

32、00100 ）o（2）病理學(xué)檢查病理學(xué)檢查4.特異性指標(biāo)：特異性指標(biāo)：（五）觀察指標(biāo)（五）觀察指標(biāo)二、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)二、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)o 一、一、基本概念基本概念o二二、蓄積毒性試驗(yàn)方法及其評(píng)價(jià)蓄積毒性試驗(yàn)方法及其評(píng)價(jià) 3 蓄積毒性蓄積毒性 化學(xué)毒物進(jìn)入機(jī)體后，經(jīng)過(guò)生物轉(zhuǎn)化以代謝產(chǎn)化學(xué)毒物進(jìn)入機(jī)體后，經(jīng)過(guò)生物轉(zhuǎn)化以代謝產(chǎn)物或化學(xué)物原型排出體外。但是，當(dāng)化學(xué)毒物反物或化學(xué)物原型排出體外。但是，當(dāng)化學(xué)毒物反復(fù)多次給動(dòng)物染毒，化學(xué)毒物進(jìn)入機(jī)體的速度復(fù)多次給動(dòng)物染毒，化學(xué)毒物進(jìn)入機(jī)體的速度( (或或總量總量) )超過(guò)代謝轉(zhuǎn)化的速度和排泄的速度超過(guò)代謝轉(zhuǎn)化的速度和排泄的速度( (或總

33、量或總量) )時(shí)，化學(xué)毒物或其代謝產(chǎn)物就有可能在機(jī)體內(nèi)逐時(shí)，化學(xué)毒物或其代謝產(chǎn)物就有可能在機(jī)體內(nèi)逐漸增加并貯留，這種現(xiàn)象稱為化學(xué)毒物的漸增加并貯留，這種現(xiàn)象稱為化學(xué)毒物的蓄積作蓄積作用用(accumulation)(accumulation)。 一、基本概念一、基本概念 物質(zhì)蓄積物質(zhì)蓄積(material accumulation)(material accumulation)機(jī)體少量反復(fù)多機(jī)體少量反復(fù)多次接觸毒物，其量逐漸積累，可分析檢測(cè)出該物質(zhì)次接觸毒物，其量逐漸積累，可分析檢測(cè)出該物質(zhì)的增加過(guò)程，量隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，直至中毒閾值的增加過(guò)程，量隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，直至中毒閾值產(chǎn)生毒作用產(chǎn)生毒

34、作用 功能蓄積功能蓄積(functional accumulation)(functional accumulation)機(jī)體少量反復(fù)機(jī)體少量反復(fù)多次接觸毒物，每次引起的功能損傷逐漸積累，當(dāng)多次接觸毒物，每次引起的功能損傷逐漸積累，當(dāng)積累到一定程度時(shí)出現(xiàn)毒性效應(yīng)，而檢測(cè)手段卻查積累到一定程度時(shí)出現(xiàn)毒性效應(yīng)，而檢測(cè)手段卻查不出體內(nèi)的毒物的存在或增加。不出體內(nèi)的毒物的存在或增加。一、基本概念一、基本概念二、蓄積毒性試驗(yàn)方法及其評(píng)價(jià)二、蓄積毒性試驗(yàn)方法及其評(píng)價(jià)n 化學(xué)毒物的化學(xué)毒物的蓄積作用是發(fā)生慢性中毒的物質(zhì)基礎(chǔ)蓄積作用是發(fā)生慢性中毒的物質(zhì)基礎(chǔ)，因此研究化學(xué)毒物在機(jī)體內(nèi)的蓄積性是評(píng)價(jià)化學(xué)毒因此研究

35、化學(xué)毒物在機(jī)體內(nèi)的蓄積性是評(píng)價(jià)化學(xué)毒物能否引起潛在慢性毒性的依據(jù)之一，也是衛(wèi)生標(biāo)物能否引起潛在慢性毒性的依據(jù)之一，也是衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)制訂過(guò)程選擇安全系數(shù)的主要依據(jù)。準(zhǔn)制訂過(guò)程選擇安全系數(shù)的主要依據(jù)。n 蓄積毒性試驗(yàn)是研究化學(xué)毒物基礎(chǔ)毒性的重要內(nèi)容蓄積毒性試驗(yàn)是研究化學(xué)毒物基礎(chǔ)毒性的重要內(nèi)容之一，之一，目的是通過(guò)試驗(yàn)求出蓄積系數(shù)目的是通過(guò)試驗(yàn)求出蓄積系數(shù)k k，了解化學(xué)毒，了解化學(xué)毒物蓄積毒性的強(qiáng)弱，物蓄積毒性的強(qiáng)弱，并為慢性毒性試驗(yàn)及其他有關(guān)并為慢性毒性試驗(yàn)及其他有關(guān)毒性試驗(yàn)的劑量選擇提供參考。毒性試驗(yàn)的劑量選擇提供參考。(一一)蓄積系數(shù)法蓄積系數(shù)法 n 蓄積系數(shù)蓄積系數(shù)(accumulation

36、coefficient)(accumulation coefficient)是多次是多次染毒使半數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)效應(yīng)染毒使半數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)效應(yīng)( (或死亡或死亡) )的累積劑量的累積劑量eded5050(n)(n)與一次染毒使半數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)相同效與一次染毒使半數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)相同效應(yīng)應(yīng)( (或死亡或死亡) )的劑量的劑量eded5050(1)(1)的比值，即：的比值，即：k keded5050(n)/ed(n)/ed5050(1)(1)k kldld5050(n)/ld(n)/ld5050(1) (1) 二、蓄積毒性試驗(yàn)方法及其評(píng)價(jià)二、蓄積毒性試驗(yàn)方法及其評(píng)價(jià) 1 1固定劑量法：固定劑量法： 一般常選用一般常選

37、用大、小鼠灌胃或腹腔注射大、小鼠灌胃或腹腔注射方法進(jìn)行染毒。先方法進(jìn)行染毒。先求出求出ldld5050，然后選取相同條件的，然后選取相同條件的4040只只( (或更多或更多) )實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，分實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，分為兩組，一為染毒組，一為對(duì)照組，每組至少為兩組，一為染毒組，一為對(duì)照組，每組至少2020只，雌雄只，雌雄各半。試驗(yàn)組在各半。試驗(yàn)組在1 12020l l50ld50ld5050的范圍內(nèi)選定一個(gè)劑量，的范圍內(nèi)選定一個(gè)劑量，每日以固定劑量、定時(shí)和相同途徑進(jìn)行染毒每日以固定劑量、定時(shí)和相同途徑進(jìn)行染毒, ,試驗(yàn)期間觀察試驗(yàn)期間觀察記錄每組動(dòng)物死亡數(shù)。記錄每組動(dòng)物死亡數(shù)。當(dāng)試驗(yàn)組累積發(fā)生一半動(dòng)物死亡即當(dāng)

38、試驗(yàn)組累積發(fā)生一半動(dòng)物死亡即可終止試驗(yàn)可終止試驗(yàn)。此時(shí)，計(jì)算累積總接觸劑量。此時(shí)，計(jì)算累積總接觸劑量ldld5050(n)(n)，根據(jù)，根據(jù)公式計(jì)算公式計(jì)算k k值，然后依表值，然后依表6 65 5進(jìn)行評(píng)價(jià)。但若接觸劑量已累進(jìn)行評(píng)價(jià)。但若接觸劑量已累積達(dá)到積達(dá)到5 5個(gè)個(gè)ldld5050劑量，也可終止試驗(yàn)。劑量，也可終止試驗(yàn)。二、蓄積毒性試驗(yàn)方法及其評(píng)價(jià)二、蓄積毒性試驗(yàn)方法及其評(píng)價(jià) 2 2劑量遞增法：劑量遞增法： 3 3劑量固定的劑量固定的2020天蓄積法：天蓄積法： 它通常采用經(jīng)口灌胃染毒方式，將動(dòng)物隨機(jī)分為它通常采用經(jīng)口灌胃染毒方式，將動(dòng)物隨機(jī)分為5 5個(gè)組，包括個(gè)組，包括陰性陰性對(duì)照組對(duì)照組和和1/20 ld1/20 ld5050、