食品生物技術導論復習提綱

1、第二、四、八章一、名詞解釋1、食品生物技術：食品生物技術指生物技術在食品工業(yè)中的應用，其以基因工程技術為核心手段，包括細胞工程、酶工程、發(fā)酵工程和蛋白質工程等技術，貫穿于食品制造的全過程（上游過程和下游過程）。或者，利用生物體及其細胞、亞細胞和分子組成部分，結合工程學、信息學等手段研究及加工處理或制造食品產(chǎn)品的新技術。2、基因工程：指用酶學方法將異源基因與載體DNA進行體外重組，將形成的重組DNA導入宿體細胞，使異源基因在宿體細胞中復制表達，從而達到改造生物品種或性狀，大量生產(chǎn)出人類所需的生物品種和產(chǎn)物，也稱分子克隆或重組DNA技術。3、目的基因：指已被或欲被分離、改造、擴增和表達的特定基因或

2、DNA片段，能編碼某一產(chǎn)物或某一性狀，又稱特異基因或靶基因。4、基因重組：指將目的基因（或外源基因）與載體在體外結合構建形成重組子。5、感受態(tài)：指宿主細胞能吸收外源DNA分子而有效作為轉化受體的某些生理狀態(tài)。6、限制性內切酶：指一類以環(huán)形或線形雙鏈DNA為底物，能識別雙鏈DNA中特殊核苷酸序列，并在合適的反應條件下使每條鏈一定位點上的磷酸二酯鍵斷開，產(chǎn)生具有3-OH和5-P基團的DNA片段的內切脫氧核糖核酸酶。7、酶的固定化：是指將酶與不溶性載體結合，使游離酶、細胞或細胞器等的催化活動完全或基本上限制在一定空間內的過程。8、酶分子修飾：通過改變酶分子的結構，使酶的某些特性和功能發(fā)生改變的技術。

3、9、轉基因食品：是指用轉基因生物制造、生產(chǎn)的食品、食品原料及食品添加物等。10、受體（宿主）細胞：指在轉化、轉導和雜交中接受外源基因DNA導入的細胞，是重組體擴增的場所。二、思考題1、堿性SDS法提取質粒的原理。在pH12.012.5范圍內使染色體中雙螺旋開鏈DNA選擇性變性，而閉環(huán)雙鏈DNA不變性。經(jīng)乙酸鈉中和后，SDS引起蛋白質-SDS復合物和相對分子質量高的DNA沉淀，再經(jīng)高速離心將質粒DNA留于上清液中而分離。2、限制性內切酶的作用機制。限制性內切酶以環(huán)狀或線性的雙鏈DNA為底物，在一定條件下，識別一定的核苷酸序列，在兩條鏈的特定的磷酸二酯鍵上催化切開，產(chǎn)生具有3-OH和5-P基團的D

4、NA片段。3、酶分子修飾的主要方法有哪些？（1）化學修飾：利用化學手段將某些化學物質或基團結合到酶分子上，或將酶分子的某些部分刪除或置換，改變酶的理化性質，最終達到改變酶催化性質的目的。大分子結合修飾； 肽鏈有限水解修飾；側鏈基團修飾；分子內或分子間交聯(lián)：使用雙功能試劑交聯(lián)，更穩(wěn)定；氨基酸置換修飾：改變活力中心的氨基酸；金屬離子置換修飾：如將?；被崴饷傅幕盍χ行牡腪n2+置換為Co2+。（2）物理修飾：通過物理方法，不改變酶的組成單位及基團，只使酶分子的空間構象發(fā)生改變（副鍵變化或重排），而改變酶的某些特性和功能。高壓處理：酶活提高；最適條件改變；適當變性改變空間構象：穩(wěn)定性適當提高4

5、、提高微生物產(chǎn)酶的措施主要有哪些？（1）選育優(yōu)良細胞（基因重組技術）（2）強化生產(chǎn)過程： 控制合理發(fā)酵條件：pH、溫度、基質濃度等；添加誘導物：如乳糖誘導-半乳糖苷酶；控制阻遏物濃度：產(chǎn)物積累一定濃度，合成受阻；添加表面活性劑：主要是非離子型表面活性劑；添加產(chǎn)酶促進劑： 植酸鈣鎂、聚乙烯等5、固定化處理后酶的性質會發(fā)生哪些改變？（1）固定化酶的活力：與其溶液酶相比，大多數(shù)固定化酶活性下降。（2）固定化酶的穩(wěn)定性：大多數(shù)酶在固定化后都不同程度地提高了穩(wěn)定性，延長了有效壽命。熱穩(wěn)定性：大多數(shù)酶固定化后與溶液酶相比，有較高的熱穩(wěn)定性，反應的溫度一般較溶液酶的高pH一酶活力關系：反應的最適pH和酶活力

6、-pH曲線的變動依據(jù)酶蛋白和載體的電荷而定。 帶負電荷的載體，往往導致固定化酶的最適pH向堿性方向移動；帶正電荷的載體則相反。對蛋白酶的抵抗力提高：溶液酶經(jīng)固定化后提高了對蛋白酶的抵抗能力。對變性劑、抑制劑的抵抗能力提高：酶經(jīng)固定化后，提高了對蛋白質變性劑和抑制劑的抵抗能力。操作穩(wěn)定性：固定化酶在操作中可以長期使用。貯藏穩(wěn)定性：大多數(shù)酶經(jīng)固定化后提高了貯藏的穩(wěn)定性。6、基因工程的主要內容包含哪些內容？（1）從生物有機體基因組中，分離出帶有目的基因的DNA片段。（2）將帶有目的基因的外源DNA片段連接到能夠自我復制的并具有選擇記號的載體分子上，形成重組DNA分子。（3）將重組DNA分子轉移到適當

7、的受體細胞（亦稱寄主細胞）并與之一起增殖。（4）從大量的細胞繁殖群體中，篩選出獲得了重組DNA分子的受體細胞，并篩選出已經(jīng)得到擴增的目的基因。（5）將目的基因克隆到表達載體上，導入寄主細胞，使之在新的遺傳背景下實現(xiàn)功能表達，產(chǎn)生出人類所需要的物質。7、基因工程的載體應具體哪些條件？（1）本身是一個復制子，能自我復制 （2）相對分子質量較小，限制性內切酶切點少，宜于接受目的基因（3）能給宿主細胞（受體）提供可選擇標記，有可供辨認的表形特征，便于篩選（4）只有單一限制性內切酶切點，即經(jīng)某限制性內切酶切割后，即可把質粒DNA閉環(huán)打開接納外源DNA片段，又不會丟失自己的片段。8、制備食品酶制劑時，所用

8、菌種應具備哪些條件？（1）安全可靠，非致病菌；（2）穩(wěn)定性好不易感染噬菌體；（3）酶產(chǎn)量高，有較好的開發(fā)應用價值；（4）容易培養(yǎng)和管理，產(chǎn)酶細胞易生長繁殖；（5）能利用廉價的原料，發(fā)酵周期短。9、試述聚合酶鏈式反應（PCR ）的技術原理和主要過程。（1）原理：PCR技術的實質為體內DNA復制的體外模擬。即使雙鏈DNA熱變性而分開成為單鏈DNA，退火后在低溫下，兩個與模板互補的引物與單鏈DNA配對結合，再在中溫下利用Taq DNA聚合酶的聚合活性和熱穩(wěn)定性進行聚合（延伸）反應。每經(jīng)過一次變性、退火和延伸為一個循環(huán)，所擴增的特定DNA序列數(shù)量按幾何指數(shù)增長。（2）主要過程： 模板DNA的變性：模板

9、DNA加熱至9495一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備； 模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合； 引物的延伸：DNA模板引物結合物在Taq DNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈。重復循環(huán)“變性-退火-延伸”過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需24分鐘， 23小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍

10、。10、以大腸桿菌質粒DNA的提取和重組為例闡述基因工程的基本步驟。答：從細胞中分離出DNA 限制酶截取DNA片斷 分離大腸桿菌中的質粒 DNA重組 用重組質粒轉化大腸桿菌 培養(yǎng)大腸桿菌克隆大量基因11、轉基因食品的危害主要有哪些？（1）直接危害：轉基因寄宿、受體或帶菌微生物感染人類、動物及植物；轉基因生物、組分或代謝物產(chǎn)生毒性或引起過敏反應；因意外釋放轉基因生物而對環(huán)境的影響。（2）間接危害：轉基因生物產(chǎn)生具有傳染性或抗藥性的微生物（新的病原細菌和病毒）；將有害的基因（如致癌物質）傳給人類；有關基因物質轉移到相關生物中，使之抵抗力增加，如抗除草劑轉基因作物釋放大田后，可能會出現(xiàn)抗除草劑特征的

11、“超級雜草”。12、轉基因食品安全性評價的主要內容有哪些方面？如何理解實質性等同原則？（1）主要內容：過敏性 毒性反應 水平基因轉移與生物技術改良的有關食品變化產(chǎn)生的任何非預期影響（2）分析比較基因修飾食品的表型性狀、分子特征、關鍵營養(yǎng)成分及抗營養(yǎng)因子、有毒物質及過敏源等特性，評價它與非轉基因食品的同類食品比較的相對安全性，是否與傳統(tǒng)食品具有“實質性等同”。13、通過對食品生物技術課程的學習，談談你對生物技術食品的理解。第三章1.什么是蛋白質工程、理性分子設計和非理性分子設計？（1）蛋白質工程：是指以蛋白質的結構及其功能關系為基礎，通過基因修飾、蛋白質修飾等分子設計，對現(xiàn)存蛋白質加以改造，從而

12、組建新型蛋白質，或全新設計新的蛋白質的現(xiàn)代生物技術。（2）理性分子設計：在已知蛋白質三維結構與功能的基礎上，對一段最可能影響蛋白質功能與性質的基因序列進行定位突變，有目的地改變蛋白質的某一兩個氨基酸殘基或模塊，從而構建新的蛋白質分子。（3）非理性分子設計：不清楚蛋白質三維結構信息和作用機制的情況下，在實驗室模擬蛋白質自然進化的過程，在一定條件下使基因發(fā)生大量變異，然后通過多輪高通量的篩選方法定向選擇出所需要的特性突變物，在較短時間內完成漫長自然進化過程，得到具有特性預期的新蛋白質的一種技術。2.什么是定位突變，常用的定位突變方法及其原理。（1）定位突變：定位突變是在已知蛋白質結構與功能的基礎上

13、，在已知DNA序列中取代、插入或刪除選定的核苷酸，從而產(chǎn)生具有新性狀的突變蛋白質分子的一種蛋白質工程技術。（2）寡核苷酸引物介導的定位突變：用含有突變堿基的寡核苷酸片段作引物，在聚合酶的作用下啟動DNA分子進行復制。包括： Kunkel突變法 、基于抗生素的“抗性恢復”突變法、 基于去除特定限制酶切點的突變法PCR介導的定位突變法：利用PCR將插入和缺失的突變堿基均設計在引物中，先用兩對引物分別對核酸進行PCR擴增，通過重疊延伸產(chǎn)生帶有部分重疊序列的兩種PCR產(chǎn)物，這些產(chǎn)物經(jīng)過混合、變性、復性和鏈延伸后，再用一對與兩個待接片段外側互補的引物進行第二次擴增，從而產(chǎn)生全長的異源雜合雙鏈DNA。盒式

14、突變：又稱片段取代法，利用目標基因序列中適當限制酶切位點，插入各種合適的突變DNA片段，用以取代目標基因中特定DNA片段。 包括盒式取代誘變和混合寡核苷酸誘變兩種方式。3.蛋白質的定向進化、DNA改組、融合蛋白技術的概念（1）定向進化：蛋白質的體外定向進化又稱為分子進化，就是在實驗室條件下模擬自然進化機制，對編碼蛋白質的基因進行誘變、重組，再通過高通量篩選方法選擇出性能更加優(yōu)良的蛋白質。（2）DNA改組：將一群密切相關的DNA序列，在DNaseI作用下，隨機酶切成許多片段，這些小片段之間有部分重疊堿基序列，可通過自身引導PCR重新組裝成全長基因，從而建立分子多樣性文庫，對突變文庫進行篩選，選擇

15、改良的突變體組成下一輪DNA改組模板，重復多次重排與篩選，直至獲得性狀較為滿意的突變體。（3）融合蛋白質技術：有目的地把兩段或多段編碼功能蛋白的基因編碼區(qū)首尾連接在一起，由同一調控序列控制所構成的基因表達產(chǎn)物，進而表達所需的蛋白。4.蛋白質改性的方法。（1）化學改性：主要是針對蛋白質的一些氨基、羥基、巰基以及羧基進行化學修飾，改變蛋白質的結構、靜電荷、疏水基團，而起到改變基功能性質的目的。（2）酶法水解改性：利用蛋白酶降解食物蛋白，使其溶解性、分散性、乳化性等蛋白性能得到改善。（3）酶法聚合改性：利用轉谷酰胺酶對蛋白進行聚合改性以提高食物蛋白的功能性質。（4）物理改性：利用各種物理場效應改變蛋

16、白質的功能特性。如組織化擠壓改性、高壓靜電改性、高熱高壓改性、超聲改性、高頻電場改性和微波改性等。5.了解蛋白質工程在食品中的應用情況。蛋白質工程在食品工業(yè)內應用主要集中在食品工業(yè)專用酶制劑的改造。蛋白質工程改造酶制劑的方面：（1）提高酶的穩(wěn)定性：有些氨基酸的突變可在蛋白質結構的剛性部分引進新的分子內作用力，降低了酶折疊的熵，從而大大提高酶的熱穩(wěn)定性。（2）提高酶活力：通過一些活性中心附近特定氨基酸殘基的突變，可以大大提高突變體酶的活力。如對大腸桿菌堿性酯酶的活力為點旁邊的D101進行定位誘變，突變體酶的活力增加了15倍。（3）改變酶的選擇性：通過定位突變可以改變“口袋”的電荷分布，親、疏水性

17、及立體結構，從而改變酶對底物的選擇性；通過蛋白質工程改變酶表面電荷狀況來影響酶的表面特性，也可達到改變酶對底物的選擇性。第五章1、什么叫發(fā)酵工程。發(fā)酵工程：利用微生物的生長繁殖和代謝活動，并通過現(xiàn)代化工技術，大量生產(chǎn)有用物質的一種生物技術體系，又稱微生物工程。2、什么是種子擴大培養(yǎng)、其目的是什么。種子擴大培養(yǎng)：將保存在砂土管、冷凍干燥管中處休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后，再經(jīng)過扁瓶或搖瓶及種子罐逐級擴大培養(yǎng),最終獲得一定數(shù)量和質量的純種過程。目的：接種量的需要；菌種的馴化；縮短發(fā)酵時間、保證生產(chǎn)水平3、描述培養(yǎng)基設計和優(yōu)化的一般步驟。 根據(jù)前人的經(jīng)驗和培養(yǎng)基成分確定時一些必須考慮的問題，

18、初步確定可能的培養(yǎng)基成分； 通過單因子實驗最終確定出最為適宜的培養(yǎng)基成分； 當培養(yǎng)基成分確定后，剩下的問題就是各成分最適的濃度，由于培養(yǎng)基成分很多，為減少實驗次數(shù)常采用一些合理的實驗設計方法。4、解釋對數(shù)殘存定律。 微生物的熱死滅動力學對數(shù)殘留定律：對培養(yǎng)基進行濕熱滅菌時，培養(yǎng)基中的微生物受熱死亡（微生物體內蛋白質變性）的速率與殘存的微生物數(shù)量成正比。N：培養(yǎng)基中任一時刻的活微生物濃度（個/L）t：滅菌時間minK：比熱死亡速率常數(shù)min-15、培養(yǎng)基為什么采用高溫短時滅菌方式。（1）活化能大的反應中，反應速度隨溫度變化也大，活化能小的反應速度隨溫度變化小。細菌孢子熱死滅反應的E很高，而大部分

19、營養(yǎng)物質熱破壞反應的E很低，因而提高滅菌溫度會加速細菌孢子的死滅速率，從而縮短滅菌時間；（2）由于營養(yǎng)成分熱破壞的E很低，溫度提高只能稍微增大其熱破壞反應速率，但由于滅菌時間的顯著縮短，結果是營養(yǎng)成分被破壞量大大減少；（3）高溫短時滅菌方法是滅菌動力學得出的重要結論，它既能快速滅菌，又能有效地保存培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分。6、比較培養(yǎng)基滅菌的二種操作方式的優(yōu)缺點。（1）培養(yǎng)菌的分批滅菌：升溫、保溫和降溫三個過程都是在發(fā)酵罐中進行，滅菌主要是在保溫過程中實現(xiàn)的。優(yōu)點：A設備要求低，不需另外設置加熱、冷卻裝置；B操作要求低，適于手動操作；C適合于小批量生產(chǎn)規(guī)模；D適合于含有大量固體物質的培養(yǎng)基的滅菌缺點

20、：A培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質損失較多，培養(yǎng)基的質量下降；B能耗較高；C不適合于大規(guī)模生產(chǎn)過程的滅菌；D發(fā)酵罐的利用率較低（2）培養(yǎng)基的連續(xù)滅菌：將配制好的培養(yǎng)基在向發(fā)酵罐等培養(yǎng)裝置輸送的同時進行滅菌。分加熱、保溫和冷卻三個步聚。優(yōu)點：A滅菌溫度高，可減少培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質的損失；B操作條件恒定，滅菌質量穩(wěn)定；C易于實現(xiàn)管道化和自控操作；D避免了反復的加熱和冷卻，提高了熱的利用率；E發(fā)酵設備利用率高缺點：A對設備的要求高，需另外設置加熱、冷卻裝置；B操作較麻煩；C染菌的機會較多；D不適合于含大量固體物料的滅菌；E對蒸汽的要求高7、機械攪拌發(fā)酵罐的結構、主要部件的名稱和作用。發(fā)酵罐主要包括罐體、軸和葉輪、擋

21、板、夾套或蛇形管、空氣分布裝置、軸封和傳動裝置等，并在罐體上設有傳感器、通風和蒸汽、排氣、取樣、接種、消泡劑或材料管道接口等，以及人孔或手孔、視鏡和燈孔等。（1）罐體：由圓柱體及橢圓形或碟形封頭焊接而成，材料為碳鋼或不銹鋼。為了滿足工業(yè)要求，罐體須耐受一 定的溫度130和壓力0.25MP（2）攪拌器：作用是打碎氣泡，加速和提高溶氧；加速養(yǎng)分和熱量傳遞。（3）擋板：防止液面中央形成旋渦，增強其湍流和溶氧傳質。（4）消泡裝置: 發(fā)酵液中因含蛋白質等發(fā)泡物質，發(fā)酵過程中易產(chǎn)生泡沫，發(fā)泡嚴重時會使發(fā)酵液隨排氣而外溢，且增加染菌機會。采用消泡裝置消泡（5）軸封：使罐頂或罐底與軸之間的縫隙加以密封，防止泄

22、露和污染雜菌（6）聯(lián)軸器：用聯(lián)軸器使上下攪拌軸成牢固的剛性聯(lián)接（7）空氣分布裝置：作用是吹入無菌空氣，并使空氣均勻分布。（8）換熱裝置：冷卻蒸汽滅菌后的培養(yǎng)基和發(fā)酵過程中所產(chǎn)熱量8、酒精罐和啤酒罐冷卻裝置區(qū)別。酒精罐：對中小型酒精罐，采用罐頂噴淋于罐外壁進行膜狀冷卻；而對于大型酒精發(fā)酵罐，則采用罐頂噴淋與罐內冷卻蛇管相結合。為避免發(fā)酵車間的潮濕和積水，要求在罐體底部沿罐體四周裝有集水槽。采用管外列管式噴淋冷卻的方法，具有冷卻發(fā)酵液均勻，冷卻效率高等優(yōu)點。啤酒罐：外面設有冷卻管，冷媒可以是乙二醇、酒精、冰與鹽水的混合物第六章（一）名詞解釋1、細胞融合：是指在外力的作用下，兩個以上的異源（種、屬）

23、細胞或原生質體互相接觸，不經(jīng)過有性過程而發(fā)生膜融合、胞質融合和核融合并形成一個雜合細胞的現(xiàn)象。2、細胞重組：將細胞核質分離技術與細胞融合技術結合，在融合介質作用下，使胞質體與完整細胞合并，使胞質體與完整細胞，或胞質體與核質體，或微細胞與完整細胞重新組成細胞的過程。3、核移植：就是利用顯微操作技術將一個細胞的細胞核移植到另一個細胞中，或者將兩個細胞的細胞核（或細胞質）進行交換，從而可能創(chuàng)造無性雜交生物新品種的一項技術。4、微細胞：核內染色體不完整的細胞5、原代培養(yǎng)：將動物組織消化后的初次培養(yǎng)6、傳代培養(yǎng)：用胰蛋白酶將出現(xiàn)接觸抑制的貼壁細胞從培養(yǎng)瓶壁上脫離下來，制成細胞懸液，分裝到多個培養(yǎng)瓶中繼續(xù)

24、培養(yǎng)，這個過程叫傳代培養(yǎng)。7、細胞系：初次培養(yǎng)的細胞經(jīng)第一次傳代成功后，即稱之為細胞系。8、細胞株：從一個經(jīng)過生物學鑒定的細胞系用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選方法，由單細胞增殖形成的細胞群，稱細胞株9、粘附型細胞：附著在某一固相支持物表面才能生長的細胞。10、接觸抑制：細胞在貼壁生長過程中，細胞間相互接觸，細胞分裂和生長停止的現(xiàn)象。11、有限細胞系：在體外的生存期有限即不能長期傳代的細胞系。12、無限細胞系：大多數(shù)細胞系在有限的代數(shù)內增殖，當超過有限世代后，細胞獲持久性增殖能力，發(fā)育成無限細胞系或稱連續(xù)細胞系。13、愈傷組織：是指外植體組織增生的細胞產(chǎn)生的一團不定型的疏散的排列的薄壁細胞，是分化的

25、，而且還未形成組織的結構。14、外植體：是指植物組織培養(yǎng)中用來進行離體培養(yǎng)的植物材料。15、懸浮培養(yǎng)：是指細胞在反應器中自由懸浮生長。16、植板率：是在平板上形成細胞團的百分率，即每100個鋪在平板上的細胞有幾個能長出細胞團。17、細胞工程：利用細胞生物學和分子生物學技術，應用工程學的方法，在細胞水平上研究改造生物遺傳特性和生物學特性，從而獲得特定的細胞、細胞產(chǎn)品或新生物品種的一門綜合性科學技術。（二）問答題1、動物細胞培養(yǎng)形態(tài)類型和生長特點。上皮細胞型：類似體內的上皮細胞，扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核。彼此緊密相連成鋪石狀薄層；生長時呈膜狀移動；很少脫離細胞群而單個活動成纖維細胞型：胞體梭

26、形或不規(guī)則三角形；胞質向外伸出23個長短不等的細胞突起；中有卵圓形核。排列成放射狀，漩渦狀，不連成片。游走細胞型：外形不規(guī)則且不斷變化，細胞內容易出現(xiàn)暗的吞噬性顆粒。生長位置不固定，分散，呈活躍的的游走和變形運動。多形性細胞型：外形不規(guī)則，細胞由略呈多角形的胞體和細長的、類似偽足的胞突兩部分組成，胞內容易出現(xiàn)暗的吞噬性顆粒2、動物細胞固定化培養(yǎng)方式有哪些。 微載體培養(yǎng)技術大載體培養(yǎng)技術多孔載體培養(yǎng)微囊化培養(yǎng)技術中空纖維細胞培養(yǎng)技術3、植物細胞和動物細胞培養(yǎng)需哪些特殊的成分。（1）植物細胞培養(yǎng)：通常包括無機鹽、碳源、維生素、生長調節(jié)素、有機添加劑等。碳源和能源：培養(yǎng)中的細胞對蔗糖和葡萄糖都能利用

27、，果糖的利用效果較差。維生素：培養(yǎng)中的植物細胞都需要硫胺素，加入煙酸、泛酸、生物素和葉酸，效果更好。氨基酸：雖然植物細胞在培養(yǎng)過程中一般都能合成所需的氨基酸，但加入L-谷氨酰胺或其他氨基酸混合物是很有好處的。此外，還使用蛋白酶解產(chǎn)物，如酪蛋白或酪蛋白水解氨基酸。其它有機添加劑還有如乳蛋白水解物，酵母提取物等植物生長激素：激素分為兩類，生長素和分裂素。生長素促進細胞生長，最有效和最常用的是吲哚乙酸和萘乙酸；分裂素促進細胞分裂，常用的是腺嘌呤衍生物。使用最多的是6-芐氨基嘌呤和玉米素，對芽的誘導具有重要作用。（2）動物細胞培養(yǎng)：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、激素以及動物或人血清等。4、

28、單細胞分離方法和培養(yǎng)方法分別有哪些（1）單細胞分離方法：機械法：將葉肉組織研碎，經(jīng)過濾和離心，收集和凈化細胞。酶法：利用果膠酶、纖維素酶處理植物葉片或其他外植物體，使細胞分離?；瘜W法：利用利用化學藥劑使細胞分離的方法。（2）單細胞培養(yǎng)方法：看護培養(yǎng)：用一塊活躍生長的愈傷組織來促進培養(yǎng)細胞持續(xù)分裂和增殖的方法。平板培養(yǎng)：將懸浮單細胞與融化的瓊脂培養(yǎng)基均勻混合后平鋪一薄層在培養(yǎng)皿底上的培養(yǎng)法。微室培養(yǎng)：在人工制造的無菌小室中，將一滴懸浮細胞液培養(yǎng)在少量培養(yǎng)基上，使其分裂增殖成細胞團的方法5、大規(guī)模培養(yǎng)植物細胞的特點和主要的生物反應器類型。特點：植物細胞對剪切力敏感。 植物細胞培養(yǎng)通常形成細胞團。

29、植物細胞生長速度慢，操作周期長 多泡沫。 植物細胞在高濃度培養(yǎng)時為假塑性流體。 植物細胞的需氧量要比微生物要低的多。大多數(shù)植物細胞培養(yǎng)需要光照。生物反應器類型：（1）懸浮培養(yǎng)生物反應器：機械攪拌反應器非機械攪拌反應器：通常為氣體攪拌反應器，是一種利用通入的空氣作通氣和攪拌的生物反應器。A鼓泡式反應器B氣升式反應器（a外循環(huán)式b內循環(huán)式）C轉鼓式生物反應器光照攪拌式光生物反應器（2）固定化細胞生物反應器：填充床反應器 流化床反應器 膜反應器6、細胞融合和細胞拆合的方法有哪些細胞融合：病毒誘導細胞融合：常用于誘導動物細胞融合的病毒有仙臺病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等，其中仙臺病毒最常用。兩個原生質

30、體或細胞在病毒黏結作用下彼此靠近，使兩個細胞膜、胞質間互相滲透 、細胞核互相融合，進入正常的細胞分裂途徑，形成雜種細胞?；瘜W融合劑法：利用化學融合劑，促使原生質體相互靠近、粘連融合的方法。A、聚乙二醇（PEG）誘導融合：PEG是乙二醇的多聚物, 存在不同分子量的多聚體,它可改變各類細胞的膜結構, 使兩細胞相互接觸部位的膜脂雙層中脂類分子發(fā)生疏散和重組,此時相互接觸的兩細胞的胞質溝通成為可能,從而造成細胞之間發(fā)生融合.。B、NaNO3處理誘發(fā)融合：一般認為是Na+造成了膜電位的改變。C、高pH高濃度鈣離子處理：物理誘導細胞融合：A電誘導細胞融合法： B 激光誘導細胞融合 C離子束誘導細胞融合細胞拆合：物理拆合法：是用機械的方法或短波光將細胞核去掉化學拆合法：使用細胞松弛素7、簡述原生質體制備的步聚取材與消毒        肥皂水70%酒精3%次氯酸鈉無菌水  原生質體的分離      機械分離；酶解  原生質體的純化     可采用不連續(xù)梯度法、沉降法和漂浮法&#