膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)ppt課件

1、斜面培育物斜面培育物4 4支，營(yíng)養(yǎng)肉湯培育物菌液支，營(yíng)養(yǎng)肉湯培育物菌液4 4支，半固體瓊脂支，半固體瓊脂4 4支，支，營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板4 4個(gè)，糖發(fā)酵管個(gè)，糖發(fā)酵管1 1套，抗菌素紙片套，抗菌素紙片1 1套，眼科鑷子套，眼科鑷子2 2把。把。器材預(yù)備器材預(yù)備膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)流程實(shí)驗(yàn)流程(6次課次課12學(xué)時(shí)學(xué)時(shí)培育基的制備細(xì)菌的分別培育細(xì)菌的純培育細(xì)菌的形狀學(xué)檢查細(xì)菌的生化實(shí)驗(yàn)等細(xì)菌的血清學(xué)實(shí)驗(yàn)、結(jié)果分析實(shí)驗(yàn)論文撰寫(xiě)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)一v膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)五v細(xì)菌的糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)v抗菌素敏感性實(shí)驗(yàn)v血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)v半固體接種法糖發(fā)

2、酵實(shí)驗(yàn)糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)Sugar Fermentation TestSugar Fermentation Testv不同細(xì)菌具有不同的糖分解酶，分解各種糖的代謝產(chǎn)物也各不一樣，有的產(chǎn)酸，有的產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，據(jù)此，可以鑒別各種細(xì)菌。v糖發(fā)酵管:葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇和蔗糖等。v指示劑：溴甲酚紫，PH6.8為紫色，5.2為黃色。v原理：多糖單糖酸性產(chǎn)物 pH指示劑呈酸性變色。v 假設(shè)有氣體氣泡。v結(jié)果:培育基變黃色無(wú)氣泡“+ ，培育基變黃色有氣泡“，培育基不變色“-。v運(yùn)用:察看細(xì)菌對(duì)糖的分解情況,常用于腸道桿菌鑒定。甲紫黑葡萄糖乙紫黑乳糖丙粉紅葡萄糖丁粉紅乳糖3724小時(shí)細(xì)菌的糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的糖發(fā)酵

3、實(shí)驗(yàn)用砂輪在糖發(fā)酵管液面上方23cm處，切割一道切痕。兩手握住發(fā)酵管切痕的兩端，切痕線向外，兩個(gè)大拇指抵住切痕的反面，用力將管子向里一扳，利用彎和拉的合力，將管子折斷。管口燒灼滅菌。 接種針針尖斜面取菌，伸入培育基內(nèi)，在管壁上，上下研磨接種。退出接種針，燒灼滅菌。管口朝向一樣，放置在平皿內(nèi)。小組分工小組分工v甲紫黑菌苔Atropurpureus 葡萄糖Glucosev乙紫黑菌苔Atropurpureus 乳糖Lactosev丙粉紅菌苔Pink 葡萄糖Glucosev丁、戊粉紅菌苔Pink 乳糖Lactose甲 乙 4丙 丁甲 乙 3丙 丁甲 乙 2丙 丁甲 乙 1丙 丁甲 乙 5丙 丁甲 乙

4、8丙 丁甲 乙 7丙 丁甲 乙 6丙 丁甲 乙 10丙 丁甲 乙 9丙 丁 講 臺(tái)左右抗菌素敏感性實(shí)驗(yàn)抗菌素敏感性實(shí)驗(yàn)Antibiotic Susceptibility TestAntibiotic Susceptibility TestFleming and Penicillinv磺胺1907年發(fā)現(xiàn)，1935年臨床運(yùn)用。青霉素1928年發(fā)現(xiàn)，1941年臨床運(yùn)用。v我國(guó)住院病人抗菌素運(yùn)用率達(dá)70%，新生兒病房抗菌素運(yùn)用率達(dá)100%。v為了防止抗菌藥物運(yùn)用的盲目性，防止因不合理用藥，導(dǎo)致耐藥性細(xì)菌的增多、菌群失調(diào)等問(wèn)題的發(fā)生，用藥前時(shí)，做藥物敏感性實(shí)驗(yàn)。v衛(wèi)生部發(fā)布，2021年8月1日起實(shí)施的，

5、規(guī)定特殊運(yùn)用級(jí)抗菌藥物不得在門(mén)診運(yùn)用。半年之后，醫(yī)院抗菌素運(yùn)用率普降一半。 紙片分散法紙片分散法 Disc Agar Diffusion Method Disc Agar Diffusion Method將含有定量抗菌素的紙片，平貼在曾經(jīng)接種了實(shí)將含有定量抗菌素的紙片，平貼在曾經(jīng)接種了實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的平板上。紙片中的抗菌素吸收培育基的驗(yàn)細(xì)菌的平板上。紙片中的抗菌素吸收培育基的水分，溶解后不斷向周圍分散，構(gòu)成遞減的梯度水分，溶解后不斷向周圍分散，構(gòu)成遞減的梯度濃度。敏感細(xì)菌在紙片周圍的生長(zhǎng)遭到抑制，而濃度。敏感細(xì)菌在紙片周圍的生長(zhǎng)遭到抑制，而構(gòu)成沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)的抑菌圈。構(gòu)成沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)的抑菌圈。v依抑菌

6、圈的大小、有無(wú)判別敏感性。v敏感Sensitive ：實(shí)驗(yàn)細(xì)菌所引起的感染，可以用常用劑量的某種抗菌藥物治愈。v耐藥Resistant ：實(shí)驗(yàn)細(xì)菌引起的感染，不能用該種抗菌藥物治愈。v實(shí)驗(yàn)菌用量以對(duì)照瓊脂平板外表生長(zhǎng)的菌落呈密集或半密集為宜。方法步驟方法步驟甲金黃菌液乙白色菌液丙紫黑菌液丁粉紅菌液實(shí)驗(yàn)分工實(shí)驗(yàn)分工平安警告：步驟的操作必需逐個(gè)完成，手上不得同時(shí)握持菌液管和平板，以免菌液倒出來(lái)，呵斥污染。先取菌液36ul沿平板直徑拉一條細(xì)菌接種線。再取菌液1次旋轉(zhuǎn)平板90度角，拉另一條接種線，使兩條細(xì)菌接種線呈“十字形。然后在平板上半部，作延續(xù)來(lái)回密集劃線，每次劃二分之一平板。 旋轉(zhuǎn)平板90度角，

7、二次密集劃線。旋轉(zhuǎn)平板90度角，三次密集劃線。旋轉(zhuǎn)平板90度角，四次密集劃線。v設(shè)計(jì)三點(diǎn)，呈等邊三角間隔，點(diǎn)間隔平板邊緣約15mm。v作標(biāo)志：青霉素、先鋒霉素、慶大霉素。v鑷子火焰消毒，夾取相應(yīng)的藥物紙片，平貼在已設(shè)定的位置上，按壓，鑷子火焰消毒。v371824小時(shí)培育，察看結(jié)果。慶慶15mm青青先先設(shè)三點(diǎn),呈等邊三角間隔。點(diǎn)間隔平板邊緣約15mm。作標(biāo)志：青、先、慶鑷子尖嘴朝下，夾取相應(yīng)藥物紙片的邊緣，平貼在已設(shè)定的位置上，悄然按壓紙片。凝固酶實(shí)驗(yàn)?zāi)堂笇?shí)驗(yàn) Coagulase Test Coagulase Testv致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，可使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄岳w維蛋白

8、,附著于菌體外表,構(gòu)成凝塊。v取二滴兔血漿(rabbit plasma)置于干凈的玻片上。v分別用接種環(huán)取白色和金黃色菌苔(約23個(gè)菌落的菌量)與血漿研磨混合成直徑810mm的一層薄菌膜 ，立刻察看結(jié)果。v菌液出現(xiàn)明顯凝塊者為陽(yáng)性，否那么為陰性。v白色菌苔容易涂抹均勻，金黃色菌苔凝固涂抹不開(kāi)。v來(lái)回側(cè)傾載玻片，讓菌液流動(dòng)起來(lái)，結(jié)果更明顯。研磨成直徑810mm的一層薄菌膜。半固體穿刺接種法半固體穿刺接種法 Stab Semisolid MethodStab Semisolid Methodv具有鞭毛可以真正運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌，在半固體培基中,能沖破低濃度瓊脂的阻力，自接種部位向周圍挪動(dòng)分散生長(zhǎng)，使培育基

9、呈根須狀或云霧狀混濁形狀。v無(wú)鞭毛不能運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌，只能沿著穿刺線生長(zhǎng)繁衍，穿刺線邊緣明晰，周圍培育基清澈透明。電鏡半固體371837182424小時(shí)小時(shí)接種針斜面取菌，從半固體中心,垂直刺入，到達(dá)培育基底部5分之4處，再循原來(lái)的道路,退出接種針。半固體穿刺接種法：半固體穿刺接種法：甲甲紫黑紫黑, , 乙乙紫黑；紫黑； 丙丙粉紅粉紅, , 丁丁粉紅。粉紅。標(biāo)志標(biāo)志: :組號(hào)組號(hào), ,顏色。顏色。管口、接種針經(jīng)火焰燒灼滅菌。 生物平安警告v本次實(shí)驗(yàn)糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、藥敏實(shí)驗(yàn)、血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)和半固體接種操作，能夠產(chǎn)生幾百個(gè)微生物氣溶膠顆粒。v氣溶膠粒徑100um沉降很快,50um在0.4s內(nèi)分散開(kāi),5um

10、經(jīng)過(guò)呼吸道直接到達(dá)肺泡。vPike博士對(duì)實(shí)驗(yàn)室感染統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明緣由的感染高達(dá)82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中分散引起的。v實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)坐著，在火焰周圍1020厘米內(nèi)操作，堅(jiān)持安靜、有序，盡量少說(shuō)話、少走動(dòng)，以免感染病原菌。v細(xì)菌的糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)P16v 甲紫黑葡萄糖 乙 紫黑乳糖v 丙粉紅葡萄糖 丁 粉紅乳糖v細(xì)菌的藥敏實(shí)驗(yàn)P20v 甲金黃菌液平板 + 青、鏈、慶紙片v 乙白色菌液平板 + 青、鏈、慶紙片v 丙紫黑菌液平板 + 青、鏈、慶紙片 v 丁粉紅菌液平板 + 青、鏈、慶紙片 v血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)P17v 兔血漿15ul+金黃色,白色v半固體接種法P11v 甲紫黑， 乙紫黑， 丙粉紅， 丁粉

11、紅。思索題v細(xì)菌生化反響在感染性疾病診斷中有何重要意義? v為什么要在發(fā)酵管液面上方大約23cm處切割？v培育時(shí)，微量糖發(fā)酵管管口不能朝上，為什么？v抗菌素敏感性實(shí)驗(yàn)有何實(shí)踐意義?v血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)察看終了，應(yīng)將載玻片立刻放入消毒缸內(nèi)，為什么?v半固體穿刺接種時(shí)，為什么要強(qiáng)調(diào)“原路前往?v為保證明驗(yàn)結(jié)果的可靠性，他以為上述實(shí)驗(yàn)應(yīng)還設(shè)立哪些對(duì)照? 糖發(fā)酵管管底一側(cè)略微墊高！糖發(fā)酵管管底一側(cè)略微墊高！微量發(fā)酵管管口朝下，微量發(fā)酵管管口朝下，3737培育培育18182424小時(shí)。小時(shí)。試管用毛刷，試管用毛刷，上下、旋轉(zhuǎn)刷洗上下、旋轉(zhuǎn)刷洗內(nèi)壁和管底。內(nèi)壁和管底。字跡用濕紗布，字跡用濕紗布，粘去污粉擦拭。粘去污粉擦拭。管口朝向一樣，管口朝向一樣，流水沖洗流水沖洗1010次。次。洗干凈的試管，洗干凈的試管，倒扣在筐內(nèi)，晾干。倒扣在筐內(nèi)，晾干。平皿用紗布，旋轉(zhuǎn)擦平皿用紗布，旋轉(zhuǎn)擦拭內(nèi)外側(cè)，字跡用紗拭內(nèi)外側(cè)，字跡用紗布粘去污粉擦拭。布粘去污粉擦拭。流水沖洗流水沖洗1010次。逐個(gè)次。逐個(gè)倒扣在筐內(nèi)，晾干。倒扣在筐內(nèi)，晾干。常用器材擺放順序：電源插