富硒綠茶對(duì)高鹽飲食誘導(dǎo)下大鼠高血壓的預(yù)防作用探究

1、    富硒綠茶對(duì)高鹽飲食誘導(dǎo)下大鼠高血壓的預(yù)防作用探究    湯小娟徐夢(mèng)杰朱禹誠(chéng)王元鳳摘  要： 研究了不同濃度的富硒綠茶對(duì)高鹽飲食誘導(dǎo)下8周齡wistar大鼠高血壓的預(yù)防作用.結(jié)果表明：飲用茶水提物8周后，低、高劑量組分別降低大鼠收縮壓1.20 kpa和2.80 kpa;茶水提物降低了血清中-羥基丁酸脫氫酶和乳酸脫氫酶的含量，蘇木精-伊紅（he）染色切片觀察心臟、腎臟組織形態(tài)，顯示低、高劑量組均可以改善大鼠心肌細(xì)胞肥大、組織紊亂，及腎小管結(jié)構(gòu)損傷等問(wèn)題，且高劑量組效果更加顯著.可以進(jìn)一步開(kāi)發(fā)富硒綠茶相應(yīng)的功能性食品來(lái)發(fā)揮其保健效果.關(guān)鍵詞：

2、 富硒綠茶; 高鹽飲食; 高血壓預(yù)防中圖分類(lèi)號(hào)： q 599    文獻(xiàn)標(biāo)志碼： a    文章編號(hào)： 1000-5137（2021）02-0154-08effect of selenium enriched green tea on hypertension induced by high salt diet of ratstang xiaojuan， xu mengjie， zhu yucheng， wang yuanfeng*（college of life sciences， shanghai normal universit

3、y， shanghai 200234， china）abstract： to study the effect of different concentrations of selenium enriched green tea on hypertension induced by high salt diet in 8-week-old wistar rats.the results showed that：after drinking tea water extract for 8 weeks，the systolic blood pressure on rats was decrease

4、d by 1.20 kpa and 2.80 kpa at low and high doses，respectively.the contents of -hydroxybutyrate dehydrogenase and lactate dehydrogenase in serum were decreased by tea extract.the histological morphological characteristics of heart and kidney were observed by hematoxylin eosin （he） staining.the result

5、s showed that the low-dose and high-dose groups could improve myocardial hypertrophy，tissue disorder and renal tubular structure damage，and the effect of high-dose group was more significant.conclusion：se enriched green tea can effectively alleviate the increase of blood pressure and improve the tis

6、sue structure damage of heart and kidney in rats fed with high salt diet.we can further to develop the corresponding functional food to play its health effect.key words： selenium enriched green tea; high-salt diet; hypertension prevention心血管病是指包括冠心病、腦血管疾病、外周動(dòng)脈疾病、先天性心臟病等在內(nèi)的一組心臟和血管疾病.近年來(lái)，心血管病已超過(guò)癌癥，成為導(dǎo)

7、致死亡的主要病因1.高血壓是與心血管病關(guān)聯(lián)性最高的風(fēng)險(xiǎn)因素，據(jù)估計(jì)：在首次心臟病發(fā)作的人群中，患有高血壓的占69%，在慢性心力衰竭的人群中占75%.臨床資料顯示：0.66 kpa降壓可使卒中和缺血性心臟病的風(fēng)險(xiǎn)分別降低34%和21%2.茶在我國(guó)種植并飲用的歷史已有近千年，被認(rèn)為對(duì)人體健康有多種益處.越來(lái)越多的研究表明，茶對(duì)各種動(dòng)物模型的血壓都有有益的影響，比如研究發(fā)現(xiàn)：茶多酚、黃酮、兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯均可以有效降低大鼠血壓，其機(jī)制包括放松平滑肌、增強(qiáng)內(nèi)皮一氧化氮合酶活性、減少血管炎癥反應(yīng)等3-4.本研究選用富硒綠茶水提物，進(jìn)行了體外抗氧化活性及降壓活性測(cè)定，同時(shí)選用wistar大

8、鼠，在高鹽飲食環(huán)境下進(jìn)行不同濃度茶水提物干預(yù)，來(lái)研究其對(duì)大鼠高血壓的緩解作用.1  材料與方法1.1 材料與試劑材料：恩施天然富硒綠茶（購(gòu)自湖北恩施硒印象有限公司）;wistar大鼠（雄性8周，spf級(jí)，購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司）.試劑：濃鹽酸、濃硫酸、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、福林酚試劑、碳酸鈉、碳酸氫鈉、堿式乙酸鉛、茚三酮、考馬斯亮藍(lán)、硼酸等試劑均為分析純，購(gòu)自上海國(guó)藥集團(tuán);甲醇、乙腈為色譜級(jí).1.2 主要儀器設(shè)備高效液相色譜儀（日本島津公司），dk-s24水浴鍋（上海島韓實(shí)業(yè)），xd-5205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器），atn-300全自動(dòng)凱氏定氮儀（日本hitac

9、hi公司），labconco冷凍干燥機(jī)（賽默飛世爾科技有限公司），pf6原子熒光分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）.1.3 實(shí)驗(yàn)方法1.3.1 富硒綠茶水提物制備茶葉粉碎，超純水和茶粉以110和19的質(zhì)量比各提取1次，每次提取2 h，后用500目（篩孔直徑：25 m）尼龍布過(guò)濾，離心取上清液，濃縮、凍干，得到富硒綠茶水提物.1.3.2 水提物成分測(cè)定茶多糖采用苯酚-硫酸法測(cè)定，茶多酚采用gb/t 83132018“茶：茶多酚測(cè)定”測(cè)定，黃酮采用sn/t 45922016測(cè)定，總氮使用gb 5009.52016“凱士定氮法”測(cè)定，水分使用水分測(cè)定儀測(cè)定，茶氨酸采用gb/t 8314201

10、3測(cè)定，硒含量采用gb/t 217292008測(cè)定，兒茶素等采用高效液相色譜法測(cè)定.1.3.3 水提物dpph（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼）自由基清除率測(cè)定參考yang等5提出的方法測(cè)定富硒綠茶水提物樣品的dpph自由基清除率.1.3.4 水提物體外降壓測(cè)定參考駱琳等6提出的“96孔板法用于高通量血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑體外檢測(cè)方法”，進(jìn)行水提物體外降壓測(cè)定.1.3.5 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)共選取28只wistar大鼠，實(shí)驗(yàn)前大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，后將大鼠隨機(jī)分為4組，每組7只.其中，空白組飼喂普通飼料+蒸餾水;模型組喂8%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）高鹽輻照滅菌飼料+蒸餾水;低劑量組喂8%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）高鹽輻照滅菌飼

11、料+富硒綠茶水提物（100 mg?kg-1·d-1）;高劑量組喂8%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）高鹽輻照滅菌飼料+富硒綠茶水提物（1 000 mg?kg-1·d-1）.期間，每2周測(cè)量大鼠的體重和血壓.血壓采用無(wú)創(chuàng)尾動(dòng)脈壓法測(cè)量，將大鼠放置在隔籠中，35 ，30 min，待其穩(wěn)定后，將脈搏及壓力傳感器放置于大鼠尾部，加壓，脈搏消失后出現(xiàn)的第1條脈搏對(duì)應(yīng)的血壓值為收縮壓，記錄血壓大于等于1.33 kpa的數(shù)值，連續(xù)3次讀數(shù)，取其平均值.飼喂8周后，用戊巴比妥鈉麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血并進(jìn)行相應(yīng)酶活的測(cè)定，將心臟和腎臟的一部分立即浸入4%（體積分?jǐn)?shù)）多聚甲醛中進(jìn)行蘇木精-伊紅（he）染色組織切片

12、病理學(xué)分析.1.3.6 數(shù)據(jù)分析采用spss 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，p<0.05代表存在顯著性差異.2  結(jié)果與討論2.1 水提物基本成分分析很多研究結(jié)果表明：茶葉中茶多酚、茶多糖、黃酮、茶氨酸、總氮、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯等均具有良好的降血壓作用7-10.也有文獻(xiàn)報(bào)道：體外補(bǔ)充微量元素，如鈣、鎂等可以有效緩解高血壓11-12.有鑒于此，本研究測(cè)定了富硒綠茶水提物中相關(guān)成分的含量.由表13可知：綠茶中茶多酚、茶多糖、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯等含量較高，鉀、鈣、鎂、銅離子含量較高.2.2 水提物dpph自由基清除率結(jié)果分析不同濃度富硒綠茶的dpph自由基清除率如圖1所示

13、.dpph自由基的清除率隨著天然富硒綠茶質(zhì)量濃度的增高而增高，呈現(xiàn)出濃度依賴(lài)性關(guān)系.相同質(zhì)量濃度對(duì)比下，天然富硒茶的自由基清除率均低于抗壞血酸.但當(dāng)質(zhì)量濃度為1 mg?ml-1時(shí)，富硒綠茶的清除率可達(dá)到90%以上，綠茶中茶多酚、兒茶素含量較高，茶多酚的優(yōu)良抗氧化作用也已經(jīng)被許多研究報(bào)道13，因此，高質(zhì)量濃度下茶多酚、兒茶素可能在綠茶的抗氧化作用上發(fā)揮了重要的作用.2.3 水提物體外降壓結(jié)果分析血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ace）是腎素血管緊張素系統(tǒng)中一種重要的酶，可以將血管緊張素i水解為血管緊張素ii，進(jìn)一步導(dǎo)致血管收縮、血壓升高.不同質(zhì)量濃度富硒綠茶對(duì)ace的抑制效果如圖2所示.其ace抑制率隨著富硒

14、綠茶質(zhì)量濃度的增加而增加，當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到1 000 g?ml-1時(shí)，其清除率達(dá)到了84%，根據(jù)對(duì)應(yīng)數(shù)值，由擬合曲線(xiàn)可得富硒綠茶水提物ace ic50時(shí)的質(zhì)量濃度為254.83 g?ml-1.已有文獻(xiàn)報(bào)道14：茶葉的ace抑制活性得益于茶多酚和表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯.因此，高質(zhì)量濃度下茶多酚、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯可能在綠茶的ace抑制活性上發(fā)揮了重要的作用.2.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析2.4.1 不同質(zhì)量濃度富硒綠茶對(duì)大鼠體重及血壓的影響如圖3所示：經(jīng)過(guò)不同質(zhì)量濃度的茶水提物8周飼喂后，空白組與模型組大鼠體重呈現(xiàn)一定的差異;模型組大鼠血壓顯著降低，推測(cè)是高鹽飲食導(dǎo)致大鼠代謝加快，從而降低體重;

15、而富硒綠茶低劑量組和高劑量組大鼠體重?zé)o顯著性差異.由圖4可知：不同組之間的血壓變化均有顯著性差異，且空白組和模型組差異非常顯著;模型組大鼠平均收縮壓為21.19 kpa，相較于模型組，富硒綠茶低劑量組平均收縮壓降低了1.20 kpa，而高劑量組降低了2.80 kpa.該結(jié)果表明：長(zhǎng)期飲用恩施天然富硒綠茶可以有效緩解高鹽飲食環(huán)境下大鼠血壓的升高，且富硒綠茶劑量越高，緩解效果越明顯.szuli?ska等15也報(bào)道了類(lèi)似的結(jié)果，他們發(fā)現(xiàn)綠茶的降壓效果與其全方位的性質(zhì)有關(guān)，綠茶提取物可以通過(guò)影響血管收縮物質(zhì)（包括血管緊張素ii、前列腺素、內(nèi)皮素-1）以及血管舒張物質(zhì)（如前列環(huán)素）的產(chǎn)生來(lái)調(diào)節(jié)血管穩(wěn)態(tài).

16、此外，大量研究表明：茶葉中的兒茶素能通過(guò)激活內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮來(lái)調(diào)節(jié)血管張力，通過(guò)干擾血管細(xì)胞生長(zhǎng)因子和預(yù)防血管炎癥來(lái)抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖，從而起到血管舒張作用，降低血壓16-18.（不同字母表示：兩組之間具有顯著性差異，p<0.05，下同）2.4.2 不同質(zhì)量濃度富硒綠茶對(duì)大鼠血清的影響-羥基丁酸脫氫酶（hbdh）是心肌酶譜中的一種酶，其含量越高，心肌受損傷程度越高.如圖5所示，模型組的-羥基丁酸脫氫酶與空白組、高劑量組相比有顯著性差異，可以得出，高劑量的富硒綠茶能夠在一定程度上降低-羥基丁酸脫氫酶的含量.乳酸脫氫酶（ldh）存在于肌肉中，當(dāng)心肌受損時(shí)，其含量升高.如圖6所示，與空白

17、組相比較，高劑量組和低劑量組均能夠適量降低大鼠心臟組織中的乳酸脫氫酶含量，雖有一定的差異，但差異效果并不顯著.劉艷芳等19和張新娟20的研究顯示，心肌酶屬于胞漿酶，當(dāng)組織損傷時(shí)，會(huì)進(jìn)入血液中，導(dǎo)致其水平增高，可以推測(cè)：富硒綠茶能夠通過(guò)緩解高血壓大鼠的心肌結(jié)構(gòu)損傷，適當(dāng)降低流入血液中的心肌酶.2.4.3 不同質(zhì)量濃度富硒綠茶對(duì)大鼠組織形態(tài)的影響對(duì)不同組大鼠的心臟組織進(jìn)行病理學(xué)分析，結(jié)果顯示：空白組大鼠心臟組織心肌細(xì)胞完整、排列整齊，未見(jiàn)異常改變，如圖7（a）所示;模型組心肌細(xì)胞肥大，肌纖維排列紊亂，可見(jiàn)明顯斷裂，如圖7（b）中黑色箭頭標(biāo)記所示，心肌間小血管動(dòng)脈壁增厚，伴纖維結(jié)締組織增生，存在少量

18、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（圖中紅色箭頭標(biāo)記）;低劑量組與模型組相比心臟組織同樣存在心肌細(xì)胞肥大，肌纖維排列紊亂，斷裂等情況，如圖7（c）所示;高劑量組心臟組織心肌細(xì)胞輕度肥大，肌纖維排列稍顯紊亂，如圖7（d）所示.該結(jié)果表明：天然富硒綠茶可以有效改善由于高血壓所導(dǎo)致的心臟組織心肌細(xì)胞肥大，排列紊亂的情況，這與毛偉峰等21的研究結(jié)果一致，他們發(fā)現(xiàn)抗氧化治療在控制心肌肥大發(fā)展過(guò)程中有著重要作用.本文作者猜測(cè)：綠茶及其有效成分（茶多酚、兒茶素等），可能由于其優(yōu)良的抗氧化作用，可以阻斷活性氧自由基ros誘導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化作用，能有效緩解由血壓升高引起ros的大量產(chǎn)生，從而導(dǎo)致的大鼠心肌細(xì)胞肥大、結(jié)構(gòu)損傷等現(xiàn)象22.對(duì)

19、不同組大鼠的腎臟組織進(jìn)行病理學(xué)分析，結(jié)果顯示：空白組腎臟組織腎小球、腎小管的形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，如圖8（a）所示;模型組腎小管上皮細(xì)胞輕度壞死，管腔內(nèi)可見(jiàn)管型，如圖8（b）中藍(lán)色箭頭標(biāo)記所示，腎間質(zhì)灶性大量炎細(xì)胞聚集;低劑量組腎小管管腔內(nèi)可見(jiàn)大量管型，腎間質(zhì)灶性少量炎細(xì)胞聚集，如圖8（c）所示;高劑量組腎小球毛細(xì)輕微淤血擴(kuò)張，腎小管管腔內(nèi)可見(jiàn)少量管型，組織形態(tài)大致正常，如圖8（d）所示.該結(jié)果表明：高質(zhì)量濃度的富硒綠茶可有效改善由于高血壓所導(dǎo)致的大鼠腎臟的病變.高血壓所引起血流動(dòng)力學(xué)的改變會(huì)導(dǎo)致腎臟自身調(diào)節(jié)功能失調(diào)，持續(xù)的高壓會(huì)使腎血管收縮，造成腎臟供血不足;同時(shí)腎臟血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，受刺激釋放的大

20、量細(xì)胞炎性因子和活性氧加重了腎損傷.郜蕊等23研究發(fā)現(xiàn)：綠茶中含有許多多酚樣的羥基，可以有效抑制不飽和脂肪酸以及膽固醇的氧化作用，同時(shí)增強(qiáng)腎臟組織的抗氧化能力.3  結(jié)論本研究用不同質(zhì)量濃度富硒綠茶水提物灌胃高鹽飲食誘導(dǎo)下的高血壓大鼠，結(jié)果表明：富硒綠茶可以有效緩解高鹽飲食誘導(dǎo)下大鼠血壓的升高，且對(duì)大鼠的心臟和腎臟的組織損傷均有一定的保護(hù)效果.富硒綠茶中含有質(zhì)量濃度較高的茶多酚、茶多糖、兒茶素等成分，它們優(yōu)良的抗氧化作用，能清除過(guò)量的氧自由基，改善脂代謝紊亂，從而阻斷其對(duì)心臟心肌細(xì)胞、腎臟腎小管等的損傷作用，但其劑量效應(yīng)關(guān)系和相關(guān)機(jī)制還有待深入研究.參考文獻(xiàn)：1  li d

21、 x，wang r r，huang j b，et al.effects and mechanisms of tea regulating blood pressure：evidences and promises j.nutrients，2019，11（5）：122-124.2 heinrich u，moore c e，de s s，et al.green tea polyphenols provide photoprotection，increase microcirculation，and modulate skin properties of women j.british journa

22、l of nutrition，2012，141：1202-1208.3  liu g，mi x n，zheng x x，et al.effects of tea intake on blood pressure：a meta-analysis of randomised controlled trials j.british journal of nutrition，2014，112（7）：1043-1054.4  hodgson j m，puddey i b，woodman r j，et al.effects of black tea on blood pressure：

23、a randomized controlled trial j.archives of internal medicine，2012，172（2）：186-188.5  yang x，huang m，qin c，et al.structural characterization and evaluation of the antioxidant activities of polysaccharides extracted from qingzhuan brick tea j.international journal of biological macromolecules，201

24、7，101：768-775.6  駱琳，丁青芝，馬海樂(lè).96孔板法用于高通量血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑體外檢測(cè)j.分析化學(xué)，2012，40（1）：129-134.luo l，ding q z，ma h l.establishment of in vitro high-throughput activity detection method for angiotensin converting enzyme inhibitors based on 96 well plates j.chinese journal of analytical chemistry，2012，40（1）：129-

25、134.7  張建勇，王偉偉，王蔚，等.茶多酚保健及藥理功能的應(yīng)用 j.中國(guó)茶葉，2020，42（12）：9-15.zhang j y，wang w w，wang w，et al.application of tea polyphenols in health care andpharmacological functions j.china tea，2020，42（12）：9-15.8  蔣榮華，候小利，王碩，等.甜茶多酚對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的影響 j.世界科學(xué)技術(shù)：中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2015，17（7）：1479-1485.jiang r h，hou x l，wang s，e

26、t al.effect of polyphenols from rubus suavissirnu s.lee on spontaneous hypertensive rats j.modernization of traditional chinese medicine and materia medica：world science and technology，2015，17（7）：1479-1485.9  童觀珍，付曉萍，楊艷，等.表兒茶素的分布及藥理活性研究進(jìn)展 j.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2018（2）：343-349.tong g z，fu x p，yang y

27、，et al.advances in research on the distribution and pharmacological activities of epicatechin j.journal of yunnan agricultural university （natural science），2018，33（2）：343-349.10      賈皓，余小平，彭曉莉，等.表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯對(duì)壓力超負(fù)荷導(dǎo)致的大鼠心肌肥厚的預(yù)防作用 j.成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，6（3）：205-210.jia h，yu x p，peng

28、x l，et al.epigallocatechin-3 gallate prevents cardiac hypertrophy induced by pressure overload in rats j.journal of chengdu medical college，2011，6（3）：205-210.11      柯翠，何作順.高血壓病與部分金屬元素的關(guān)系 j.職業(yè)與健康，2016，32（12）：1724-1726.ke c，he z s.relationship between hypertension and some me

29、tal elements j.occupation and health，2016，32（12）：1724-1726.12      柏寧，靳寶寧，唐建萍.微量金屬元素含量變化與高血壓病的關(guān)系 j.青海醫(yī)藥志，2009，39（8）：64-65.bai n，jin b n，tang j p，et al.relationship between changes of trace metal elements and hypertension j.qinghai medical journal，2009，39（8）：64-65.13 

30、60;    馬慧，茹鑫，王津，等.4種茶葉水提物及茶多酚的體外抗氧化性能研究 j.食品研究與開(kāi)發(fā)，2019，40（8）：65-70.ma h，ru x，wang j，et al.study on the antioxidant capacity of four tea water extracts and tea polyphenolsin vitroj.food research and development，2019，40（8）：65-70.14      趙瑜，周家春，張靖?jìng)?，?紫娟茶提取物對(duì)血管緊張素

31、轉(zhuǎn)換酶、-淀粉酶和胰脂肪酶的體外抑制作用 j.食品工業(yè)科技，2017，38（19）：11-20.zhao y，zhou j c，zhang j w，et al.inhibitory effects of zijuan tea （camellia sinensis var.kitamura） extracts on angiotensin converting enzyme，-amylase and pancreatic lipase in vitro j.science and technology of food industry，2017，38（19）：11-20.15 

32、0;    szuli?ska m，st?pie? m，kr?gielska-naro?na m，et al.effects of green tea supplementation on inflammation markers，antioxidant status and blood pressure in nacl-induced hypertensive rat model j.food and nutrition research，2017，61（1）：23-26.16      吳惠嶺，毛志方，傅劍云，

33、等.富含-氨基丁酸綠茶對(duì)大鼠輔助降血壓功能的研究 j.環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué)，2008（3）：252-255.wu h l，mao z f，fu j y，et al.antihypertensive effect in rat of green tea rich in -aminobutyric acid j.journal of environmental and occupational medicine，2008（3）：252-255.17      li g，zhang y，thabane l，et al.effect of green tea

34、 supplementation on blood pressure among overweight and obese adults：a systematic review and meta-analysis j.journal of hypertension，2015，33（2）：243-254.18      cheng m，zhang x，guo x，et al.black and green tea polyphenols attenuate blood pressure increases in stroke-prone spon

35、taneously hypertensive rats j.nutrients，2004，134：38-42.19      劉艷芳，趙性泉.高血壓腦出血患者預(yù)后相關(guān)因素分析 j.中國(guó)卒中雜志，2009，4（12）：978-983.liu y f，zhao x q.analysis of predietors correlated with the prognosis 90 days after hypertensive cerebral hemorrhage j.chinese journal of stroke，2009，4（12）：978-983.20      張新娟.血清心肌酶檢測(cè)對(duì)不同分級(jí)高血壓患者的診斷價(jià)值 j.大家健康（下旬版），2017，11（2）：57.zhang x j.diagnostic value of serum myocardial enzymes in patients with different grades of hypertension j.for all health，2017，1