DNAFeulgen染色課件

1、DNAFeulgen染色PPT課件DNADNA的的FeulgenFeulgen染色法染色法DNAFeulgen染色PPT課件1.1.了解了解Feulgen染色反應(yīng)原理；染色反應(yīng)原理；2. 掌握掌握FeulgenFeulgen染色的方法，觀察染染色的方法，觀察染色結(jié)果。色結(jié)果。實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康腄NAFeulgen染色PPT課件 DNA DNA經(jīng)弱酸（經(jīng)弱酸（lmollmolL HCIL HCI）水解）水解, ,其上的其上的嘌呤堿和脫氧核糖之間的配糖鍵打開嘌呤堿和脫氧核糖之間的配糖鍵打開, ,使脫氧使脫氧核糖的一端形成游離的醛基核糖的一端形成游離的醛基, ,這些醛基在原位這些醛基在原位與與Schi

2、ffSchiff試劑試劑( (無色品紅亞硫酸溶液無色品紅亞硫酸溶液) )反應(yīng)反應(yīng), ,形形成紫紅色的化合物成紫紅色的化合物, ,使細胞內(nèi)含使細胞內(nèi)含DNADNA的部位呈紫的部位呈紫紅色陽性反應(yīng)紅色陽性反應(yīng). .實驗原理實驗原理DNAFeulgen染色PPT課件 堿性品紅為紅色，結(jié)構(gòu)如圖堿性品紅為紅色，結(jié)構(gòu)如圖1中中A，A與與能產(chǎn)生能產(chǎn)生SO2的試劑作用后（如偏重亞硫酸鉀的試劑作用后（如偏重亞硫酸鉀與鹽酸作用，還原出與鹽酸作用，還原出SO2），雙鏈打開，成），雙鏈打開，成為無色的為無色的Schiff試劑，試劑，Schiff試劑的結(jié)構(gòu)如圖試劑的結(jié)構(gòu)如圖中中B所示，所示，B分子再與分子再與2個醛基（

3、個醛基（DNA水解后水解后釋放出的醛基）結(jié)合又出現(xiàn)雙鏈，成為結(jié)構(gòu)釋放出的醛基）結(jié)合又出現(xiàn)雙鏈，成為結(jié)構(gòu)如圖中如圖中C所示的化合物，呈紫紅色。所示的化合物，呈紫紅色。 DNAFeulgen染色PPT課件圖圖1 Feulgen反應(yīng)的染色原理反應(yīng)的染色原理 DNAFeulgen染色PPT課件 DNA染色后，除形成紫紅色染色后，除形成紫紅色C化合物化合物外，必然有多余的外，必然有多余的A和和B分子，分子，B分子很容分子很容易被氧化轉(zhuǎn)變?yōu)橐妆谎趸D(zhuǎn)變?yōu)锳有色分子，從而造成偽差。有色分子，從而造成偽差。因此必須迅速地多次用現(xiàn)配的因此必須迅速地多次用現(xiàn)配的SO2水清洗，水清洗，使使A分子轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色的分子轉(zhuǎn)變

4、為無色的B分子，消除染色的分子，消除染色的偽差。偽差。DNAFeulgen染色PPT課件 本次實驗對照組的設(shè)立：本次實驗對照組的設(shè)立：不經(jīng)稀不經(jīng)稀酸水解；酸水解；預(yù)先用熱三氯醋酸或預(yù)先用熱三氯醋酸或DNA酶酶處理，抽提去細胞中的處理，抽提去細胞中的DNA，而得到陰，而得到陰性反應(yīng)，從而證明了性反應(yīng)，從而證明了Feulgen反應(yīng)的專反應(yīng)的專一性。一性。DNAFeulgen染色PPT課件實驗用品實驗用品材料材料 洋蔥內(nèi)表皮洋蔥內(nèi)表皮試劑試劑 Carnoy固定液固定液 l mol/L HCl Schiff試劑試劑 亞硫酸水溶液亞硫酸水溶液(漂白液漂白液) 0.5%固綠染液固綠染液DNAFeulgen

5、染色PPT課件實驗方法：實驗方法：取材（洋蔥內(nèi)表皮）取材（洋蔥內(nèi)表皮） 固定固定 1015分鐘分鐘 對照對照2 水洗水洗 2分鐘分鐘 5%三氯醋酸三氯醋酸90度度15分鐘分鐘 對對 照照 水解水解(1M HCl ) （置室溫（置室溫1分鐘后，分鐘后，608分鐘）分鐘） 1 水洗（可省）水洗（可?。?反應(yīng)反應(yīng) ( Schiff s) （暗袋中（暗袋中 40分鐘）分鐘） 洗滌洗滌 ( 亞硫酸水亞硫酸水) 洗三次，每次洗三次，每次5分鐘分鐘 水洗水洗 5分鐘分鐘 復(fù)染（復(fù)染（0.5 固綠固綠) 1分鐘分鐘 水洗水洗 鏡檢鏡檢 實驗組：細胞核呈紫紅色，核仁及細胞質(zhì)呈綠色實驗組：細胞核呈紫紅色，核仁及細

6、胞質(zhì)呈綠色DNAFeulgen染色PPT課件 1.取材薄，幼嫩，大小合適。取材薄，幼嫩，大小合適。 2.固定劑以固定劑以Carnoy固定最合適，涂片可用甲醇固定。固定最合適，涂片可用甲醇固定。 3.水解時間勿過短或過長。水解時間勿過短或過長。 4.Schiff試劑質(zhì)量可靠，無色，強刺激氣味，密封，試劑質(zhì)量可靠，無色，強刺激氣味，密封， 避光使用保存（避光使用保存（6個月）。個月）。 5.洗滌劑現(xiàn)用現(xiàn)配，保持有足夠的二氧化硫濃度。洗滌劑現(xiàn)用現(xiàn)配，保持有足夠的二氧化硫濃度。 6.認(rèn)真做對照，以示陽性反應(yīng)的真實性。認(rèn)真做對照，以示陽性反應(yīng)的真實性。 7.對照組不可反應(yīng)對照組不可反應(yīng)40分鐘以上。分鐘以上。 8.避免固綠過染。避免固綠過染。注意事項