光譜法測定動物肝臟中銅含量.doc

1、編號編號 學(xué)學(xué)士士學(xué)學(xué)位位論論文文光譜法測定動物肝臟中銅含量光譜法測定動物肝臟中銅含量學(xué)生姓名: 阿瓦古力阿布都日衣木 學(xué) 號： 20050311007 系 部： 生命與環(huán)境科學(xué)系 專 業(yè)： 化 學(xué) 年 級: 2006-1 班 指導(dǎo)教師：阿不都卡德爾阿不都克尤木完成日期: 2011 年 5 月 12 日中文摘要本文以 Cu（）-磺基水楊酸在 pH=4 時，形成 MA 型綠色絡(luò)合物的反應(yīng)，采用光譜法測定動物肝臟中的銅含量。本實驗采用硝酸硫酸-高氯酸，硝酸-高氯酸,硝酸過氧化氫等三種混合酸體系的方法來消解動物的肝臟。實驗結(jié)果表明：該方法的最大吸收長波在 692.0nm 處，線性范圍為 0。0010

2、.009 mg。mL1,pH 值在 4 時，磺基水楊酸的用量 3mL。通過本方法對羊肝臟和牛肝臟中的銅含量進(jìn)行測定,其中用硝酸-過氧化氫體系消解的方法比較好,其含量分別為 63。95ug。g-1和 44.74 ug。g-1。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：磺基水楊酸;光譜法;動物肝臟；銅目錄中文摘要.1引言.11.實驗部分.31.1 儀器和藥品 .31.1.1 實驗儀器 .31.1.2 實驗藥品 .31.1。3 實驗樣品.31。2 實驗方法 .32。 結(jié)果與討論.42.1 吸收光譜 .42。2 磺基水楊酸用量的影響 .42.3 PH 值的影響.52.4 動物肝臟中銅的測定 .62。4。1 濕法消解的幾種酸組合

3、實驗.62.4。2 樣品溶液中銅含量的測定：.62。5 工作曲線 .72.5。1 標(biāo)準(zhǔn)曲線.73.結(jié)論.9參考文獻(xiàn).10致謝.11引言銅是極為重要的生命必需微量元素之一,具有多種重要的生物化學(xué)功能肝臟是機(jī)體物質(zhì)代謝的紐帶，同時也是銅積累的場所。了解動物肝臟中銅的含量對研究物質(zhì)代謝，食品營養(yǎng)，微量元素的移體規(guī)律，均具有十分重要的意義1.銅參與酶催化功能，也是人體血液、肝臟和腦組織等銅蛋白的組成部分，成人每天需要量估計為20mg,但過量的銅，對人和動、植物都有害2。銅的化合物以一價或二價狀態(tài)存在.銅，地殼中銅的平均豐度為55ppm。在自然界中，銅主要以硫化物礦和氧化物礦形式存在，分布很廣。銅存在于

4、血漿銅藍(lán)蛋白,超氧化物歧化酶,細(xì)胞色素C氧化酶等。含銅酶在新陳代謝過程中表現(xiàn)出多種多樣的生化功能。如運送氧氣，O2-的歧化，F(xiàn)e2+的氧化，包括細(xì)胞色素在內(nèi)的有機(jī)底物氧化物，單氧合作用以及電子傳遞，但攝入過量的銅鹽將導(dǎo)致嚴(yán)重的健康問題3。近年由于農(nóng)業(yè)上大量使用含銅殺蟲劑和除霉劑,加上工業(yè)“三廢”的污染，是許多食品中含銅量超標(biāo)。因此，食品中銅的分析受到普遍關(guān)注。目前應(yīng)用于食品中的分析方法主要有原子吸收光譜法和光度。法，其中以光度法最為簡便使用4為了進(jìn)一步提高光度法測定銅的選擇性，用磺基水楊酸，結(jié)構(gòu)式如下:目前應(yīng)用于食品中的分析方法主要有原子吸收光譜法和光度法，其中以光度法最為簡便使用4。為了進(jìn)一

5、步提高光度法測定銅的選擇性，用磺基水楊酸,結(jié)構(gòu)式如下:OHOHOSOOOH。圖 1 磺基水楊酸結(jié)構(gòu)式.磺基水楊酸在絡(luò)合物反應(yīng)中,常伴有顏色的明顯變化,因此研究這些絡(luò)合物的吸收光譜可以測定它們的組成。測定方法較多，已經(jīng)在對金屬銅含量的測定中得到了較好的推。本實驗采用應(yīng)用Cu()磺基水楊酸絡(luò)合物的組成用與溶液的pH 值有關(guān), Cu（） -磺基水楊酸絡(luò)合物在pH值4時形成MA型.分光光度法測定生物材料中銅的含量則有極為現(xiàn)實的意義. 磺基水楊酸HSO3C6H3(OH）COOH中SO3H中H在水溶液中交易解離：-COOH中的H在水溶液中交易解離;-OH的H在水溶液中交易解離；磺基水楊酸和銅離子配位,形成

6、綠色絡(luò)合物5。測定動物肝臟中銅含量的方法很多，常用的是光度法和原子吸收分光光度法6。對于含銅量高的肝臟，用磺基水楊酸做顯色劑進(jìn)行光度法測定是一種準(zhǔn)確可靠而又簡便快速的分析方法。本文探討可見分光光度計，在pH值=4時，磺基水楊酸分光光度法測定動物肝臟中的銅含量，進(jìn)行了條件和方法的對比試驗，測定結(jié)果比較好。分光光度法是廣泛應(yīng)用于微量組分測定的一種方法，銅試劑（DDTC）測定銅屬經(jīng)典方法,近年來,對該方法有改進(jìn)性研究并廣泛應(yīng)用于鋼，無機(jī)鹽,鋁合金，水等試樣中銅的測定。絡(luò)合物體系分光光度法測定微量Cu,方法的靈敏度高，選擇性好，結(jié)果準(zhǔn)確，操作簡便7.本文以 Cu() -磺基水楊酸在 pH=4 時，形成

7、 MA 型綠色絡(luò)合物的反應(yīng)分光光度法測定動物肝臟中銅含量，該方法的最大吸收長波在 692nm 處,線性范圍為0.0010。009 mg。mL-1,對羊肝臟和牛肝臟中的銅含量進(jìn)行測定，其中硝酸-過氧化氫體系消解方法比較好，其含量分別為 63。95 ug.g1和 44.74 ug。g-1.從而得到最佳的試驗結(jié)果。1.實驗部分1。1 儀器和藥品1.1。1 實驗儀器T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司） ；FA1104 電子天平（上海民橋精密儀器有限公司 )。1.1。2 實驗藥品磺基水楊酸；氯化銅；NaOH； H2SO4;均為分析；實驗用水為二次蒸餾水。銅標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取氯化銅晶體

8、 2.6g 于 100mL 容量瓶中配置得銅離子濃度為10mg。mL-1的二價銅貯備液，再逐級稀釋法配成 1mg.mL1的工作溶液； 1。1.3 實驗樣品羊肝和牛肝；從喀什東巴扎購買。 1。2 實驗方法在 10mL 容量瓶中依次加入 3mL 銅標(biāo)準(zhǔn)溶液,加 3mL 磺基水楊酸溶液，用氫氧化鈉溶液調(diào)溶液 pH=4.0,其中一支加入適量銅標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品試液 3mL，另一支為試劑空白，定容到 10mL 搖均。然后以水為參比，用 1cm 的比色皿在692.0nm 波長處分別測定試劑空白的吸光度 A0和反應(yīng)體系的吸光度 A 并計算A =A0-A .2. 結(jié)果與討論2。1 吸收光譜取 Cu2+按實驗方法顯

9、色,在不同波長處測其吸光度，繪制出吸收光譜如圖 2所示。由圖 2 可知,Cu2+與磺基水楊酸形成的綠色絡(luò)合物在波長為 692.0nm 處有強(qiáng)吸收峰,所以本實驗所選擇的波長為 692.0nm。00.050.10.150.20.250.30.350.40.45500550600650700750800850900波長/nm吸光度圖 2 吸收光吸收譜波長與吸光度的關(guān)系圖2。2 磺基水楊酸用量的影響取 3mL 銅標(biāo)準(zhǔn)溶液，改變磺基水楊酸用量在 1.06。0mL 時按實驗方法測定，A 有一定的變化并出現(xiàn)最強(qiáng)的吸收峰，如圖 3 所示，本實驗所選用磺基水楊酸用量為 3mL。0.0000.0100.0200.

10、0300.0400.0500.0600.0700.0800.0900123456磺基水楊酸/mL吸光度圖 3 磺基水楊酸用量對吸光度的影響 2.3 pH 值的影響取一組 10mL 容量瓶,各加入 3mL 銅標(biāo)準(zhǔn)溶液，用 pH 計調(diào)處系列不同酸度，按實驗方法測其吸光度（見圖 4） 。結(jié)果表明 pH 為 4。0 時 A 有最大值，故本實驗選擇 pH=4。0 時，銅離子可與磺基水楊酸形成穩(wěn)定的綠色絡(luò)合物。 0.000.020.040.060.080.100.120.140.160.002.004.006.008.00 ApH值圖 4 吸光度（A）-pH 值曲線2.4 動物肝臟中銅的測定2。4.1 濕

11、法消解的幾種酸組合實驗采用先低溫烘干樣品后，再用不同混酸及氧化劑于電爐上加蓋回流消解樣品.1.硝酸高氯酸混酸體系的消解.用于燥潔凈的 150mL 三角瓶稱取 5g 左右的羊肝(牛肝）均漿，于烘箱中 70烘干。加硝酸約 10mL,蓋上小漏斗在調(diào)溫電爐上緩慢升溫，趕去氮氧化物，消解液呈透明狀至近干時，開始滴加高氯酸（約 24 mL） ，待激烈反應(yīng)冒出高氯酸白煙后，冷卻,當(dāng)消解液仍不出現(xiàn)顏色時即為分解完成.將消解液移至 25mL 容量瓶定容成為待測液。2。硝酸-硫酸-高氯酸混酸體系消解：向盛有烘干樣品的三角瓶內(nèi)加硝酸和濃硫酸的混酸(3:1.v/v）約 10mL，在調(diào)溫電爐上緩慢加熱,激烈反應(yīng)結(jié)束，氮

12、氧化物氣體消失.消解液呈褐色時，取下冷卻后加高氯酸 5mL，在緩慢升溫至微沸狀態(tài),待瓶內(nèi)大量冒出白煙后，消解液呈淺亮黃色透明液時，冷卻，移至 25 mL 容量瓶內(nèi)定容成為待測液。3.硝酸-過氧化氫體系消解：向盛有烘干樣品的三角瓶內(nèi)加硝酸 10 mL，再調(diào)溫電爐上緩慢加熱(注意不時地補(bǔ)充硝酸）待消解液透明時，開始繼續(xù)滴加過氧化氫至消解液呈無色透明后移至 25mL 容量瓶稀釋至刻度.同樣，按不同的消解方式制備消解空白液供測定時使用。2。4。2 樣品溶液中銅含量的測定：準(zhǔn)確移取羊肝(牛肝)樣品溶液 3mL 于 10mL 容量瓶內(nèi)，加 3mL 磺基水楊酸溶液，用氫氧化鈉調(diào)溶液至 pH=4， ，定容到

13、10mL，搖均。然后 用 1cm 的比色皿在 692.0nm 波長處分別測定,以消解空白（按實驗方法加入與待測樣液相同的各種試劑后定容至 10mL)作參比,測定其吸光度值。由工作曲線查出銅的含量，從而計算出羊肝（牛肝)中的實際含銅量。2。5 工作曲線2.5。1 標(biāo)準(zhǔn)曲線按實驗方法,改變銅標(biāo)準(zhǔn)溶液的加入量，當(dāng)銅標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度在 0.0010.009 mg。mL1范圍內(nèi)時，濃度與A 呈線性關(guān)系，線性回歸方程:y=21。 425x0。0069，相關(guān)系數(shù) R2=0。9956； 表 1 標(biāo)準(zhǔn)銅溶液的吸光度測定Cu2+濃度（mg.mL1)0。0010.0020。0030。0040.0050.0060.00

14、70.0080。009吸光度 A0。0180。0300。0440.0580.0800.1000.1110。1300.147A0.0140。0260。0400.0540.0760。0960。1070。1260.143y = 21.425x - 0.0069R2 = 0.99560.0000.0200.0400.0600.0800.1000.1200.1400.1600.000 0.001 0.002 0.003 0.004 0.005 0.006 0.007 0.008濃度(mg/mL)吸光度圖 5 標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的吸光度 A 值,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的銅的含量 X（ug.mL-1） 。結(jié)果如表

15、2 所示。表 2 樣品中銅的測定 樣品吸光度羊肝臟牛肝臟HNO3-HClO40.0510。042HNO3-H2SO4HClO40。0570.053HNO3-H2O20。0830.056線性方程為:y=21.425x-0。0069式中：y吸光度 x樣品中銅的濃度（mg。L1)1） 羊肝臟: y=0。083 = x=0.01398（mol.L-1)m（銅）=0.013980.00363。53/25=0。00031973 g(ug。5g1羊肝臟）m（標(biāo)準(zhǔn))=0.000319731/5=63.95ug.g-1（1g 羊肝臟)2) 牛肝臟：y=0.056 = x=0。0097861（mol.L-1)m（

16、銅）=0.00978610.00363.53/25=0.00022371 g(ug.5g-1牛肝臟) m(標(biāo)準(zhǔn))=0。000223711/5=44.742 ug。g-1（1g 牛肝臟） 表 3 不同消解方式測定樣品中銅含量（ug.g-1)磺基水楊酸法方法消解方式羊肝臟牛肝臟HNO3HClO4 HNO3-H2SOHClO4HNO3H2O241。1952.5663.9534。7842。6144.74通過本方法對羊肝臟和牛肝臟中的銅含量進(jìn)行測定，其中硝酸-過氧化氫體系消解方法比較好，其含量分別為 63.95 ug。g-1和 44。74 ug。g-1.3。結(jié)論本文在 pH=4 時，Cu（)-磺基水楊酸

17、形成 MA 型絡(luò)合物的反應(yīng)，采用分光光度法測定銅含量的方法進(jìn)行了初步討論。通過本方法進(jìn)行測定羊肝臟和牛肝臟中的銅含量.磺基水楊酸分光光度法測定動物肝臟時，用硝酸-硫酸高氯酸,硝酸-高氯酸，硝酸過氧化氫等混酸體系等消解等方式。本實驗選擇了最佳條件：磺基水楊酸的用量為 3mL，pH 值為 4，最大吸收長波在 692nm 處時，線性范圍為 0。0010.009 mg。mL1時,線性回歸方程：y=21。425x0.0069，相關(guān)系數(shù) R2=0.9956；其中硝酸-過氧化氫體系消解方法比較好，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行樣品含量的計算測定結(jié)果為羊肝臟和牛肝臟中銅含量分別為 63.95 ug。g1和 44.74 ug.g1。參考文獻(xiàn)1 王鍵.豬肝中銅含量的分光光度法測定J四川師范大學(xué)學(xué)報，1995，18（1）:62672 張麗萍，但娟。吸光光度法同時測定茶葉中銅鐵J 。理化檢驗化學(xué)分冊，2001,37(7)：3293303 王夔,徐輝碧，唐任寰，等。生命科學(xué)中的微量元素M。北京：中國計量出版社，1998.1481494 楊慧芬，李明元，沈文.食品衛(wèi)生理化檢驗標(biāo)準(zhǔn)手冊M 。北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，1997.114 1165 嚴(yán)忠，陳龍武，徐惠儉等.物理化學(xué)實驗M. 北京：高等教育出版社,2007，12（2