丙二醛(MDA)含量的測(cè)定

1、植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件 植物在逆境下遭受傷害（或衰老）與活性植物在逆境下遭受傷害（或衰老）與活性氧積累誘發(fā)的膜脂過氧化作用密切相關(guān)，氧積累誘發(fā)的膜脂過氧化作用密切相關(guān)，膜脂過氧化的產(chǎn)物有二烯軛合物、脂類過膜脂過氧化的產(chǎn)物有二烯軛合物、脂類過氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde）是膜脂）是膜脂過氧化最重要的產(chǎn)物之一，因此可通過測(cè)過氧化最重要的產(chǎn)物之一，因此可通過測(cè)定定MDA了解膜脂過氧化的程度，以間接測(cè)了解膜脂過氧化的程度，以間接測(cè)定膜系統(tǒng)受損程度以及植物的抗逆性。定膜系統(tǒng)受損程度以及植物的抗逆性。原理原理+1

2、00 COHNSNHOOOHHHNHSNHOOHOOHNNHS2O硫代巴比妥酸丙二醛3,5,5-三甲基惡唑2,4-二酮 （三甲川）分光光度計(jì)；分光光度計(jì)； 研缽；研缽；剪刀；剪刀； 恒溫水?。缓銣厮?；試管：試管：20 mL4 離心機(jī)。離心機(jī)。1. 5 %三氯醋酸；三氯醋酸； 2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸三氯醋酸溶解定容）；溶解定容）；3. 0.05 mol L1磷酸緩沖液，磷酸緩沖液， pH 7.8。 正常生長(zhǎng)的以及經(jīng)逆境處理的小麥、玉米正常生長(zhǎng)的以及經(jīng)逆境處理的小麥、玉米或其他植物的葉片?；蚱渌参锏娜~片。1取小麥植株上不同葉位的葉片取小麥植株上不同葉位的

3、葉片35片，洗凈擦干，剪成片，洗凈擦干，剪成0.5 cm長(zhǎng)的小段，混勻。長(zhǎng)的小段，混勻。2稱取葉片切段稱取葉片切段0.3 g，放入冰浴的研缽中，加入少許石，放入冰浴的研缽中，加入少許石英砂和英砂和2 mL 0.05 mol L-1磷酸緩沖液，研磨成勻漿。磷酸緩沖液，研磨成勻漿。將勻漿轉(zhuǎn)移到試管中，再用將勻漿轉(zhuǎn)移到試管中，再用3 mL 0.05 mol L-1磷酸磷酸緩沖液，分三次沖洗研缽，合并提取液。緩沖液，分三次沖洗研缽，合并提取液。3在提取液中加入在提取液中加入5 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，搖勻。硫代巴比妥酸溶液，搖勻。4將試管放入沸水浴中煮沸將試管放入沸水浴中煮沸10 min，（

4、自試管內(nèi)溶液中，（自試管內(nèi)溶液中出現(xiàn)小氣泡開始計(jì)時(shí)）。到時(shí)間后，立即將試管取出并放出現(xiàn)小氣泡開始計(jì)時(shí)）。到時(shí)間后，立即將試管取出并放入冷水浴中。入冷水浴中。5待試管內(nèi)溶液冷卻后，待試管內(nèi)溶液冷卻后，3000g離心離心15 min，取上清，取上清液并量其體積。以液并量其體積。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液為空白測(cè)硫代巴比妥酸溶液為空白測(cè)532 nm、600 nm和和450 nm處的消光值。處的消光值。 式中，式中，Vt：提取液總體積（：提取液總體積（mL）；）； Vs：測(cè)定用提取液體積（：測(cè)定用提取液體積（ml）；）； FW：樣品鮮重（：樣品鮮重（g）。）。-1t532600450VMDA mmo

5、l g FW = 6.452DD0.559 DV Ws 1可溶性糖與可溶性糖與TBA顯色反應(yīng)的產(chǎn)物在顯色反應(yīng)的產(chǎn)物在532 nm也有吸收（最大吸收在也有吸收（最大吸收在450 nm），當(dāng)植物處于），當(dāng)植物處于干旱、高溫、低溫等逆境時(shí)可溶性糖含量會(huì)增高，干旱、高溫、低溫等逆境時(shí)可溶性糖含量會(huì)增高，必要時(shí)要排除可溶性糖的干擾。必要時(shí)要排除可溶性糖的干擾。 2低濃度的鐵離子能增強(qiáng)低濃度的鐵離子能增強(qiáng)MDA與與TBA的顯色反的顯色反應(yīng)，當(dāng)植物組織中鐵離子濃度過低時(shí)應(yīng)補(bǔ)充應(yīng)，當(dāng)植物組織中鐵離子濃度過低時(shí)應(yīng)補(bǔ)充Fe3+（最終濃度為（最終濃度為0.5 nmol L-1） 3如待測(cè)液渾濁，可適當(dāng)增加離心力及時(shí)間，如待測(cè)液渾濁，可適當(dāng)增加離心力及時(shí)間