專題三植物的組織培養(yǎng)技術(shù)-知識點總結(jié)_4410

1、專題三植物的組織培養(yǎng)技術(shù)3.1菊花的組織培養(yǎng)1. 細胞分化指在生物個體發(fā)育過程中， 相同細胞的后代在形態(tài)、 結(jié)構(gòu)和生理功能上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過程。 細胞分化使多細胞生物體中細胞結(jié)構(gòu)和功能趨向?qū)ｉT化，有利于提高各種生理功能的效率。2. 具有某種生物全套遺傳信息的任何一個活細胞，都具有發(fā)育成完整個體的潛能，叫做植物細胞的全能性。 但在生物體的生長發(fā)育過程中并未表現(xiàn)出來， 這是因為在特定的時間和空間條件下， 通過基因的選擇性表達， 形成了不同組織和器官。3. 離體的植物組織或細胞， 在適宜條件下培養(yǎng)了一段時間以后， 會通過細胞分裂，形成愈傷組織， 這種由高度分化的植物組織或細胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，

2、稱為植物細胞的脫分化（去分化） 。愈傷組織繼續(xù)進行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個過程叫做再分化。4. 愈傷組織的細胞排列疏松而無規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細胞。5. 植物組織培養(yǎng)技術(shù)廣泛應(yīng)用在實現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖、 培育無病毒作物、 制作人工種子、培育作物新品種以及細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)等方面。5. 影響植物組織培養(yǎng)的條件有材料、營養(yǎng)、激素及環(huán)境條件。(1) 材料：植物材料的選擇直接關(guān)系到試驗的成敗。 菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料。 一般來說，容易進行無性繁殖的植物容易進行組織培養(yǎng)。 選取生長旺盛嫩枝進行組培的原因是嫩枝生理狀態(tài)好， 容易誘

3、導(dǎo)脫分化和再分化。(2) 營養(yǎng)：常用的培養(yǎng)基是 MS固體培養(yǎng)基，其中含有的大量元素是 N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I 、Co，它們提供了植物細胞所必需的無機鹽。 有機物有甘氨酸、 煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。蔗糖提供碳源，維持細胞滲透壓； 甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機營養(yǎng)。(3) 激素：植物激素中生長素和細胞分裂素是啟動細胞分裂、 脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。使用順序?qū)嶒灲Y(jié)果生長素細胞分裂素比值與結(jié)果先生長素，后細胞分裂素有利于分

4、裂但不分化比值高時促根分化，抑芽形成先細胞分裂素，后生長素細胞既分裂也分化比值低時促芽分化，抑根形成同時使用分化頻率提高比值適中促進愈傷組織生長(4) 環(huán)境條件：菊花的組織培養(yǎng)，一般將 pH控制在 5.8 左右，溫度控制在 1822，并且每日用日光燈照射 12h.6. 菊花組織培養(yǎng)的操作流程包括：配制 MS固體培養(yǎng)基外植體的消毒接種培養(yǎng)移栽栽培7. 制備 MS固體培養(yǎng)基的步驟是：配置各種母液配制培養(yǎng)基滅菌。先將各種成分按配方比例配制成濃縮液（培養(yǎng)基母液） 。然后在容器中加入瓊脂（加熱融化），依次加入蔗糖、大量元素、微量元素、有機物和植物激素的母液，并用蒸餾水定容到 1000 毫升，調(diào)節(jié) PH，

5、分裝到錐形瓶中，用高壓蒸汽滅菌法進行無菌處理。8. 外植體是指用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。 取生長旺盛的嫩枝用流水移向細胞一側(cè)（單核靠邊期） ，并分裂成 1 個生殖細胞核和 1 個花粉管細胞核，沖洗加少許洗衣粉刷洗在流水下沖洗20min 左右無菌吸水紙吸干表面水進而形成兩個細胞， 一個是生殖細胞， 一個是營養(yǎng)細胞。 生殖細胞將再分裂一次，分體積分數(shù)為 70%的酒精中搖動 23 次，持續(xù) 67s，無菌水中清洗用無菌形成兩個精子（基因組成完全相同） 。吸水紙吸干表面水分質(zhì)量分數(shù)為 0.1%的氯化汞溶液中 12min無菌水中至少4. 通過花藥培養(yǎng)產(chǎn)生單倍體植株有兩種途徑， 一種是花粉通過胚狀體

6、階段發(fā)育為清洗 3 次，漂洗消毒液。 應(yīng)注意對外植體進行表面消毒時， 就要考慮藥劑的消毒植物，另一種是花粉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再將其誘導(dǎo)分化成植株。效果，又要考慮植物的耐受能力。這兩種途徑不同主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。9. 接種過程中插入外植體時形態(tài)學(xué)上端朝上，每個錐形瓶接種78 個外植體，5. 胚狀體是植物體細胞組織培養(yǎng)過程中， 誘導(dǎo)產(chǎn)生的形態(tài)與受精卵發(fā)育成的胚類整個過程要求無菌操作。似的結(jié)構(gòu)，有胚芽、胚根、胚軸等完整結(jié)構(gòu)，就像一粒種子。10. 放在無菌箱中培養(yǎng)， 定期進行消毒， 保持適宜的溫度（1822）和光照（12h） 6. 影響花藥培養(yǎng)的主要因素是材料的選擇與

7、培養(yǎng)基的組成。應(yīng)該選月季的初花11移栽前先打開培養(yǎng)瓶的封口膜， 讓其在培養(yǎng)間生長幾日， 然后用流水清洗根期（花粉早期的花藥比后期更容易產(chǎn)生花粉植株；選擇單核靠邊期（花藥培養(yǎng)成部培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時間壯苗，最功率最高）；選擇完全未開放的花蕾（有利于材料的消毒） 。后進行露天栽培。7. 選擇花藥時，用醋酸洋紅法使細胞核中的染色體著色， 通過鏡檢來選擇單核靠12. 外植體在培養(yǎng)過程中可能會被污染，原因有外植體消毒不徹底；培養(yǎng)基滅菌邊期的花粉。若不易著色，需采用焙花青 - 鉻礬法將花粉細胞核染成藍黑色。不徹底；接種中被雜菌污染；錐形瓶密封性差等。8. 滅菌后的花蕾

8、，要在無菌條件下除去萼片和花瓣， 并立即將花藥接種到培養(yǎng)基3.2 月季的花藥培養(yǎng)上。在剝離花藥時， 要盡量不損傷花藥 （否則接種后容易從受傷部位長出愈傷組1.被子植物的雄蕊包含花絲、 花藥兩部分?；ㄋ帪槟覡罱Y(jié)構(gòu)， 內(nèi)部含有許多花粉。織），同時還要徹底去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體花粉是由花粉母細胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細胞。的形成。2.被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷小孢子四分體時期、單核期和雙核期等階段。9. 每瓶接種花藥 710 個, 溫度控制在 25左右 , 幼小植株形成后給予光照，培3.在小孢子四分體時期， 4 個單倍體細胞連在一起，進入單核期時，四分體的4養(yǎng) 2030 天后 , 花藥開裂長出愈傷組織或形成胚狀體。 此時要將愈傷組織及時轉(zhuǎn)個單倍體細胞彼此分離， 形成 4 個具有單細胞核的花粉粒， 這時的細胞含濃厚的移到分