核酸擴(kuò)增技術(shù)在血液篩查中的應(yīng)用研究

1、核酸擴(kuò)增技術(shù)在血液篩查中的應(yīng)用研究彭靖常德市中心血站湖南常德415000摘要：目的探究采用核酸擴(kuò)增技術(shù)進(jìn)行血液篩查的應(yīng)用價(jià)值。方法選取2013年6月一2014年4月在我獻(xiàn)血站進(jìn)行無償獻(xiàn)血者的血液標(biāo)木32202例，.且 按篩選方法分為實(shí)驗(yàn)組和對照組。實(shí)驗(yàn)組采用雙試劑酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（elisa） 對血液進(jìn)行篩查，對照組采用核酸擴(kuò)增技術(shù)（nat）對血液進(jìn)行篩查。將兩組標(biāo) 木的篩查結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組32202例中檢出hbvdna陽性286 例，其陽性檢出率為1.77%,對照組32202例中檢出hbvdna陽性346例，其陽 性檢出率為2.15%o結(jié)論nat對hbvdna的陽性檢出率明顯

2、高于elisa,不僅避 免了血液篩查中漏檢情況的出現(xiàn)，很大程度上降低了輸血傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)，而且 保證了臨床上的輸血安全，值得在臨床上推廣應(yīng)用。關(guān)鍵詞：核酸擴(kuò)增技術(shù)；血液篩查；窗口期；輸血安全隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，因輸血引起的相關(guān)傳染病的預(yù)防和控制已經(jīng)引起 了全社會(huì)的高度關(guān)注，而預(yù)防和控制輸血相關(guān)傳染病的源頭就是要對獻(xiàn)血者的血 液標(biāo)木進(jìn)行嚴(yán)格的篩查。雙試劑酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，臨床上簡稱elisa,是在免 疫酶技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展而來的一種免疫測定技術(shù)，其過程包括抗原（抗休）吸附在 固相載體上為包被，加待測抗體（抗原），再加相應(yīng)酶標(biāo)記抗體（抗原），牛成抗 原（抗體）待測抗體（抗原）酶標(biāo)記抗體（抗原）的復(fù)

3、合物，再與該酶的底 物反應(yīng)牛成有色產(chǎn)物，最終借助分光光度計(jì)的光吸收計(jì)算抗體（抗原）的量。待 測抗體（抗原）的定量與有色產(chǎn)物的牛成量成正比。核酸擴(kuò)增技術(shù)，臨床上簡稱nat,包括聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)、熒光定量pcr技 術(shù)和其他核酸擴(kuò)增技術(shù)（核酸序列依賴性擴(kuò)增、連接酶鏈反應(yīng)和分枝dna信號(hào) 放大系統(tǒng)），其中最主要且最常用的是聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)，其基木原理類似于dna 的體內(nèi)復(fù)制，首先將待擴(kuò)增的dna模板加熱至變性解鏈，隨之將反應(yīng)混合物冷 卻至一定的溫度，且這一溫度可將引物與它的靶序列發(fā)生退火，之后再將溫度升 高使退火引物在dna聚合酶的作用下延伸，這個(gè)過程就是pcr的一個(gè)循環(huán)，也 就是說這種循環(huán)在適合的條

4、件下是不斷重復(fù)的2。1資料與方法1.1研究對象：選取2013年6月一2014年4月在我獻(xiàn)血站進(jìn)行無償獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本32202 例，其中男性19568例，女性12634例，獻(xiàn)血者的年齡在1947歲，平均年齡 為27.7歲；獻(xiàn)血者的體重在5578kg,平均體重為62.3kg。兩組獻(xiàn)血者在性別、 年齡和體重等方面均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p&gt；0.05）,有可比性。1.2研究方法：實(shí)驗(yàn)組采用雙試劑酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（elisa）對血液進(jìn)行篩查，對照組采 用核酸擴(kuò)增技術(shù)（nat）對血液進(jìn)行篩查。將兩組標(biāo)本的篩查結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比 較。1.3 試齊實(shí)驗(yàn)組：乙型肝炎病毒表面抗原elisa診斷試劑盒，丙型肝

5、炎病毒抗體elisa 診斷試劑盒，人類免疫缺陷病毒抗體elisa診斷試劑盒，梅毒螺旋體抗體elisa 診斷試劑盒，乙肝肝炎“兩對半”檢測試劑盒。對照組：hbv/hcv/hiv熒光pcr核酸檢測試劑盒。兩組所用的試劑均在有效限期內(nèi)。1.4儀器：實(shí)驗(yàn)組：xantus全自動(dòng)加樣儀，fame24/20全自動(dòng)酶免分析儀，uranus ae 200 全自動(dòng)酶免分析儀。對照組：hamilton star全自動(dòng)核酸提取儀、羅氏cobas?s 201核酸血液篩查 系統(tǒng)。1.4檢測方法：實(shí)驗(yàn)組：采用相應(yīng)的試劑對該組血液標(biāo)本進(jìn)行抗-hiv.抗hcv、hbsag和梅 毒螺旋體抗體的elisa監(jiān)測。對照組：將該組血液標(biāo)

6、本以6例為一組匯集并采用相應(yīng)的試劑進(jìn)行hbv dna、 hcv rna和hivjrna的核酸擴(kuò)增檢測，自動(dòng)判讀結(jié)果。當(dāng)匯集池中某一項(xiàng)的檢測結(jié)果為陰性時(shí)，說明該匯集池中6份標(biāo)本的該項(xiàng)nat 檢測均為陰性；當(dāng)匯集池中標(biāo)本的某一項(xiàng)檢測結(jié)果為陽性吋，則須將相對應(yīng)的6 份標(biāo)本拆分并進(jìn)行該項(xiàng)單標(biāo)本檢測，若檢測結(jié)果為陰性就說明此標(biāo)本該項(xiàng)的nat 檢測結(jié)果為陰性，若檢測結(jié)果為陽性就說明此標(biāo)本該項(xiàng)的nat檢測結(jié)果為陽性。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:應(yīng)用spss17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，計(jì) 量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。均數(shù)間比較應(yīng)用t檢驗(yàn)，兩個(gè)變量間的關(guān)系 比較作相關(guān)數(shù)據(jù)

7、分析，p<0.05,差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1兩組血液標(biāo)本的hbv dna的陽性檢出率對比結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組32202例中檢出hbv dna陽性286例，其陽性檢出率為0.89%,對照 組32202例中檢出hbv dna陽性346例,其陽性檢出率為1.07%。見表1。表1：兩組血液標(biāo)本的hbv dna陽性檢出率的對比組別 例數(shù)hbvdna陽性檢出例數(shù)hbvdna陽性檢出率實(shí)驗(yàn)組 32202 2860.89%對照組 32202 3461.07%p 值p<0.05注：通過對兩組血液標(biāo)本的hbvdna陽性檢出率的比較，p<0.05,表示差 異顯著，具有

8、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明實(shí)驗(yàn)組的hbv dna陽性檢出率明顯高于對照組。3討論窗口期是指從人體感染hiv后到外周血液中能夠檢測出hiv抗體的這段吋間, 一般為2周3個(gè)月，少數(shù)人可到4個(gè)月或5個(gè)月，很少有人能超過6個(gè)月，0 前國際上公認(rèn)的窗口期為6個(gè)月。目前我國采供血機(jī)構(gòu)對獻(xiàn)血者血液標(biāo)本的篩查 的主要模式仍然是elisa。elisa檢測法雖然在-定程度上可以降低輸血傳播疾 病的風(fēng)險(xiǎn)，但由于其的“窗口期”比較長、病毒變異以及免疫靜默感染等因素, 漏檢和輸血安全問題避免不了。nat是美國新研發(fā)的一種血液篩查的檢測方法, 這種新型的檢測方法不僅可以直接檢測岀病毒核酸，明顯縮短了現(xiàn)有的elisa檢 測方法的“窗

9、口期”，而且能檢測出病毒變異和免疫靜默感染，大大降低血液的 漏檢率的同時(shí)也減少了因輸血而感染傳染病的風(fēng)險(xiǎn)，已經(jīng)成為發(fā)達(dá)國家進(jìn)行血液 篩查的必要手段，也是我國采供血機(jī)構(gòu)追求的目標(biāo)。本次研究表明，核酸擴(kuò)增技術(shù)(nat)對hbvdna的陽性檢出率明顯高于雙 試劑酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(elisa),不僅避免了血液篩查中漏檢情況的出現(xiàn)，很大 程度上降低了輸血傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)，而口保證了臨床上的輸血安全，值得在臨床 上推廣應(yīng)用。參考文獻(xiàn)：1李麗，王明元，周群剛，等不同方法制備的血小板在保存期內(nèi)活化狀態(tài) 的研究j臨床輸血與檢驗(yàn).2010, 12 (1)： 1-3.何亞琴，張建偉，楊愛龍，等核酸檢測技術(shù)在常州地區(qū)獻(xiàn)血篩查中的應(yīng) 用卩中國輸血雜志.2011, 24 (7)： 560-562.3黃成垠，蔣昵珍，朱紹汶，等1種血液核酸篩查系統(tǒng)的應(yīng)用評價(jià)j.中國 輸血雜志.2012, 25 (10)： 1010-1011 鄧雪蓮，安萬新，梁曉華，等大連市血液中心血清學(xué)監(jiān)測與核酸檢測并 行的效果觀察j中國輸血雜志.2012, 25 (1)： 38-40.5葉賢林，孫淑君，容瑩，等國產(chǎn)全自動(dòng)血液病毒核酸篩查系統(tǒng)的建立和 應(yīng)用研究j中國感染控制雜志.2010,