牛乳微生物測(cè)定方法

1、微生物的生長(zhǎng)于繁殖的感念生長(zhǎng)微生物細(xì)胞吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，進(jìn)行新陳代謝，當(dāng)同化作用大于異化作用時(shí)，生命個(gè)體的重量和體積不斷增大的過(guò)程。繁殖-生命個(gè)體生長(zhǎng)到一定階段，通過(guò)特定方式進(jìn)行新的生命個(gè)體，即引起生命個(gè)體數(shù)量增加的生物學(xué)過(guò)程。發(fā)育從生長(zhǎng)到繁殖，是生物的構(gòu)造和機(jī)能從簡(jiǎn)單到復(fù)雜、從量變到質(zhì)變的發(fā)展變化過(guò)程，這一過(guò)程稱(chēng)為發(fā)育。個(gè)體生長(zhǎng)微生物細(xì)胞個(gè)體吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，進(jìn)行新陳代謝，原生質(zhì)與細(xì)胞組成的增加為個(gè)體生長(zhǎng)。群體生長(zhǎng)群體中個(gè)體數(shù)目的增加，可以用重量、體積、密度或濃度來(lái)衡量。由于微生物的個(gè)體極小，所以用群體生長(zhǎng)來(lái)反映個(gè)體生長(zhǎng)的狀況。個(gè)體生長(zhǎng)個(gè)體繁殖群體生長(zhǎng)群體生長(zhǎng)=個(gè)體生長(zhǎng)+個(gè)體繁殖平板菌落計(jì)數(shù)法 最常

2、用的活菌計(jì)數(shù)法。將適當(dāng)稀釋的菌液傾注平板或涂布在平板表面，經(jīng)保溫培養(yǎng)后，以平板上出現(xiàn)的菌落數(shù)乘以稀釋度就可以計(jì)算出原菌液的含菌量。直徑9CM的培養(yǎng)皿平板上出現(xiàn)菌落數(shù)一遍以50-500為宜。按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品菌落總數(shù)測(cè)定的計(jì)數(shù)原則，以平板菌落在30-300之間的為報(bào)告依據(jù)。技術(shù)要求：樣品充分混勻，操作熟練快速，一般10-20分鐘完成操作，嚴(yán)格無(wú)菌操作。注意事項(xiàng)：每一支吸管只能用于一個(gè)稀釋度，樣品混勻處理，傾注平板時(shí)的培養(yǎng)基溫度。適用范圍：中溫、好氧和兼性厭氧，能在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)的微生物。誤差：多次稀釋造成的誤差是主要來(lái)源，其次還有由于樣品內(nèi)菌體分布不均勻、以及不當(dāng)操作。微生物的個(gè)體生長(zhǎng)和同步

3、生長(zhǎng)由于微生物細(xì)胞及其微小，研究其個(gè)體生長(zhǎng)存在著技術(shù)上的困難。同步生長(zhǎng)的概念：一個(gè)細(xì)胞群體中各個(gè)細(xì)胞都在同一個(gè)時(shí)間進(jìn)行分裂的狀態(tài)，稱(chēng)為同步生長(zhǎng)。進(jìn)行同步分裂的細(xì)胞稱(chēng)為同步細(xì)胞。同步細(xì)胞群體在任何一時(shí)刻都處在細(xì)胞周期的同一相，彼此間形態(tài)、生化特征都很一致，因而是細(xì)胞學(xué)、生理學(xué)和生化學(xué)等研究的良好材料。二、微生物的群體生長(zhǎng)1、無(wú)分支單細(xì)胞微生物的群體生長(zhǎng)特征無(wú)分支單細(xì)胞微生物主要包括細(xì)菌和酵母菌，其群體生長(zhǎng)是以群體中細(xì)胞數(shù)量的增加來(lái)表示的。由一個(gè)細(xì)胞分裂成為兩個(gè)細(xì)胞的時(shí)間間隔稱(chēng)為世代，一個(gè)世代所需要的時(shí)間就是代時(shí)（Generation G）代時(shí)也就是群體細(xì)胞數(shù)目擴(kuò)大一倍所需時(shí)間，有時(shí)也稱(chēng)為倍增時(shí)間

4、。下圖表示的是一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)若干代分裂后的情況。由下圖可見(jiàn)，每經(jīng)過(guò)一個(gè)代時(shí)，細(xì)胞數(shù)目就增加一倍，呈指數(shù)增加，因而被稱(chēng)為指數(shù)生長(zhǎng)，這就是單細(xì)胞群體生長(zhǎng)的特征。指數(shù)生長(zhǎng)可以用下式表示：2、無(wú)分支單細(xì)胞微生物的群體生長(zhǎng)曲線 以細(xì)菌為例介紹無(wú)分支單細(xì)胞微生物群體生長(zhǎng)規(guī)律，其結(jié)論也基本適用于酵母菌。生長(zhǎng)曲線代表了細(xì)菌在新的環(huán)境中從開(kāi)始生長(zhǎng)、分裂直至死亡的整個(gè)動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。 每種細(xì)菌都有各自的典型生長(zhǎng)曲線，但它們的生長(zhǎng)過(guò)程卻有著共同的規(guī)律性。一般可將生長(zhǎng)曲線分為四個(gè)時(shí)期。時(shí)期的劃分：按照生長(zhǎng)速率常數(shù)（growth race constant）不同1、延滯期（lag phase）其他名稱(chēng)：停滯期、調(diào)整期、適應(yīng)

5、期1.1現(xiàn)象：活菌數(shù)沒(méi)增加，曲線平行于橫軸1.2特點(diǎn)：生長(zhǎng)速率常數(shù)=0細(xì)胞形態(tài)變大或增大細(xì)胞內(nèi)RNA特別是rRNA含量增加，原生質(zhì)嗜堿性增強(qiáng)合成代謝活躍（核糖體、酶類(lèi)、ATP合成加快）、易產(chǎn)生誘導(dǎo)酶對(duì)外界不良條件敏感，如氯化鈉的濃度、溫度、抗生素化學(xué)藥物1.3原因：適應(yīng)新的環(huán)境條件，合成新的酶，積累必要的中間產(chǎn)物。影響延遲期長(zhǎng)短的因素菌種：繁殖速度較快的菌種的延遲期一般較短：接種物菌齡：用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌種接種時(shí)，其延遲期較短，甚至檢查不到延遲期。接種量：一般來(lái)說(shuō)，接種量增大可縮短甚至消除延遲期（發(fā)酵工業(yè)上一般采用十分之一的接種量）培養(yǎng)基成分：在營(yíng)養(yǎng)成分豐富的天然培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的延滯期，比在合成培

6、養(yǎng)基上生長(zhǎng)的時(shí)短。接種后培養(yǎng)基成分有較大的變化時(shí)，會(huì)使延滯期加長(zhǎng)，所以發(fā)酵工業(yè)上盡量使發(fā)酵培養(yǎng)基的成分和種子培養(yǎng)基接近。認(rèn)識(shí)延遲期的特點(diǎn)及形成原因?qū)?shí)踐的指導(dǎo)意義：在發(fā)酵工業(yè)上需要設(shè)法盡量縮短延滯期：采取的縮短延滯期的措施有：A、增加接種量：群體優(yōu)勢(shì)-適應(yīng)性增強(qiáng)B、采用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的健壯菌種：C、調(diào)整培養(yǎng)基的成分，在種子基中加入發(fā)酵培養(yǎng)基的某些成分D、選用繁殖快的菌種 在食品工業(yè)上，盡量在此期間進(jìn)行消毒或滅菌2、對(duì)數(shù)期（logarithmic phase）其他名稱(chēng)：指數(shù)期2.1現(xiàn)象：細(xì)胞數(shù)以幾何級(jí)數(shù)增加，其對(duì)數(shù)與時(shí)間呈直線關(guān)系。2.2特點(diǎn)：生長(zhǎng)速率常數(shù)最大，即代時(shí)最短。細(xì)胞進(jìn)行平衡生長(zhǎng)，菌體大小

7、、形態(tài)、生理特征等比較一致，代謝最旺盛細(xì)胞對(duì)理化因素較敏感2.3影響因素：菌種營(yíng)養(yǎng)成分營(yíng)養(yǎng)物濃度 培養(yǎng)溫度2.4應(yīng)用意義：由于此時(shí)期的菌種比較健壯，增殖噬菌體的最適菌齡；生產(chǎn)上用作接種的最佳菌齡。發(fā)酵工業(yè)上盡量延長(zhǎng)該期，以達(dá)到較高的菌體密度。食品工業(yè)上盡量使有害微生物不能進(jìn)入此期。是生理代謝及遺傳研究或進(jìn)行染色，形態(tài)觀察等的良好材料。3、穩(wěn)定期（stationary phase）又稱(chēng)橫定期或最高生長(zhǎng)期3.1特點(diǎn)：新增殖的細(xì)胞數(shù)和老細(xì)胞數(shù)的死亡數(shù)幾乎相等，微生物的生長(zhǎng)速率處于動(dòng)態(tài)平衡，培養(yǎng)物中的細(xì)胞數(shù)達(dá)到最高值。細(xì)胞分裂速度下降，開(kāi)始積累內(nèi)含物，產(chǎn)芽孢的細(xì)菌開(kāi)始產(chǎn)芽孢。此時(shí)期的微生物開(kāi)始合成次生代謝產(chǎn)物，對(duì)于發(fā)酵生產(chǎn)來(lái)說(shuō)，一般在穩(wěn)定期的后期產(chǎn)物積累達(dá)到高峰，是最佳的收獲期。3.2產(chǎn)生原因：營(yíng)養(yǎng)物尤其是生長(zhǎng)限制因子的耗盡。營(yíng)養(yǎng)物的比例失調(diào)，如碳氮比不合適；有害代謝廢物的積累（酸、醇、毒素等）物化條件（如PH、氧化還原勢(shì)等）不合適；4、衰亡期（decline phase）4.1特點(diǎn)細(xì)胞死亡數(shù)增加，死亡數(shù)大大超過(guò)新增殖的細(xì)胞數(shù)，群體中的活菌數(shù)目急劇下降，出現(xiàn)“負(fù)增長(zhǎng)”。細(xì)胞內(nèi)顆粒更明顯，細(xì)胞出現(xiàn)多形態(tài)，畸形或衰退形，芽孢開(kāi)始釋放。因菌體本