kle-單克隆抗體制備PPT

1、問題：問題：1、什么叫動物細(xì)胞融合？植物體雜交技術(shù)與動物細(xì)胞融合、什么叫動物細(xì)胞融合？植物體雜交技術(shù)與動物細(xì)胞融合有什么不同呢？有什么不同呢？2、動物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們雜交或融合過程、動物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們雜交或融合過程有什么影響？有什么影響？3、動物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？、動物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？兩者的融合過程是否也一樣？兩者的融合過程是否也一樣？動物細(xì)胞融合與單克隆抗體1、動物細(xì)胞融合細(xì)胞融合是正常的生命活動細(xì)胞融合是正常的生命活動兩個細(xì)胞正在融合兩個細(xì)胞正在融合 受精作用受精作用動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合

2、動物細(xì)胞融合細(xì)胞細(xì)胞A細(xì)胞細(xì)胞B雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞滅活的病毒滅活的病毒物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法仙臺仙臺病毒病毒皰疹皰疹病毒病毒新城雞瘟新城雞瘟病毒病毒用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合過程用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核細(xì)胞核病毒顆粒病毒顆粒細(xì)胞核細(xì)胞核細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)：細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)： 因?yàn)闇缁畹牟《灸苁辜?xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂因?yàn)闇缁畹牟《灸苁辜?xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合，不滅質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合，不滅活的話會感染細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。活的話會感染細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。 細(xì)胞融合技術(shù)應(yīng)用于哪些方面？

3、細(xì)胞融合技術(shù)應(yīng)用于哪些方面？ 細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)及制備單克隆抗體。細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)及制備單克隆抗體。2、單克隆抗體什么是抗體？什么是抗體？ 抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。疫功能的球蛋白。B B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。B B淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系：、B B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。、動物體內(nèi)的、動物體內(nèi)的B B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異上的

4、抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。性免疫作用。、每一個淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體、每一個淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。所以傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？所以傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？怎樣解決這個問題？怎樣解決這個問題？ 抗體抗體單克隆抗體單克隆抗體 由單個由單個B B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。纬苫蛐拖嗤募?xì)殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。隆抗體。 特點(diǎn)：特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高特異性強(qiáng)、靈敏度高 如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？如何大

5、量生產(chǎn)單克隆抗體？ 利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能 利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性 利用細(xì)胞融合的技術(shù)將利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融兩種細(xì)胞融合合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的性的雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞交瘤細(xì)胞如何篩選？如何篩選？融融合合方方式？式？ 細(xì)胞兩兩融合后，有哪細(xì)胞兩兩融合后，有哪些類型？些類型？ HAT是次黃嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤（aminopterin）和胸腺嘧啶脫氧核苷（thymidin）三種物質(zhì)各英文首字，HAT培養(yǎng)基

6、也就是指含有這三種物質(zhì)的細(xì)胞培養(yǎng)基。細(xì)胞合成細(xì)胞合成DNA的原料的原料脫氧核苷酸脫氧核苷酸的的合成具有兩個途徑：合成具有兩個途徑：1、起始合成（起始合成（de novo pathway D途途徑）徑）2、補(bǔ)救（亦稱替代或稱中間）合成途、補(bǔ)救（亦稱替代或稱中間）合成途徑，（徑，（salvagepathway S途徑）途徑）即即用用“次黃嘌呤（次黃嘌呤（H）”和和“胸腺嘧啶胸腺嘧啶脫氧核苷（脫氧核苷（T）”為原料進(jìn)行為原料進(jìn)行補(bǔ)救合成。補(bǔ)救合成。 用用HGPRTHGPRT型型瘤細(xì)胞，即缺乏瘤細(xì)胞，即缺乏次黃嘌呤次黃嘌呤-鳥鳥嘌呤嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（hypoxanthine-guan

7、ine phosphoribosyl transferase）缺陷型缺陷型 變異株瘤細(xì)變異株瘤細(xì)胞（胞（本身本身無補(bǔ)救無補(bǔ)救合成途徑合成途徑無無S途徑，途徑， 只有起只有起始合成始合成途徑途徑有有D途徑），與脾臟的途徑），與脾臟的B細(xì)胞融合。細(xì)胞融合。瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞本身本身無補(bǔ)救無補(bǔ)救合成途徑（合成途徑（Salvage pa-thway）（不能利用培養(yǎng)基中的）（不能利用培養(yǎng)基中的H 和和T ），只有），只有起始合成起始合成途徑途徑D途徑合成途徑合成DNA。（瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞無無氨基喋呤時(shí)）只能利用氨基喋呤時(shí)）只能利用起始起始合成途徑（合成途徑（De novo pathway） D途徑途徑（利用谷酰胺

8、與（利用谷酰胺與尿尿核苷酸單磷酸）核苷酸單磷酸） 合合成成DNA；有有氨基喋呤（氨基喋呤（A），則，則 D途徑途徑被氨基喋呤所阻斷。被氨基喋呤所阻斷。 雜交瘤細(xì)胞具有來自脾淋巴細(xì)胞的兩個途徑，兩個途徑，次黃嘌呤次黃嘌呤-鳥嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)移酶HGPRT ，起始起始合成途徑（De novo pathway），被被氨基喋氨基喋呤呤所阻斷。但還所阻斷。但還有補(bǔ)救有補(bǔ)救合成途徑（合成途徑（有有S途途徑）起作用。徑）起作用。脾淋巴細(xì)胞與雜交瘤細(xì)胞一樣：，兩個途徑中，起始起始合成途徑D途徑（De novo pathway），雖被氨基被氨基喋呤所阻斷，但還有喋呤所阻斷，但還有補(bǔ)救補(bǔ)救合成途

9、徑（合成途徑（S途途徑）。徑）。但是，本身是高度分化的細(xì)胞，不能分但是，本身是高度分化的細(xì)胞，不能分裂。裂。次黃嘌呤“次黃嘌呤次黃嘌呤”(英語英語:Hypoxanthine)也稱也稱“6-羥基嘌呤羥基嘌呤”,是一種天然存在的嘌呤衍生物。是一種天然存在的嘌呤衍生物。6-氨氨基嘌呤，就是腺嘌呤?；堰?，就是腺嘌呤。 陽性陽性孔孔 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 HAT篩選篩選大量培養(yǎng)大量培養(yǎng)PEGPEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合B 脾脾骨髓瘤骨髓瘤瘤瘤 關(guān)鍵一步關(guān)鍵一步單克隆抗體（單克隆抗體（McAb）單克隆抗體制備過單克隆抗體制備過程程 單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程 注射抗原注射抗原B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)

10、胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體思考：思考：1 1、本過程利用了哪些原理？、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理2 2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B B細(xì)胞融合細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有的遺傳物質(zhì)，不僅具有B B

11、細(xì)胞分泌抗體的能細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體得大量單克隆抗體單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。應(yīng)用主要有：應(yīng)用主要有：1 1、臨床診斷、臨床診斷2 2、作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成、作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”治療腫瘤治療腫瘤資料：資料：目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。許多缺乏良好目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單診斷手段的傳染病、免

12、疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)克隆抗體作為診斷手段，是一個必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位體內(nèi)“病灶病灶”也引起人們的注意，目前，主要用也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。 結(jié)合同位素的單抗結(jié)合同位素的單抗-生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合的比較植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞膜的流動細(xì)胞膜的流動性性

13、細(xì)胞融合的方法去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)方法物理（離心、振蕩、物理（離心、振蕩、電刺激）電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方物理、化學(xué)方法（同左）法（同左）滅活的病毒滅活的病毒用途獲得雜種植株獲得雜種植株制備單克隆抗制備單克隆抗體體小結(jié)：小結(jié)：兩個過程兩個過程動物細(xì)胞培養(yǎng)過程動物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個三個“一一”一個誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法滅活一個誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法滅活病毒病毒一個新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性 強(qiáng)、

14、靈敏度高的優(yōu)勢強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢1.動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）A動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合B胚胎移植胚胎移植C動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)D核移植核移植課堂訓(xùn)練課堂訓(xùn)練在動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正在動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是確的是（）（）A結(jié)果是相同的結(jié)果是相同的B雜種細(xì)胞的形成過程基本相同雜種細(xì)胞的形成過程基本相同C操作過程中酶的作用相同操作過程中酶的作用相同D誘導(dǎo)融合的手段相同誘導(dǎo)融合的手段相同. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，誘

15、導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（ ） 淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞A BC D C 4、下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)、下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案(2)、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？(4)、圖中、圖中B為為_過程，常用過程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承承_的遺傳特性，既能的遺傳特性，既能_,又能又能_。(1)、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是_ _ (3)、A是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_(5)、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括過程指細(xì)胞