肌酸激酶MB型同工酶測定SOP_CKMB臨床意義

1、版本號:1檢測原理ckmm同工酶的活性受-種ck-m亞單位的特異抗體的抑制。ckmb的ck-b亞單位的活性則得到 測定。ck催化磷酸從磷酸肌酸到腺昔二磷酸(adp)的可逆的轉(zhuǎn)磷酸過程，產(chǎn)生腺昔三磷酸(atp) o 在由己糖激酶(hk)進行催化的反應(yīng)屮atp對葡萄糖進行磷酸化，生成葡萄糖-6-磷酸鹽。然后，用 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶來催化葡萄糖-6-磷酸鹽和煙堿腺卩票吟二核廿酸(nad+)的反應(yīng)，生成還原的煙 堿腺嚟吟二核昔酸(nadu) o單磷酸腺昔(amp)和1,5-二腺#-5-五磷酸(ap5a)被添加來抑制 腺昔酸激酶。由于形成nadph而在340 nm處發(fā)生的吸光度變化，與ck-b亞單位

2、的活性成正比，可 以使用雙波長(340, 405 nm)技術(shù)來測量。肌酸+ atp磷酸肌酸+ adpatp +葡萄糖adp +葡萄糖-6-磷酸鹽m計+葡萄糖-6-磷酸鹽+ nadg-6-pdii爐-磷酸葡萄糖酸+ nadph + (h)2標(biāo)本采集與處理2. 1采血方法空腹采不抗凝靜脈血23ml。2. 2標(biāo)木保存采集后應(yīng)及時送檢。如果不能及時送檢，應(yīng)將標(biāo)本及時離心后分離血清，-20°c可保存30d。2. 3注意事項推薦選用血清。不應(yīng)使用含有edta、肝素鈉或草酸鉀的采血管。酶活性的高低易受標(biāo)本采集時間 的影響較大。避免溶血、脂血、黃疸。3試劑和設(shè)備3.1試劑采用西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品(上海

3、)有限公司提供的試劑盒。3. 1. 1試劑組成試劑船 1 5孔為磷酸肌酸 13 mm,葡萄糖 12 mm, nad+ 1. 6 mm, adp 1. 5 mm, amp 7. 1 mm, ap5a 6. 1 um, n-乙酰半胱氨酸23 mm,片劑;6孔為抗ck-mo. 25mg/ml, s糖激酶4. 5u/ ml,葡萄糖-6-磷酸脫 氫酶2. 7 u/ mb,緩沖液，液體。3. 1.2試劑準(zhǔn)備直接使用。肌酸激酶同工酶測定版本號：3. 1.3試劑保存試劑2-8°c保存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。3. 2質(zhì)控品美國biorad液體多項質(zhì)控品。3.3校準(zhǔn)品西門子校準(zhǔn)品。3. 4儀器siemens d

4、imension xpand plus/rxl max 全 口動生化分析系統(tǒng)。4操作程序4.1檢測過程流程簽收樣品一離心-> 上機檢測一審核報告一簽發(fā)報告一標(biāo)本保存。4. 2樣品簽收嚴(yán)格按照標(biāo)本接收程序簽收標(biāo)本。4. 3標(biāo)本處理以2500-3000r/min,離心6lomin,分離血清上機測定。如不能及時檢測，分離血清于2-8°c保存。4.4標(biāo)本檢測4. 4. 1手工編排測試項目：樣品按編號裝入樣品架，主屏幕按fkenter data,在position處輸入樣 品所在樣品架字母及所在位置號，按enter,在patient name處選擇性輸入病人名字，按enter,在samp

5、le no處輸入樣品號，按enter,在tests處使用檢驗鍵或檢驗組合鍵選擇相應(yīng)項目，根據(jù)需要選擇相應(yīng)的 按鍵改變mode （按f7:mext mode選擇樣品管類型）、priority （按f4:next priority選擇樣品的 處理模式）、fluid （按f8:next fluid選擇標(biāo)木類型）。4.4.2雙向條形碼標(biāo)本分離血清后直接運行儀器。4. 4.3運行：輸入完畢后按f3:load list,確認(rèn)樣品已經(jīng)裝載在樣本盤上，按run鍵，儀器開始進行 樣品檢測。4. 4. 4檢驗后標(biāo)本保存標(biāo)本檢驗完成后用釆血管原蓋蓋緊，保存于標(biāo)本冷藏庫內(nèi)，按日期放好，保存期為7天。5校準(zhǔn)程序5. 1

6、校準(zhǔn)品準(zhǔn)備和儲存直接使用，28 °c保存。5. 2校準(zhǔn)條件在室內(nèi)質(zhì)控失控、更換試劑批號、更換儀器主要配件或進行大保養(yǎng)后均需校準(zhǔn)。無特殊情況校準(zhǔn) 周期為3個月。肌酸激酶同工酶測定版本號:5. 3校準(zhǔn)程序主屏幕按 f5: process ctrl-f1: calibration,按 enter-f2: set-up & run,按項冃鍵選擇所需耍校準(zhǔn)的項h名稱method,選中相應(yīng)試劑批號lot,輸入操作者姓名operator.校準(zhǔn)液貨號calibratorproduct和批號lot,以及最低值校準(zhǔn)液在樣品架上的位置start at position,最后把校準(zhǔn)液各個水平的值按照

7、由低到高的順序輸?shù)綄?yīng)位置，按f4： assign cups指定樣品杯，校準(zhǔn)液按順序排列在樣品架匕 按f7： load/run-f4： run或“run”運行鍵運行校準(zhǔn)程序。6質(zhì)量控制程序6. 1質(zhì)控品準(zhǔn)備和儲存質(zhì)控品為液體，可以直接使用。原包裝質(zhì)控品-1070°c可保存到瓶身有效期，未開啟2-8°c可保 存90d,開啟后28°c可保存30d。6. 2質(zhì)控水平和分析批長度每24小至少進行-批，每批2個濃度水平。6. 3質(zhì)控操作程序與4.4標(biāo)本檢測步驟相同，只需要按f4:next priority將routine修改成qc狀態(tài)。7性能參數(shù)本法線性范圍為0 125u/l,對于超過測定線性范圍的結(jié)果，用酶稀釋液對標(biāo)本進行稀釋，輸入稀 釋因子后再重新檢測。8生物參考區(qū)間0 6u/l。9臨床意義ck-mb主要用于診斷急性心肌梗塞、癲癇發(fā)作后、新生兒產(chǎn)后窒息缺氧嚴(yán)重等。ck-mb在急性心肌 梗塞38h升高，930h達(dá)到峰值，4872h恢復(fù)正常。若三項指標(biāo)（cktib、ast、ldh）均升高，心 肌損傷的可能性很大。但ck-mb對心肌并非完全特異