試驗室常用試劑配制

1、細胞培養(yǎng)PBS配方PBS即磷酸鹽緩沖生理鹽水，都是含有HPO-、HPO緩沖體系和NaCI,用于調(diào)節(jié) 滲透壓，達到與人體相當?shù)乃剑譃楹涬x子和不含鉀離子兩種。1、不含鉀離子的PBS配方（由NaCI, NaHPO和NaHPQ三種成分組成，用于其 它實驗緩沖和稀釋用） 母液的配制：0.2M NazHPQ:稱取 71.6g Na 2HPQI2H2O,溶于 1000ml 水0.2M NaHPQ:稱取 31.2g NaH 2PQ-2H2Q,溶于 1000ml 水 各種濃度PB(pH=7.4)的配制：先配 0.2M PB( pH=7.4, 100ml):取 19ml 0.2mol/L 的 NafPQ,

2、81ml 0.2mol/L 的NazHPQ,即可。然后 只需將0.2M PB （ pH=7.4）按相應(yīng)比例適當稀釋 即可，如：0.1M PB（ PH=7.4）:取 500ml 0.2M PB，加水稀釋至 1000ml 即可。0.01M PB （ PH=7.4）:取 50ml 0.2M PB，加水稀釋至 1000ml 即可。0.02M PB （ PH=7.4）:取 100ml 0.2 M PB，加水稀釋至 1000ml 即可。配好后加入NaCI至0.9% （g/100ml ）即可。*其他各種另 PH值的0.2M PB（ 100ml）配方pH0.2M NaH2PQ4(ml)0.2M Na2HPQ4

3、(ml)5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419817.516847.613877.710.50.57.88.591.57.97938.05.3942、含鉀離子的PBS配方（由NaCI, KCI, NaHPO和KHPQ四種成分組成，一般 用于組織培養(yǎng)）0.01M磷酸鹽緩沖液（PBS配制方法：（免疫組化常用）稱取 8g NaCI、0

4、.2g KCI、1.44g Na 2HPG 0.24g KH2PQ,溶于 800ml 蒸餾水中，用HCI調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1L即可，高壓滅菌。需要注意的是，通常所說的濃度0.01M指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度， 而 非Na離子或k離子的濃度，Na離子和K離子只是用來調(diào)節(jié)滲透壓的。常用 PBS NaCI8.5g ，NaHPQ 2HK 0.8736g ，NaHPO 12HO-5.531g ，800ml三蒸水攪拌，無需調(diào)PH 1L定容。DMEI培養(yǎng)基：DME干粉溶入800mI三蒸水中，加入3.7g NaHCQ，攪拌后調(diào)PH至7.27.4，最終用1000ml容量瓶定容，無

5、菌層流間中過濾分裝。1640培養(yǎng)基：1640干粉溶入800mI三蒸水中，加入2.0g NaHCQ,攪拌后調(diào)PH至7.27.4，最終用1000mI容量瓶定容，無菌層流間中過濾分裝。胰酶：濃度為0.25%0.4%通常是用生理鹽水或PBS等平衡鹽溶液作為溶劑 胰酶（含EDTA：普通胰酶中額外加入0.01%0.02%勺EDTA 細胞凍存液：多數(shù)細胞配方為10%DMSQ+2血%清 +70%田胞培養(yǎng)基，也有介紹直接10%DMS加 90%含血清培養(yǎng)液，部分細胞需 10%DMSQ+9tt清。理論上血清越多凍存效果越好谷氨酰胺：標準的谷氨酰胺100X液為200mmol/L（29.22g/L）。通常培養(yǎng)液中 濃度

6、為14mmol/L （0.1460.5844g/L ）, 4°C下半衰期為7天，兩周以上需要重 新加入。雙抗：青霉素 100IU/ml （通常培養(yǎng)液中終濃度為 20100IU/ml 均可），鏈霉 素100ug/ml （通常培養(yǎng)液中濃度為50ug/ml）。多數(shù)體外培養(yǎng)都是使用青霉素和鏈霉素，上述的工作濃度可在 37oC 長時間控制輕度污染而對細胞無毒性作 用。MTT 0.5克MTT溶于無酚紅的培養(yǎng)基中（就用培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基） ，濃度為 5mg/ml,過濾除菌，4C避光保存。在配制和保存的過程中，容器最好用黑紙包 住。保質(zhì)期為兩周。臺盼藍染色液 ：稱取 2g 臺盼藍，加入少量雙蒸水研磨粉

7、碎后，加水至50ml，離心取上清，加入1.8% Nacl溶液至100ml,即成工作液。蘇木精染液：1.藥品：蘇木精2g,硫酸鋁5g，碘酸鉀（鈉）0.2g，乙醇（95%100% 250ml，蒸餾水750ml，丙三醇50ml，檸檬酸0.3g。2.方法步驟：將硫酸鋁溶于蒸餾水中，成為飽和的A液；將蘇木素溶于乙醇 中，充分搖勻為B液;A液與B液混合使其均勻；將氧化劑碘酸鉀（鈉）加入 到混合液中，充分搖勻；放置5分鐘后，依次加入丙三醇（中和劑）和促染劑 檸檬酸，再震蕩數(shù)分鐘，放置過夜后即可使用。多聚甲醛：4g多聚甲醛+100ml生理鹽水，在60°C水浴加熱并攪拌，逐滴加入1mol/L的NaOF

8、至溶液突然澄清，調(diào)PH至78,普通濾紙過濾，4°C備用。10%畐爾馬林:10ml甲醛溶液+90ml蒸餾水，混勻瓊脂糖凝膠電泳5X TBE貯存液：配制 1000 ml: Tris 54g ,硼酸27.5g ,0.5 mol/L EDTA 20ml, 定容至 1000ml,調(diào)PH=8.00.5 X TBE使用液：取5ml 5 x TBE1存液，加入45ml雙蒸水，混勻1%（ 1.5 %）凝膠配制：錐形瓶中加入45ml （60ml） 0.5 x TBE緩沖液，稱 取0.45g（0.6g）瓊脂糖放入錐形瓶中，置微波爐中2min中火加熱至完全融化，取 出搖勻。Western Blot30%睹備

9、膠（丙烯酰胺/甲叉雙丙烯酰胺）：29g丙烯酰胺、1g甲叉，加雙 蒸水至100ml，用濾紙過濾，于密閉棕色瓶中4°C中保存。（神經(jīng)毒劑，必須戴手 套口罩）Tris ?HCl （分離膠緩沖液， PH8.8）： Tris 18.15g 溶于三蒸水，濃鹽酸調(diào) PH至8.8，定容至100ml,40C保存一個月。Tris ?HCl （濃縮膠緩沖液，PH6.8）: Tris 6.05g溶于三蒸水，濃鹽酸調(diào)PH 至6.8定容至100ml,40C保存一個月。10%SDS10gSDS容于三蒸水中，定容至100ml，68°助溶TEMED成品 TEMED電極緩沖液 ： SDS 1g、 Tris 3

10、.03g 、甘氨酸 18.8g ，加雙蒸水至 1000ml10%寸硫酸銨溶液（AP： 0.1g過硫酸銨溶于1ml三蒸水中，現(xiàn)用現(xiàn)配轉(zhuǎn)膜緩沖液：SDS 0.37g、Tris 5.8g、甘氨酸2.9g，溶于三蒸水中，200ml甲醇，定容至1000mlTBST Tris:2.42g Nacl:8.8g,20%Tween 20:0.5ml,三蒸水溶解，定容至 100 ml.封閉液:0.5g脫脂奶粉+10mlTBST 不同濃度凝膠測定蛋白質(zhì)分子量的比較分離膠濃度8%10%12%15%濃縮膠濃度3. 5%3. 5%3. 5%3. 5%凝膠性質(zhì)較軟適中適中適中蛋白質(zhì)分子量120-150kd60kd左右15-45kd20k